חוט השדרה Electrophysiology II: ייצור תאי אלקטרודה יניקה

Hi.My קוראים Resh Gary Dory, ואני עוזר מחקר במעבדת ה-FAF של מכון סאלק למחקרים ביולוגיים. היום אראה לכם כיצד לייצר אלקטרודות יניקה חוץ-תאיות בשתי שיטות. ניתן להשתמש באלקטרודות אלה כדי לבצע הקלטות אלקטרופיזיולוגיות של חוט השדרה שלי במבחנה.

השתמש במנורת אלכוהול כמקור חום כדי להמיס את צינור הפלסטיק PE 90 לרוחב הרצוי. החזק את הצינור מעל הלהבה הדולקת והסר כשהוא מתחיל להימס, משוך בעדינות את הקצוות זה מזה, היזהר לא לשבור את האמצע. תהליך זה מוצג שוב.

הסר את הצינור כשהוא מתרכך ונמס ומשוך בעדינות את הקצוות זה מזה. חותכים את הצינור בעזרת סכין גילוח חד בנקודה המתאימה לרוחב המשוער של הדגימה שיש למדוד בקצה העבה של הצינור. בצע חתך בזווית של 45 מעלות.

כעת יש להתקין טבעת פרא ו-O על הקצה העבה. הכנס קצה זה של הצינור דרך הפתח המשושה של הפרא. לאחר מכן הכנס את קצה הצינור לטבעת ה- O הגומי.

התקנה זו תוברג בקדמת האלקטרודה. חותכים באורך סנטימטר אחד של צינור קטן של זאוס בעזרת סכין גילוח חד ובודקים את הקצוות לאיתור חתך נקי וחזיר בר פתוח חותכים חתיכה של 10 ס"מ מצינור PE 90 בעזרת סכין גילוח חד. הנח טיפה של ריתוך JB על נקודת האמצע של הצינור הקטן באמצעות יניקת פה.

משוך את הצינור הקטן ואת הריתוך לתוך הקידוח של הצינור הגדול ואפשר להתקנה זו להתרפא בן לילה. למרות שהוא לא מוצג, יש לבצע חתך של 45 מעלות בקצה העבה של צינור זה, ולהתקין טבעת פרא ו-O בקצה זה. באותו אופן שהוצג קודם לכן.

פרק אלקטרודת יניקה רגילה, שחרר את הפרא מהקצה הקדמי של האלקטרודה ואת מחבר ה- BNC מאחור. כעת יש ליצור יציאת צד זוויתית תחתונה בצד קנה האלקטרודה. מחממים חתיכת מתכת בעזרת לחמנייה ומבער.

לחץ את המתכת המחוממת לתוך החור הקיים בצד הקנה בזווית נמוכה. הסר את חוט הכסף ממחבר ה-BNC על ידי משיכת החוט במקום שבו הוא נפגש עם המחבר. השרו את מחבר ה-BNC בקסילן למשך שעה כדי להסיר את השעווה.

לאחר הסרת השעווה, שטפו את המחבר במים וייבשו במגבות נייר. חותכים חוט כסף באורך 15 סנטימטר. משרים את החוט באקונומיקה למשך 15 דקות.

לאחר מכן שוטפים ומייבשים במגבות נייר. הלחמו את חוט הכסף למחבר BNC. הכנס את חוט הכסף לקצה האחורי של חבית אלקטרודת היניקה, והשאיר מספיק מקום למחבר ה-BNC להישאר בצד.

הכנס את צינור היניקה לפתח הצד כשלושה סנטימטרים. הזרקו איטום סיליקון לפתח האחורי של אלקטרודת היניקה תוך מניעת שפיכתו החוצה מהיציאה הצדדית על ידי כיסויו באצבע. הזרקו חומר איטום כשניים עד שלושה סנטימטרים לתוך חבית האלקטרודה.

לאחר שנכשל, הברג היטב את מחבר ה- BNC למקומו, מה שידחוף את חומר האיטום קדימה. תן לאיטום להתרפא בן לילה. הברג את הפרא של הצינור שנוצר בשיטת הקצה הנמשך או הקצה החתוך על החלק הקדמי של יישור האלקטרודה.

הצינור יעזור להקל על חוט הכסף דרך האלקטרודה הושלם כעת. מערך ההקלטה ממוקם בתוך כלוב פאראדיי כדי להפחית הפרעות חיצוניות. ההתקנה שלנו הונחה גם על שולחן אוויר כדי למנוע הפרעות מכניות.

האלקטרודות מותקנות על מעמד מגנטי מיקרו מניפולטורים ומונחות ליד צלחת ההקלטה. הכבלים הקואקסיאליים של BNC מחוברים לשלב ראש המחובר למגבר. המגבר מחובר למתאם poly view, המחובר למחשב.

הגדרה זו מוצגת מקרוב. הכבלים הקואקסיאליים של BNC מחוברים לשלב ראש. שלב הראש מחובר למגבר.

פלט המגבר יוצא מכלוב פאראדיי ומחובר למתאם תצוגה פולי. מתאם ה-poly view מחובר למחשב שבו מותקנת תוכנת ההקלטה המתאימה. ההתקנה כולה חייבת להיות מקורקעת כהלכה.

קרקע חיצונית נוצרת על ידי חיבור כלוב פאראדיי ושולחן האוויר לקרקע. קרקע פנימית נוצרת על ידי חיווט צלחת הדיסקציה לשלב הראש. כמו כן, יש צורך לקרקע את דלתות הכלוב לגוף הראשי.

עם ההגדרה הנכונה ניתן כעת לאסוף נתונים. תודה שצפית בסרטון זה ועזרת לו לסייע לך בניסויים העתידיים שלך.