Name: Cuidado y mantenimiento regulares de un pez cebra ( Danio rerio) Laboratorio: Introducción (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-11-18T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 47 s
Description: Aprende el mantenimiento regular de un laboratorio de peces cebra Danio rerio, incluyendo alimentación, cría y cuidado de larvas. Este protocolo ayuda a investigadores a establecer instalaciones óptimas.

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Los autores desean agradecer a Tammy Esmaili por su ayuda en la gestión de los consumibles de laboratorio. AA es el beneficiario de una beca de doctorado del Centro de Excelencia para la Investigación de la Enfermedad de Alzheimer y Atención de la Facultad de Ciencias Médicas de la Universidad Edith Cowan. MC Doctor recibe apoyo financiero del Rotary Club, de Perth. AM, GV, KT, y RNM son financiados por la Fundación de Investigación del Alzheimer del McCusker.

1. Sistema de Mantenimiento <ol><li> El pez cebra se mantienen en un sistema de circulación que continuamente filtros y airea el sistema de agua para mantener la calidad del agua requerida para un medio acuático sano. El sistema de circulación también ayuda a filtrar el exceso de comida y excrementos de peces. Diferentes empresas ofrecen sistemas de pez cebra, pero nosotros usamos sistemas de hábitats acuáticos, Estados Unidos en nuestro laboratorio. La temperatura ambiente o la temperatura del tanque se mantiene generalmente entre 26 a 28.5 ° C y las condiciones de iluminación son 14:10 h (luz: oscuridad). Un sistema de pez cebra de hábitats acuáticos (por ejemplo, sistema de sobremesa) Costos ~ 9.000 USD. Este sistema de mesa con dos estantes puede contener seis 10-litros, doce 3-litros, o veinte tanques 1,5-litros en cada estante. Múltiples líneas de los peces (por ejemplo, transgénico, de tipo mutante y salvaje) también pueden ser alojados en el mismo sistema. </li><li> Un conjunto de diferentes tipos de filtros se utilizan en el sistema. En nuestro sistema, el agua de todos los tanques de paEPE a través de un 120-micras de bloque de filtro, 50-micras cartucho del filtro filtro, biológica, la absorción de filtro de carbón activo y filtro de desinfección UV antes de ser distribuido de nuevo en el tanque. De-chlorinated/aged agua se utiliza en el sistema de pez cebra. El agua puede ser de-clorado por el envejecimiento durante al menos 48 h. En condiciones ideales, el agua debe mantenerse en un depósito con una bomba de circulación del agua para mantener el calor, y acelerar el de-cloración. </li><li> El pH del agua del sistema deberá ser comprobado diariamente y se mantiene entre 6,8 y 7,5. Cuando sea necesario, bicarbonato de sodio debe utilizarse para aumentar el pH. </li><li> Los tanques de peces se debe limpiar con regularidad. Para limpiar un tanque de peces, cerrar el flujo de agua de este tanque, drenar el exceso de agua por la inclinación del tanque hacia atrás y extraer el depósito cuidadosamente del sistema. La suciedad y el crecimiento de algas será evidente en la parte inferior y los lados del tanque. </li><li> Coloque el deflector en el tanque limpio, y llénelo con agua de cloro (también conocido como Sistema water). Transfiera cuidadosamente los peces en este acuario con una red de pesca. Cerrar la tapa y transferir la etiqueta de nombre del tanque. Coloque con cuidado el tanque limpio en el sistema y conectar el suministro de agua. </li><li> Para descontaminar la red de pesca, rociar con un 70% de etanol, enjuague con agua y deje que se seque antes de volver a usarlo. Retire el deflector del tanque sucio y pulverizar las dos partes con 70% de etanol. Enjuague bien con agua corriente y deje que el depósito y el deflector se seque completamente antes de volver a usarlo. </li><li> Los filtros del sistema de circulación tienen que ser revisados ​​y cambiados regularmente para asegurar su correcto funcionamiento. Estos filtros deben ser cambiados regularmente para asegurar un suministro de agua adecuado y limpio para todos los tanques de peces. </li><li> La almohadilla 120 micras de filtro normalmente se vuelve a colocar o reemplazar diariamente; reposicionar hacia el flujo de agua para utilizar