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Coloque una rejilla de microscopía electrónica de transmisión o TEM recubierta de resina de polivinilo formal sobre una película de plástico limpia.
Agregue una suspensión de vesículas extracelulares concentradas y purificadas o EV, partículas de tamaño nanosado unidas a la membrana, en la rejilla.
Estas VE son secretadas por cianobacterias y transportan macromoléculas dentro de sus membranas.
Incube la rejilla para permitir que los vehículos eléctricos se adsorban en su superficie recubierta de resina.
Toque el borde de la rejilla con un papel de filtro limpio para absorber el exceso de suspensión.
Flote la rejilla sobre acetato de uranilo para teñir las vesículas adheridas.
El acetato de uranilo rodea las vesículas, creando un contorno oscuro que mejora el contraste durante la obtención de imágenes.
Retire la rejilla y use papel de filtro para absorber el exceso de mancha.
Lave la rejilla con agua ultrapura para eliminar cualquier mancha residual. Repita el lavado y luego déjelo secar al aire.
Finalmente, visualice los VE usando TEM para evaluar su morfología, tamaño y pureza.
Aplique con cuidado cinco microlitros de vesícula y déjela reposar durante cinco minutos. Retire la muestra tocando el borde de una rejilla con un trozo de papel de filtro limpio.
Pipetee de 20 a 50 microlitros de acetato de uranilo al 2% sobre una superficie plana cubierta por una película de plástico. Luego coloque la rejilla flotando encima durante dos minutos. Retire el acetato de uranilo con papel de filtro y flote brevemente sobre una gota de agua ultrapura para lavar.