Un método de inmunofluorescencia para medir la neutralización del citomegalovirus humano

Tome diluciones seriadas de anticuerpos específicos para el citomegalovirus humano o HCMV.

Al agregar HCMV, los anticuerpos se unen a la glicoproteína B en la envoltura viral, neutralizando el virus.

Transfiera la mezcla a fibroblastos humanos e incube.

Un complejo de glicoproteína trímera en los virus no neutralizados se une a receptores celulares específicos, desencadenando la fusión de la membrana virus-huésped mediada por la glicoproteína B y liberando la nucleocápside que contiene ADN genómico en su interior.

El genoma liberado entra en el núcleo, codificando proteínas inmediatamente tempranas localizadas en el núcleo, o IE.

La neutralización de anticuerpos evita la entrada del virus en las células.

Eliminar los virus no internalizados. Tratar con etanol a una temperatura bajo cero para fijar y permeabilizar las células.

Introducir un anticuerpo primario que se une a las proteínas IE.

Agregue un anticuerpo secundario conjugado con fluoróforos que se une al anticuerpo primario y una tinción fluorescente que se une al ADN.

Bajo un microscopio, detecte células de doble tinción que están infectadas con virus. Calcular el porcentaje de células infectadas para determinar la neutralización del virus a las diferentes concentraciones de anticuerpos.