completamente antes de sustituir por uno nuevo. </li><li> El filtro de cartucho se debe cambiar semanalmente. Para cambiar el filtro de cartucho, retire la unidad del filtro girando hormigaiclockwise con una llave o manos. Coloque una lámina de plástico o una toalla debajo para prevenir o absorber los derrames de agua. Reemplace el filtro de cartucho por uno nuevo y colocar la unidad de filtro de nuevo en el sistema, apriete con cuidado con las manos y una llave si es necesario. </li><li> El filtro de carbón debe ser cambiado cada dos semanas (cada dos semanas). Para cambiar el filtro de carbón, retire la unidad del filtro de carbono cuidadosamente con una llave. Desechar el carbono activado usado y sustituirlo por nuevo carbono activado. Vuelva a colocar el soporte de carbono y colocarlo de nuevo en la unidad de filtro. Montar la unidad de filtro de nuevo en el sistema. Encender el sistema y comprobar que el agua fluye hacia el filtro. Si es necesario, lavar un poco de agua a través de las tuberías de limpiar la suciedad en las tuberías antes de colocar el filtro en el sistema. </li><li> El filtro biológico debe limpiarse cada seis meses. Un filtro biológico se encuentra generalmente entre el bote y el filtro de carbono en el sistema de circulación. Para cambiar el filtro biológico, remove la unidad de filtro del sistema. Libere la presión del filtro presionando el botón de liberación de presión. Desenroscar el filtro con una llave. Generalmente se necesitan dos personas para este paso. Retirar la tapa de la unidad de filtro. Vaciar el contenido del filtro en un recipiente tamizaron para separar el siporax del agua. Nota: siporax es una multa de poro bio-filtro medio que tiene la capacidad de realizar tanto la nitrificación y de desnitrificación. </li><li> Si el siporax es muy sucio reemplazarlo con uno nuevo. Llene el filtro con agua del sistema (de-agua clorada), cierre la tapa, devuelva la unidad al sistema de filtro y conecte el suministro de agua. Nota: En un acuario aclimatado, el siporax será el hogar de varias bacterias nitrificantes. Estos microorganismos son críticos para mantener el ciclo del nitrógeno en el acuario, y la eliminación de la carcasa primaria para el filtro biológico (el siporax sucio) podría dar lugar a un pico de amoniaco grave, seguido de un pico, mientras que el nitrito de new filtro biológico (con siporax nuevo) es el restablecimiento. Ambos de estos estados intermedios del ciclo del nitrógeno puede ser tóxico para los organismos acuáticos y puede matar el pez cebra si no respondieron de forma apropiada. Por lo tanto, es importante disponer de un filtro biológico secundario en otro lugar en el sistema de alojamiento pez cebra (por ejemplo, en el depósito de recogida en el sistema de hábitats acuáticos) para permitir la repoblación rápida de estos microorganismos importantes en la siporax nuevo. </li><li> Filtros UV se usan para el control de contaminantes biológicos del sistema (como las bacterias) y debe ser reemplazado cada mes nueve-diez. Debe tenerse en cuenta que tipo de filtro UV dosis desinfección es de ~ 110 mJ / cm 2 en el comienzo de la vida de la lámpara y la tasa de dosis disminuye con el transcurso del tiempo, por lo que es necesario sustituir el globo incluso cuando parece ser aún funcional. </li></ol> 2. Alimentación <ol><li> El pez cebra puede ser alimentado con comida seca (tamaño de la comida de 100 micras para t larvaso 300/400 micras para peces adultos) o alimento vivo (artemias). Artemia (Artemia sp.) Huevos están disponibles en tiendas de animales locales y se puede rayar en el laboratorio, siguiendo los sencillos pasos que se describen a continuación. <ol class="lalpha"><li> Disolver la sal del mar rojo en agua envejecido mediante la colocación de un vaso de precipitados con sal en un agitador magnético para una mejor solubilidad. Alternativamente, la sal se puede disolver en agua por aireación con el tubo de aireación. Sal Instant Ocean también se puede utilizar como una solución de eclosión si rojo sal marina no está disponible. Camarones de salmuera puede tolerar un amplio rango de salinidad, sin embargo, que eclosionan nuestro artemia (10-15 g) en 30-35 g / L de agua salada del mar rojo. Nota: