Identificación de subconjuntos de células T reguladoras de ganglios linfáticos drenantes pancreáticos murinos

Las células T reguladoras, o Tregs, son una subpoblación especializada de células T que ejerce efectos inmunosupresores para mediar la homeostasis del sistema inmunitario. Las Tregs expresan los marcadores de superficie celular CD4, CD25 y Neuropilin 1, Nrp1 y los factores de transcripción nuclear forkhead box P3, Foxp3 y Helios.

Para aislar las Tregs de los ganglios linfáticos de drenaje pancreático de ratón, o PDLN, coloque una malla metálica sobre un tubo cónico. Coloque las PDLN en la malla y muela el tejido para disociarlo mecánicamente. Agregue un medio adecuado sobre la malla, enjuagando las células en el tubo.

Centrifugar, eliminando las células muertas y los restos celulares. Vuelva a suspender las células viables en el medio. Pasar las células a través de una tapa de filtro celular colocada en un tubo de fondo redondo para obtener una suspensión homogénea de una sola célula, eliminando cualquier grupo celular restante.

Agregue anticuerpos anti-CD4, anti-CD25 y anti-Nrp1 conjugados con fluorocromo. Los anticuerpos anti-CD4 y anti-CD25 se unen a sus respectivos antígenos de superficie celular en Tregs. Simultáneamente, el anti-Nrp1 se une a los receptores Nrp1.

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