Detección de la adherencia bacteriana a las células huésped mediante imágenes de fluorescencia

Tome una placa de pocillos múltiples que contenga una monocapa de células epiteliales adherentes susceptibles a la adherencia bacteriana.

Agregue un número variable de Pseudomonas aeruginosa marcada con proteínas fluorescentes, una bacteria patógena, para lograr la proporción deseada de bacterias a células epiteliales.

Centrifugar para acercar las bacterias a las células epiteliales, facilitando las interacciones.

Los pili tipo IV, fibras proteicas de las bacterias, desempeñan un papel fundamental al unirse a glicolípidos específicos en las células epiteliales, mediando la adherencia bacteriana a las células huésped.

Después de la incubación, lavar con un tampón para eliminar las bacterias no adherentes. Fije las células para preservar la estructura celular.

Agregue DAPI, una tinción fluorescente que se une fuertemente a las regiones de ADN ricas en A-T, tiñendo el núcleo. Cubra las celdas con tampón para evitar que se sequen

.

Adquiera imágenes de las bacterias marcadas con GFP unidas a células epiteliales con núcleo teñido con DAPI. Enumere las bacterias adherentes en una sola célula epitelial.

El aumento de bacterias adherentes por célula huésped de una manera dependiente de la d