La constricción crónica del nervio ciático y pruebas de hipersensibilidad dolor en ratas

El objetivo general de este procedimiento es realizar la constricción crónica, la lesión del nervio ciático, un modelo de dolor neuropático en roedores comúnmente utilizado, y medir cuantitativamente los comportamientos de dolor resultantes. Esto se logra colocando primero cuatro ligaduras de intestino crómico alrededor del nervio ciático expuesto a la altura de la mitad del muslo para crear una lesión por constricción del nervio ciático. A continuación, controle los comportamientos de dolor en la pata trasera en los puntos de tiempo deseados midiendo cuantitativamente el umbral de retirada de la pata al estímulo mecánico utilizando un mortífero de von fray y la latencia de la retirada de la pata al estímulo térmico utilizando un medidor de analgesia plantar.

En última instancia, se pueden obtener resultados que muestran la existencia de dolor mecánico y térmico, hipersensibilidad de la pata trasera lesionada a través de la medición de las respuestas de retirada evocadas a estímulos tanto mecánicos como térmicos. Este método de lesión de los nervios periféricos, desarrollado por primera vez por bene y Z, puede ayudarnos a responder preguntas clave en el campo del dolor crónico, como cuáles son los mecanismos periféricos y centrales por los que se genera el dolor neuropático. Las implicaciones de esta técnica se extienden hacia la terapia del dolor neuropático porque este modelo proporciona la base para examinar nuevas estrategias para reducir la hipersensibilidad al dolor.

Por lo general, las personas nuevas en este método tendrán dificultades porque la colocación de las suturas intestinales cmic alrededor del nervio estático y una estanqueidad adecuada para causar una lesión nerviosa suficiente, pero no excesiva, es particularmente desafiante. Para iniciar este procedimiento, desinfecte la superficie de trabajo quirúrgico con etanol al 70% y prepare los instrumentos estériles con gasas, grapas e hisopos, que previamente han sido esterilizados en autoclave. A continuación, anestesia a la rata en una cámara de inducción con flúor ISO al 5%.

Administre un 2% de flúor ISO a través de una mascarilla facial hecha a medida durante la cirugía. Después de eso, afeite la pata trasera izquierda de la rata, luego coloque al animal sobre una estera térmica termorregulada a 37 grados centígrados. Aplique ungüento oftálmico lubricante en los ojos.

Luego prepare la sutura intestinal crómica cortándola en trozos pequeños de unos tres centímetros, sumérjalos en solución salina estéril. A continuación, esterilice el área afeitada con tres aplicaciones alternativas de solución de alcohol y yodo. Con el animal acostado sobre su tórax, eleve su pata trasera izquierda y sostenga el fémur a 90 grados de la columna vertebral con cinta adhesiva en el pie.

A continuación, haga una incisión en la piel a unos tres o cuatro milímetros por debajo del fémur. Separe la piel del músculo que rodea la incisión cortando el tejido conectivo. Use un par de tijeras romas para cortar el tejido conectivo entre el glúteo superficial y los músculos bíceps femeninos.

A continuación, use un retractor para ampliar el espacio entre los dos músculos para permitir una visualización clara del nervio ciático, luego use las pinzas y las microtijeras para liberar suavemente aproximadamente 10 milímetros del nervio ciático del tejido conectivo circundante. Ate la primera ligadura proximal a la trifurcación del nervio ciático para cada ligadura. Comience con un solo bucle suelto.

A continuación, agarre los dos extremos cerca del bucle y tire hasta que el bucle quede apenas ajustado y la ligadura no se deslice a lo largo del nervio. A continuación, sujeta el bucle en su posición correcta y coloca un segundo bucle encima del primer bucle para completar el nudo. A continuación, corte los extremos sueltos de la ligadura a una constricción redonda de un milímetro del nervio que debe ser mínima.