En el caso de los huevos de artemia no están fácilmente disponibles en las tiendas locales de mascotas luego encapsulados camarones de salmuera también se puede utilizar después de &quot;destapado&quot; en lotes antes de su inclusión en el criadero de camarones. Esto también podría evitar viajes frecuentes a la tienda de mascotas. </li><li> Llene la nacedora artemia con salt de agua y añadir los huevos de camarones en una concentración de 1,2 cucharadas / litro. Airear la nacedora vigorosamente con una bomba de aire y dejar los huevos de camarones en salmuera para salir del cascarón durante ~ 48 h. Nota: Cabe señalar que un-enriquecido camarón de salmuera perder valor nutricional cada hora después de la eclosión. Por lo tanto, puede ser apropiado para cualquiera de escotilla durante 24 hr o enriquecer más de 48 horas con el fin de obtener el máximo valor nutricional de la gamba de salmuera. </li><li> Agua residual del sistema de eclosión se añade a los residuos de cuarentena a desinfectar con lejía y dispuesta más adelante. </li></ol></li><li> Para recoger los camarones de salmuera, retire el tubo de aire y permitir que la cultura que conformarse con 4-5 minutos pero no más de 10 min. Los camarones de salmuera eclosionados se reúnen en la parte inferior de la Hatcher. <ol class="lalpha"><li> Recoger salmuera camarones utilizando el grifo en la parte inferior de la incubadora. Deseche el flujo inicial, que consiste en un-eclosionados los huevos de artemia. </li><li&gt; Después de desechar los camarones de salmuera no-nacidos, recoger los camarones de salmuera nacidos que serán utilizados como alimento el pez cebra. </li><li> Separe los camarones de salmuera del agua salada, utilizando una red de recolección de artemia (~ 350 micras de malla de nylon). Lavar los camarones de salmuera de la red en un recipiente con agua del sistema. </li></ol></li><li> Las artemias recogidos están generalmente presentes en concentración alta en la parte inferior del recipiente dándole un color más naranja. </li><li> Pase los camarones de salmuera para el pez cebra con una pipeta o un gotero / squeezy. La cantidad de alimento dispensado depende del tamaño de la población de los tanques individuales. La relación comúnmente aceptado para el pez cebra es recibir 4% del peso corporal en los alimentos por día. Pez cebra nunca deben ser sobrealimentadas ya que esto puede aumentar el nivel de nitrato en el agua, posiblemente afectando su reproducción, o la viabilidad, ya que algunos peces pueden morir debido a comer en exceso. <ol class="lalpha"><li> Al inyectar los alimentos en laagua, los peces hambrientos nadar para atrapar a los camarones de salmuera. </li></ol></li><li> Alimentación seca se puede realizar usando un ecosistema acuático del / hábitats acuáticos sencillo resorte basada dispensador de alimento para peces. Alternativamente, alimentación seca también se puede realizar utilizando una cuchara simple o cortando un cuentagotas de plástico diagonalmente con tijeras para dar una apariencia de una pequeña cuchara. </li></ol> 3. Cría <ol><li> Pez cebra iniciar la reproducción en el inicio de la luz. Los huevos fertilizados se puede obtener a través de la cría en el tanque de cría o por parejas. Mientras que en el tanque de cría es más mano de obra eficiente y se aplica para la recolección de embriones habitual en nuestro laboratorio, la cría de pares se prefiere cuando los genes o mutaciones deben ser examinados de cada pez. </li><li> Para la cría en el tanque, instale el reproductor en el tanque y soltar lentamente en el tanque de peces después de la aparición de la luz. Por otra parte, en el tanque de cría de configuración se puede dejar toda la noche en la pecera. </li><li> Lalero del obtentor en el tanque para alrededor de 15 min para permitir que el pescado para aparearse antes de retirar el criador de la cubeta y la recogida de los huevos. </li><li> Cría por parejas normalmente se establece por la tarde después de comer. </li><li> Montar el tanque de cría y llenarlo con agua del sistema envejecido. </li><li> Transferir una hembra y un macho, a lados opuestos del tanque de cría. Las hembras se pueden distinguir de los hombres, debido a su bajo vientre más