Evaluación del equilibrio del motor y la coordinación en ratones utilizando la barra de equilibrio

Los déficits en la coordinación motora fina puede ser evaluada con la prueba de barra de equilibrio. Desempeño en la viga se cuantifica mediante la velocidad a la que se recorre la viga y el número de veces que el ratón se desliza sobre la viga.

El objetivo general de este procedimiento es evaluar la coordinación motora y el equilibrio en ratones. El primer paso es ensamblar una barra de equilibrio con la posición del detector de movimiento para registrar la latencia del cruce de la viga para comenzar el entrenamiento de los maer colocados en el punto de partida de la barra de equilibrio y permitidos para cruzar a una plataforma segura. A veces es necesario animar al animal a lo largo de la viga hacia el punto final.

Después de un intervalo entre pruebas de 10 minutos, Maer entrenó en un haz más estrecho para permitir una mayor sensibilidad. El paso final del procedimiento es probar los animales entrenados en vigas de diferentes anchos. En última instancia, se pueden obtener resultados que muestran déficits en la coordinación motora y el equilibrio.

Hola, soy Tim Luong y soy candidato a doctorado en el departamento de biología del Instituto de Tecnología de California. Soy Holly Carlisle y soy postdoc en el Instituto de Tecnología de California en el departamento de biología, y hoy vamos a mostrarles cómo evaluar el equilibrio y la coordinación motora en ratones utilizando la prueba de barra de equilibrio. Ahora bien, la principal ventaja de esta técnica en comparación con otros métodos como la varilla del rotor, es que la prueba de la barra de equilibrio tiende a ser más sensible incluso a déficits sutiles en la coordinación motora.

Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo del comportamiento, como si nuestra coordinación motora y equilibrio se ven afectados en ciertos modelos de enfermedades neurológicas y si nuestros déficits motores se alivian con tratamientos particulares. El propósito de esta prueba es medir la cantidad de tiempo que tarda un ratón en cruzar el haz sin detenerse o detenerse y sin que el investigador se lo pida. Con el fin de obtener una carrera limpia el día de la prueba, entrenamos durante dos días antes de la prueba.

La demostración visual de este método es útil, ya que la forma en que se manejan y ayudan a los ratones a cruzar el haz puede ser difícil para aquellos menos familiarizados con las pruebas de comportamiento. Así que comencemos. Este protocolo se basa en los de Southwell, etal y Carter etal.

El aparato se ensambla apoyando una viga de un metro de largo entre dos postes de 50 centímetros de altura. Las vigas tienen una superficie plana de seis o 12 milímetros de ancho. Los haces de mayor anchura se pueden utilizar para ratones más grandes y aquellos que no pueden cruzar los tamaños más estrechos.

Se coloca una caja negra en el extremo del haz y se coloca material de anidación dentro de la caja negra para animar al ratón hacia el punto de llegada, iluminar el punto de partida con una lámpara para que sirva de estímulo aversivo. Los detectores de movimiento se colocan a cero y 80 centímetros para registrar la latencia del cruce de la viga, estirar una hamaca de nailon por debajo de la viga y aproximadamente 7,5 centímetros por encima de la mesa para amortiguar cualquier caída. Los ratones utilizados en este procedimiento se alojan en un ciclo de luz y oscuridad de 12 horas y han sido aclimatados durante dos semanas antes de la prueba.

Introducir los animales en la sala de pruebas aproximadamente 10 minutos antes de comenzar el experimento y utilizar una cohorte de al menos 10 ratones por condición de prueba para obtener los mejores resultados. Para comenzar el entrenamiento, coloque un mouse en la ubicación de inicio de un haz de 12 milímetros de ancho. El temporizador se inicia cuando la nariz del ratón entra en el centro 80 centímetros y se detiene cuando el animal llega al final de los 80 centímetros.

Los ratones deben cruzar la viga con una cantidad mínima de parada o pérdida. Si el animal deja de avanzar, anímelo a continuar empujándolo suavemente por detrás. Una vez que el animal haya atravesado con éxito la viga, retírelo de la caja de seguridad y colóquelo nuevamente en la jaula de inicio durante 10 minutos antes de comenzar la siguiente sesión de entrenamiento.

La barra de equilibrio y la caja se limpian y se limpian con etanol al 70% antes de introducir el siguiente ratón. Cada ratón se entrena en el haz de 12 milímetros de ancho tres veces, seguidas de entrenamiento en el haz de seis milímetros de ancho. Un entrenamiento adicional de tres veces puede aumentar la aparición de estancamiento a medida que el animal se familiariza más con la tarea y el aparato.

Por otro lado, si los ratones no logran atravesar todo el haz con éxito después de dos días de entrenamiento, es posible que se requiera un entrenamiento adicional. Asegúrese de registrar las mediciones de referencia antes de que los animales reciban cualquier tratamiento. Una vez finalizado el entrenamiento del día, regrese a los ratones a sus jaulas domésticas en el centro de retención.

El día de la prueba, lleve a los animales a la habitación 10 minutos antes de comenzar el experimento como se muestra anteriormente, coloque un mouse en la ubicación de inicio y registre la latencia para que el animal atraviese el centro de 80 centímetros del haz. Los datos se reportan como el promedio de dos ensayos exitosos en los que el ratón cruzó directamente hasta el final sin detenerse y sin insistir por parte del investigador. Las grabaciones de vídeo se pueden utilizar para un análisis más preciso del deslizamiento y otros déficits motores observables.

En este ejemplo, se probaron ratones C 57 black six de nueve a 11 semanas de edad en haces de 12 milímetros y seis milímetros de ancho. El tiempo promedio para cruzar el haz de 12 milímetros de ancho fue de 4,6 más o menos 0,4 segundos para los hombres, y de 3,3 más o menos 0,3 segundos para las mujeres, los tiempos en el haz de seis fueron de más o menos 0,7 segundos para los hombres y de 5,9 más o menos 0,5 segundos. Para las mujeres.

El rendimiento de la barra de equilibrio puede variar según la edad y la cepa de los ratones. Los ratones C 57 negro seis utilizados en este ejemplo son típicamente animales activos, se observaron algunos resbalones, pero no se observaron caídas para estos ratones y animales manipulados genética o farmacológicamente, los resbalones y caídas pueden volverse más frecuentes y se pueden cuantificar. Los ratones deteriorados pueden aferrarse al costado del haz, lo que aumenta su tiempo para cruzar mientras intentan este procedimiento.

Es importante ser persistente y constante al incitar a los ratones a avanzar si se detienen o se distraen en el haz. Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo entrenar a los ratones para cruzar la barra de equilibrio y evaluar su equilibrio y coordinación. Gracias por mirar y espero que te haya resultado útil.