Repita los pasos para las tres ligaduras restantes atando cada ligadura adicional un milímetro más proximal que la anterior. También con una constricción mínima al final de la cirugía, use suturas para cerrar la capa muscular y grapas para sujetar la piel. A continuación, use una solución de yodo para esterilizar la herida.

Observe al animal de cerca durante el período de recuperación de la anestesia y permita que se recupere en una jaula separada con ropa de cama de papel plana. Antes de comenzar el experimento. Manipule al animal diariamente durante varios días.

Luego, antes de la prueba de comportamiento, habitúa a la rata en el recinto. El entorno de prueba debe mantenerse tranquilo y bien controlado con niveles constantes de temperatura y humedad, y cada sesión de prueba debe llevarse a cabo a una hora similar del día. Para estudiar el umbral de retirada mecánica el día de la prueba, coloque la rata en la jaula de prueba del suelo de malla elevada, de 15 a 30 minutos antes del experimento utilizando una antera plantar dinámica de von fray, coloque la unidad estimuladora de contacto con el filamento directamente debajo de la superficie central de la maceta de la pata trasera y presione la tecla de inicio.

Esto levanta el filamento para estimular mecánicamente la superficie de la maceta de la pata trasera con una fuerza creciente. A continuación, registre el umbral de retirada mecánica de las patas traseras lesionadas y no lesionadas. Este dispositivo registra y muestra automáticamente el máximo suministrado tras la reacción de retirada.

Repita la estimulación mecánica tres veces con un intervalo de unos cinco minutos entre la prueba de estímulos y las patas traseras no lesionadas en un orden contrabalanceado, y luego calcule la media de los umbrales de retirada de las patas. Para estudiar la latencia de extracción térmica el día de la prueba, coloque la rata en el piso de vidrio. Jaula de prueba de 15 a 30 minutos antes del experimento utilizando un instrumento de analgesia de maceta térmica, coloque la fuente infrarroja directamente debajo de la superficie media de la maceta de la pata trasera y presione la tecla de inicio.

Esto expone la superficie de la maceta de la pata trasera a un haz de calor radiante a través de una superficie de vidrio transparente. A continuación, registre la latencia de retirada de las patas traseras lesionadas y no lesionadas. Este dispositivo registra automáticamente el tiempo transcurrido desde el inicio del estímulo térmico hasta la retirada de la pata de la fuente de calor.

Repita la estimulación de calor al menos tres veces con un intervalo de aproximadamente cinco minutos entre estímulos que prueban las patas traseras lesionadas y no lesionadas en un orden contrarrestado, y luego calcule la media de la retirada de las patas. Las latencias aquí muestran el umbral de retiro mecánico en las patas lesionadas y no lesionadas de ratas wistar antes y hasta 12 días después de la constricción crónica del nervio ciático. Hay una reducción significativa en el umbral de retirada de la pata a los estímulos mecánicos en la pata trasera ipsilateral lesionada en comparación con la pata trasera contralateral no lesionada. Aquí se muestra la latencia de retirada térmica en patas lesionadas y no lesionadas antes y hasta 12 días después de la constricción crónica del nervio ciático.

Del mismo modo, la latencia de retirada térmica se reduce significativamente en la pata trasera ipsilateral lesionada en comparación con la pata trasera contralateral no lesionada. Una vez dominada, la cirugía de ICC se puede realizar correctamente en tan solo 20 minutos por animal, lo que resulta en dolor a largo plazo e hipersensibilidad de la pata trasera. Al intentar este procedimiento, es importante recordar atar las ligaduras sin apretar, ya que es la autoestrangulación debajo de las ligaduras después del edema, lo que causa una constricción después de su desarrollo.

Esta técnica de lesión de los nervios periféricos se combinó con la prueba de la onda P de hipersensibilidad al dolor para que los investigadores en el campo del dolor neuropático exploraran los mecanismos subyacentes al dolor crónico debido a la lesión nerviosa.