grande. Los hombres también se pueden distinguir de las hembras, ya que son más delgados y de color más oscuro que las hembras. Por otra parte, los machos tienen coloración más amarilla de la aleta anal en comparación con las mujeres (ver Figura 1). Cuando está en duda para el aspecto ovipositor en el pez cebra hembra (ver Figura 4). </li><li> Eliminar el divisor de la mañana siguiente, poco después de la aparición de la luz. Permitir el acoplamiento a ocurrir en reposo durante 20 min o hasta que un número suficiente de embriones se colocan en la parte inferior del tanque. </li><li> Después de la reproducción,volver a los peces a sus tanques. Recoge los huevos usando un colador. </li><li> Lavar los embriones a fondo con agua del sistema. </li><li> Transferir los embriones a una placa de Petri de un enjuague del filtro con medio de embrión; tcc EM3 (NaCl, 13,7 mM; KCl, 0,54 mM; MgSO 4, 1,0 mM; CaCl 2, 1,3 mM, Na 2 HPO 4, 0,025 mM; KH 2 PO 4, 0,044 mM; NaHCO 3, 4,2 mM). </li><li> Los embriones pueden ser observados bajo el microscopio. Los huevos fertilizados se separan entonces de los huevos no fertilizados utilizando una aguja y una pipeta (véase la Figura 3). </li></ol> 4. Cría de larvas <ol><li> Los huevos fertilizados se mantuvieron en un incubador (~ 28,5 ° C) durante 72 horas hasta que las larvas se incuban. </li><li> Ahora son las larvas del corion y nadar libremente están listos para transferirse a una pecera principal. Las larvas necesitan ser alimentados de 5 días después de la fertilización (dpf) y se mantienen en medio de embriones (composición descrita en elParte 3, 10) o sistema de agua. Las larvas pueden mantenerse en placas redondas con ~ 50% o más de agua en el mismo cambia sobre una base diaria. El cambio de agua debe incluir la eliminación de larvas muertas o enfermas y cualquier otros desechos. </li><li> Transferir las larvas suavemente en un tanque que contiene un deflector de tamaño pequeño (de alrededor de 300-400 micras). Larvas muertas y enfermas deberán ser retirados y unos pocos mililitros de agua se debe agregar lentamente sobre una base diaria. </li><li> Después de 14 días, los tanques de larvas puede ser archivado en el sistema, y ​​se suministra con una pequeña corriente de agua ciclismo (1-2 gotas por segundo). Como las larvas crecen, el flujo de agua puede ser aumentado. Diferentes tamaños de deflectores se pueden utilizar dependiendo del tamaño de las larvas (por ejemplo, tamaño deflector 300-400, 500, 700-750, y micras 1000) y un deflector de plástico normal se debe utilizar para los peces adultos. </li><li> Por lo general, tarda de 3 meses para que los embriones se conviertan en adultos sexualmente maduros. </li></ol>

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</ol>

No hay conflictos de interés declarado.

El pez cebra se originan en el río Ganges en el norte de la India y se están volviendo populares en la investigación, tanto en su estado adulto como larvario 2, revisado por Spence et al. 3. Pez cebra tienen varias ventajas sobre otros modelos animales tales como alta fecundidad, la facilidad de mantenimiento, limpieza óptico de embriones, el desarrollo embrionario rápida y bajo costo de mantenimiento. Son susceptibles de manipulación genética 6 y adecuado para la detección de drogas de alto rendimiento de 4,5. Su fertilización es externa que es ventajoso para su uso por los biólogos del desarrollo. Debido a estas características favorables, el pez cebra están ganando popularidad en genética 7, 8 farmacológico, y la investigación del comportamiento 9,10. Hay una serie de retos para el mantenimiento de una instalación de pez cebra y la cría de pez cebra para obtener embriones. Aquí, describimos nuestras experiencias y recomendaciones para hacer frente a estos retos y oSQUEMA un protocolo para el mantenimiento del sistema, la alimentación y crianza de las larvas. Mantenimiento del sistema Para mantener el pez cebra en un estado saludable, es importante proporcionarles un entorno limpio en un sistema de acuario que funcione correctamente. Una parte importante de este sistema está cambiando filtros regularmente de modo que todos los tanques de recibir el flujo de agua adecuado y agua limpia. Es de vital