Microscopía TIRF para visualizar la dinámica de acoplamiento de actina y microtúbulos
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 7:27 min. • July 8th, 2025
Los monómeros de actina se polimerizan de la cabeza a la cola para formar fibras delgadas, llamadas microfilamentos. De manera similar, los dímeros de tubulina se polimerizan en microtúbulos cilíndricos huecos más largos. Estos componentes del citoesqueleto mantienen la forma celular y facilitan la motilidad celular.
Para visualizar la dinámica de acoplamiento actina-microtúbulos mediante microscopía de reflexión interna total, TIRF, tome un conjunto de imágenes personalizado.
El conjunto de imágenes consta de dos cubreobjetos: un cubreobjetos superior recubierto de silano m-PEG y un cubreobjetos inferior recubierto de biotina-PEG recubierto de silano. Los dos cubreobjetos se espacian longitudinalmente con cinta adhesiva de doble cara y se sellan en ambos extremos para crear un canal de flujo.
Pipetee BSA en el canal de flujo para cebar la cámara. Agregue la solución de estreptavidina e incube. Las moléculas de estreptavidina se unen a las moléculas de biotina unidas al PEG-silano del cubreobjetos inferior.
Fluya el búfer TIRF hacia el canal. Agregue una solución de mezcla de citoesqueleto que contenga dímeros de tubulina marcados con fluoróforo verde y sin marcar, junto con monóme
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