Los ensayos clínicos y de eliminación de la médula espinal en un modelo murino de esclerosis lateral amiotrófica (ELA)

Un modelo de ratón para la esclerosis lateral amiotrófica (ELA) es un examen clínico y de comportamiento. Como un requisito previo para un análisis inmunohistoquímico acompaña la preparación de la médula espinal se representa en detalle.

Hola, mi nombre es Lar Turner. Soy postdoc en el Departamento de Neurología de la Universidad de Ingham, Alemania. Hola, mi nombre es Lin Gunda.

Soy estudiante de medicina y estoy haciendo mi trabajo de tesis en este laboratorio. Hoy os vamos a enseñar las pruebas clínicas del SODG 93, un modelo de Moss de esclerosis lateral atrófica. Además, demostraremos la prueba de función del motor con la llamada prueba de rotor y, además, otra prueba de función del motor con la empuñadura de cable colgante para realizar un análisis inmunológico

Después de las pruebas funcionales de los ratones, un procedimiento necesario consiste en la extirpación de la médula espinal, el nervio STIC y el músculo gástrico. Queremos mostrar estos procedimientos quirúrgicos en detalle y presentar algunos hallazgos inmunológicos ejemplares al final. Bien, pero ahora comencemos primero con las pruebas clínicas.

Este es un MOE de tipo salvaje que se mueve libremente y que no muestra ningún síntoma clínico como temblor muscular o parsis en nuestro sistema de clasificación clínica. Esa sería la cuarta puntuación. Se trata de un moe transgénico A LS.

En una etapa temprana de la enfermedad, exhibe un temblor severo de la extremidad hin derecha que lo clasifica como SCORE three E.Las anormalidades severas de la marcha clasifican a este animal como score two. El arrastre de al menos una extremidad trasera se clasifica como puntaje clínico uno en la prueba de alambre colgante, se evalúa la fuerza muscular bruta de las costillas. Cada ratón se coloca en un cable hecho a medida y se gira con cuidado boca abajo sobre el botón cubierto de paja.

Después de entrenar durante tres veces consecutivas de al menos 180 segundos, se midió la latencia a las caídas. Cada mouse tiene hasta tres intentos para sostener la tapa invertida durante un máximo de 180 segundos, y se registra el período más largo en comparación con el mouse de tipo cable blanco en el lado derecho. La placa del ratón transgénico de la izquierda es muy débil y se cae del párpado antes de alcanzar el máximo.

El aparato de varilla del rotor se utiliza para medir la coordinación motora, el equilibrio y la capacidad de aprendizaje motor. Un buen rendimiento requiere un alto nivel de coordinación sensoriomotora. Consta de un husillo giratorio controlado desde computador (PC) y accionado por motor, y cinco carriles de cinco m.

Los fallos de los ratones se detectan automáticamente mediante la presión sobre la placa de plástico inferior. Después de entrenar tres veces consecutivas de al menos 180 segundos a una velocidad constante de 15 disparos por minuto, se mide el tiempo durante el cual un animal puede permanecer en la podredumbre giratoria. Cada animal se somete a tres pruebas y se registra la latencia más larga sin caídas.

El mos de tipo salvaje saludable en el lado izquierdo corre sin dificultad en la varilla del rotor. Por el contrario, el transgénico del lado derecho tiene graves problemas para permanecer incluso en la varilla del rotor y se desliza después de un tiempo observado desde atrás. Se ven las severas dificultades para correr del ratón retre izquierdo.

En comparación con el ratón de grifo de alambre saludable, no puede seguir el ritmo de la velocidad de la varilla del rotor y no puede empujar hacia arriba con las extremidades HIN. Para realizar un análisis inmunoquímico de la médula espinal, los animales deben ser sacrificados. Es muy importante seguir siempre estrictamente las directrices locales para la correcta realización de experimentos con animales.

En este contexto, en esta descripción muy simplificada de la columna vertebral y sus tejidos circundantes, se describen las principales estructuras anatómicas. Colocaremos al animal sobre su lado ventral y comenzaremos a preparar los músculos de la bolsa dorsal. Después de extirpar el tejido muscular, accederemos a la columna vertebral que encierra la médula espinal.