importancia para evitar fallos en el suministro de agua para cada tanque de ciclismo debido a las tuberías del sistema bloqueado. Los tubos se pueden limpiar con un flujo mayor que la presión normal del agua y si el bloqueo se produce. Idealmente, alrededor de 10% de agua del sistema debe ser reemplazado a diario para mantener la buena calidad del agua. Alternativamente, el agua puede ser reemplazado mientras se cambia el cartucho o filtro de carbono. Esto asegura que la suciedad depositada en las tuberías que conectan estos filtros se retira. La calidad del agua debe ser confirmada en una base regular. Parámetros tales como la alcalinidad, pH, temperatUre, dureza, amoniaco, oxígeno disuelto, salinidad, conductividad y deben ser considerados como factores importantes en la representación de la calidad del agua del sistema (véase la Tabla 2 para más detalles). En el nitrato menos, pH, y temperatura deben ser monitorizados sobre una base regular para asegurar buena calidad de agua para el pez cebra vivienda. Ideal nitrato (NO 3 -) niveles son &lt;50 mg / L 11, de ser alto de estos niveles puede ser reducido mediante la sustitución del agua en el sistema de circulación con el sistema de agua fresca. En ocasiones, los filtros no se ajustan bien y fuga por lo que se recomienda comprobar que no haya fugas después de un cambio de filtro. Si el flujo de agua desde el depósito principal está bloqueada o bien después de cambiar la bomba de agua o de cambiar un filtro, el flujo de agua puede ser restituido por aflojar o retirar el filtro durante unos segundos para liberar cualquier vacío que se genera en las tuberías. El tiempo requerido para cambiar los filtros puede variar dependiendo de varios factores tales como carga total o biológican el sistema, la limpieza de los filtros de otros, y la suciedad depositada en las tuberías. Por lo tanto, los filtros deben cambiarse inmediatamente si están sucias o si todos los tanques no están recibiendo el suministro de agua adecuado. También se recomienda que la red de pesca puede limpiar con 70% de etanol, y se enjuagaron en agua para descontaminar, y se deja secar antes de volver a utilizarlos. Secado asegura la evaporación de etanol que de otro modo es tóxico para los peces. La mayoría de los sistemas de uso de pez cebra de-agua clorada del grifo, sin embargo, algunos sistemas utilizan agua desionizada. Es importante mantener la conductividad del agua del sistema de entre 300 y 1.500 mS ~ ya que esto reduce la energía que el pez necesita para mantener las sales del cuerpo. Por lo tanto, el pez cebra no se puede mantener en agua desionizada a menos sales se añaden a mantener los niveles de conductividad óptima. Existe el riesgo de posibles altas concentraciones de cobre en el agua del sistema si se utiliza agua corriente, porque el filtro de carbón no eliminar el cobre. Por lo tanto, uSERS debe comprobar si las concentraciones de cobre y tuberías de cobre evitar en lo posible. Alimentación Pez cebra nunca deben ser sobrealimentadas ya que esto puede aumentar el nivel de nitrato en el agua, afectando posiblemente su crianza 11 o viabilidad, ya que algunos peces pueden morir debido a comer en exceso. Se recomienda no proporcionar más alimentos durante cualquier alimentación de un que un tanque de peces puede terminar en 10 minutos. Es muy importante para eliminar la sal de la salmuera camarones antes de alimentar a los peces cebra como la concentración de exceso de sal causa la muerte. Si más huevos de pez cebra son necesarios, los peces pueden ser alimentados tres veces al día. Limpieza de los tanques de peces reproductores diario también mejora los niveles de producción de huevos. Cuando se alimenta en los sistemas de hábitats acuáticos que solemos apagar la bomba de agua y bomba de aire para permitir a los peces a comer la comida durante 10 min. Esto disminuye la cantidad de comida que se lava en los filtros. Sin embargo, los usuarios deben tener cuidado de remascua para encender las bombas de nuevo más tarde. Cría El pez cebra son por lo general en condiciones de cría óptima entre ~ 3 y 18 meses de edad. Por parejas de cría no debe realizarse durante dos días consecutivos 11, sin embargo, en el tanque de cría