Después de que el animal ha sido sacrificado y perfundido con una solución que contiene una altura de paraforma, se puede extirpar la médula espinal. El animal se coloca sobre una mesa de operaciones y las extremidades completas se fijan a los lados y se ordenan exponer la parte trasera del ratón. El animal se humedece para aplanar el pelaje y facilitar la siguiente incisión en la piel.

Para ello, se utiliza un bisturí afilado. Tenga cuidado de estirar la piel hacia ambos lados. Para facilitar el corte se preparará el músculo de la pierna.

Su piel también tiene que ser incisa. Una vez completada la incisión en la piel, se aparta suavemente. Con unas pinzas una vez retirados los músculos de las patas y el nervio ciático, continuamos acercándonos a la médula espinal y colocamos al animal en una nueva mesa de operaciones.

Ahora es fácil identificar el cráneo, el cuello, los músculos y la columna vertebral. Una vez identificadas todas estas estructuras, es fácil pasar al siguiente paso. Los músculos del cuello y el ligamento numérico deben ser extirpados.

Tenga cuidado de no incidir demasiado profundamente y conducir la columna vertebral. En el siguiente paso, los músculos paravertebrales se extirpan por completo para exponer la columna vertebral. Para acceder a la columna vertebral hay que realizar varias ectomías.

Partimos de la parte cervical de la columna vertebral, incluyendo la articulación occipital atlántica. Para realizar la laminectomía, tenemos que cortar el arco vertebral para poder extirpar todos los procesos vertebrales del cuerpo vertebral. Como se explicó anteriormente, la laminectomía comienza con el corte de los arcos vertebrales.

Entonces se puede retirar la laina. Nuevamente, tenga cuidado de no lesionar la médula espinal, ya que hay que extirpar muchos más pal. Es muy útil usar tijeras en ángulo e incidir varios arcos vertebrales de ambos lados a la vez.

A continuación, tire de las apófisis dorsales para eliminar por completo la lámina vertebral y el primer plano. Verá que el par de tijeras debe insertarse con cuidado más lateralmente en el costado del canal espinal. El resto de las partes laterales de la columna vertebral deben extirparse para facilitar la posterior extirpación completa de la médula espinal.

Un hito anatómico de la médula espinal son las llamadas esencias cervicales y lumbares. Una vez terminadas las ectomías de toda la médula espinal, asegúrese de seccionar también todas las raíces ventrales de la médula espinal y liberarla de la materia dura de las meninges. A continuación, se corta la médula espinal cervical.

Cranealmente y se vuelve a iniciar su extirpación. Tocar la médula espinal con mucha precaución para no dañar este tejido, ya que esto podría causar severas limitaciones para el análisis inmuno-inmunoquímico posterior. La extirpación de la médula espinal se continúa a nivel torácico y se procede a la parte lumbar.

Finalmente se corta de nuevo, esta vez por el lado del cordón equino. Ahora somos capaces de liberarlo por completo. Aquí se ve la médula espinal colocada justo al lado de su ubicación original en la columna RAL.

En última instancia, se coloca en una solución de fijación posterior de Paraform Hyde. Como ejemplo clásico para el análisis inmunohistoquímico de la médula espinal, se puede aplicar un anticuerpo que reconoce colina, acetiltransferasa para identificar las neuronas motoras en el asta anterior de la médula espinal. Aquí se ve un gran número de neuronas motoras en un animal sano de tipo salvaje.

En contraste, el animal transgénico a LS en la etapa final exhibe un número mucho menor de neuronas motoras en el asta anterior. Al ver este artículo en video, debería haber aprendido el examen clínico básico del SODG 93. Un modelo murino de esclerosis lateral atrófica.

Se han demostrado dos pruebas de comportamiento del motor: la prueba del rotor y la prueba del cable colgante. Proporcionan una buena posibilidad para evaluar la función motora básica. Son fáciles de realizar, sensibles en la detección de déficits motores y eficientes en el tiempo.

La parte principal de este video consiste en una demostración de la técnica de preparación de la médula espinal. Esto, por supuesto, se puede aplicar a cualquier otro modelo de enfermedad en ratón y es un paso esencial para el análisis inmunoquímico posterior de la patología de la enfermedad en la médula espinal. Gracias por mirar.

Esperamos que este artículo de video sea útil para sus futuros experimentos.