se puede realizar a diario como un tanque puede contener muchos peces que reduce la posibilidad de que el mismo par de peces que se crían durante dos días en una fila. El servicio debe de llevarse a cabo a intervalos regulares, incluso si los huevos no son necesarios. Este proceso asegurará que el ciclo de reproducción de los peces se mantiene. Se recomienda que haya más mujeres que hombres en una cría de puesta a punto. Pez cebra macho cambiar sus parejas femeninas en un 12 a diario que apoya esta recomendación. Además, en nuestro laboratorio que inicialmente tuvieron problemas con la cría, sin embargo, con más mujeres que hombres en la crianza de configuración ayudado a resolver el problema. Por otra parte, la alimentación con una proteína de alto content dieta y artemia dos o tres veces al día, mezclar el pescado de los tanques de padres diferentes (distintos), manteniendo la temperatura de la cría de configuración entre 27 y 28 ° C, y apretando los vientres de las hembras con ovarios tubos bloqueados utilizando suave masaje mejora aún más la producción de huevos. Se recomienda llevar un registro de las líneas de peces / origen para evitar la endogamia entre hermanos. Esto mejora la producción de embriones. Llevar un registro del número de embriones fijados por los peces de cada tanque también es recomendable. Esto ayuda a mantener un registro de los mejores tanques de cría de peces y tomando medidas para mejorar la reproducción en los peces no poner huevos. El aumento de las larvas La alimentación de las larvas debe comenzar a partir del 5 dpf (fertilización días después). Las larvas jóvenes pueden ser alimentados con comida seca de ~ 100 micras de tamaño (por ejemplo, ZM100) o alimentos vivos tales como paramecio y rotíferos (que estimula el crecimiento). El tamaño de la comida lenta se puede aumentara 200 micras (por ejemplo ZM200) o 300/400 micras (por ejemplo ZM300). Una población de peces adultos debe estar alrededor de 7.6 peces por litro de agua. Esta práctica se recomienda para un mejor mantenimiento de DBO (demanda biológica de oxígeno) a los tanques.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre del reactivo / equipo </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td><td></td></tr><tr><td> El pez cebra sistema de circulación </td><td> Hábitats Acuáticos, USA </td><td> Acab independiente, sistemas de sobremesa </td><td></td></tr><tr><td> Bicarbonato de Sodio </td><td> Sigma Aldrich </td><td> S6297 </td><td></td></tr><tr><td> Pez dispensador de comida / alimentador alimento seco </td><td> Hábitats Acuáticos, USA </td><td> AH19 </td><td></td></tr><tr><td> Microscopio </td><td> Olimpo </td><td> SZX12 </td><td></td></tr><tr><td> Alimentos secos </td><td> ZM comida de pescado, Reino Unido </td><td> ZM100, ZM200, ZM300 </td><td></td></tr><tr><td> Huevos de artemia </td><td> Salt Creek, Inc., EE.UU. </td><td> Premium Grade </td><td></td></tr><tr><td> En-tanque criadores</td><td> Hábitats Acuáticos, USA </td><td> ITSTS-A </td><td></td></tr><tr><td> Carbón activado </td><td> Penn-Plax Pro-cangrejo, EE.UU. </td><td> PBC3MF </td><td></td></tr><tr><td> Tanques de cría </td><td> Hábitats Acuáticos, USA </td><td> SBTANK (1L) Criador Tank-2 (2L) </td><td></td></tr><tr><td> Red de sal marina </td><td> Red de sal marina, EE.UU. </td><td> Tienda de mascotas local / <a href="http://www.redseafish.com" target="_blank">www.redseafish.com</a> </td><td></td></tr><tr><td> Filtros (Canister, almohadillas del filtro y UV) </td><td> Hábitats Acuáticos, USA </td><td> <a href="http://www.aquatichabitats.com" target="_blank">aquatichabitats.com</a> </td><td></td></tr><tr><td> Siporax Medios </td><td> Hábitats Acuáticos, USA </td><td> BF 820 </td><td></td></tr><tr><td> Salmuera red camaronera </td><td> Hábitats Acuáticos, USA </td><td> BSN1 </td><td></td></tr><tr><td> Salmuera nacedora camarón </td><td> Hábitats Acuáticos, USA </td><td> BS252 </td><td></td></tr><tr><td> Pantallas </td><td> Hábitats Acuáticos, USA </td><td> <a href="http://www.aquatichabitats.com" target="_blank">aquatichabitats.com</a> </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Tabla 1. Tabla de reactivos y equipos específicos utilizados en este protocolo. </td></tr></tbody></table>

cuidado y mantenimiento regulares de un pez cebra (<em&gt; danio rerio</em&gt;) laboratorio: introducción

Regular Care and Maintenance of a Zebrafish (Danio rerio) Laboratory: An Introduction

Este protocolo describe el cuidado regular y el mantenimiento de un laboratorio de pez cebra. Pez cebra están ganando popularidad en la genética, la investigación farmacológica y conductual. Como un vertebrado, la cuota de pez cebra considerable similitud de secuencia genética con los humanos y están siendo utilizados como un modelo animal para diversos estados de enfermedad humanos. Las ventajas de pez cebra en comparación con otros modelos de vertebrados comunes incluyen alta fecundidad, bajo costo de mantenimiento, los embriones transparentes, y un rápido desarrollo. Debido al calor del interés por la investigación pez cebra, la necesidad de establecer y mantener un centro de pez cebra vivienda productiva también está aumentando. Aunque la literatura está disponible para el mantenimiento de un laboratorio de pez cebra, un protocolo de vídeo concisa que falta. Este video ilustra el protocolo para la vivienda, la alimentación, la reproducción y la crianza de larvas de pez cebra. Este proceso ayudará a los investigadores a entender el comportamiento natural y las condiciones óptimas de zebrafish cría y por lo tanto solucionar problemas experimentales que se originan en las condiciones de cría de peces. Este protocolo será de gran ayuda para los investigadores planean establecer un laboratorio de pez cebra, y también a los estudiantes graduados que tengan intención de utilizar el pez cebra como modelo animal.

Vivienda pez cebra y el mantenimiento es más fácil y más barato que los modelos de roedores tradicionales. Varios miles de pez cebra puede ser alojado en un pequeño laboratorio. Como resultado de este protocolo, los investigadores serán capaces de manejar una instalación de pez cebra que proporcionará condiciones saludables para el pez cebra. Además, las ilustraciones siguientes ayudará a identificar los huevos fertilizados, el pez cebra adultos, y su comida. Una ilustración de un pez cebra macho (Figura 1A) y el pez cebra hembra (Figura 1B y 1C) se muestra para ayudar a los investigadores distinguir entre un macho y una hembra de pez cebra para la cría de propósito Figura 2 representa una vista microscópica de;. Artemias a 12X (figura 2A), un camarón de salmuera solo a 90X (Figura 2B), y un óvulo no fertilizado en salmuera camarón 90X (Figura 2 C). Esto le ayudará a entender la diferencia entre camarones de salmuera no fertilizados y fertilizados para proper fines de alimentación animal. Los huevos fertilizados y sin fertilizar se muestra en la Figura 3. Figura 3A ilustra una vista microscópica de embriones fertilizados y no fertilizados. Embriones fertilizados son generalmente opacos y / o con ruptura de célula (s) en el interior del corion (negro flecha) mientras que los embriones fertilizados aparece intacta y creciente al estado de división celular siguiente (para la lectura detallada de las diferentes etapas de embriones de pez cebra ver 1). Superior vista ampliación de una figura fecundado un óvulo no fertilizado y se muestra en la Figura 3B y 3C, respectivamente. 4 ilustra ovipositor un pez cebra hembra para ayudar a los investigadores distinguir entre un macho y una hembra de pez cebra. Varios críticos problemas que se pueden producir en un laboratorio de pez cebra incluyen el bloqueo del suministro de agua a individuo / todos los tanques del sistema de vivienda, la calidad deficiente del agua y las fugas en las tuberías o reservorios del sistema de circulación. Además,problemas en la obtención de embriones de cría podría ser otro motivo de preocupación. Solución de problemas de estas cuestiones se discuten a continuación. <img src="/files/ftp_upload/4196/4196fig1.jpg" alt="Figura 1" /> Figura 1. Una ilustración de un pez cebra macho (A) y hembra pez cebra (B, C). <img src="/files/ftp_upload/4196/4196fig2.jpg" alt="Figura 2" /> Figura 2. Una vista microscópica de salmuera camarones a 12X (A), un camarón de salmuera sola en 90X (B), y un huevo no fertilizado en el camarón de salmuera 90X (C). <img src="/files/ftp_upload/4196/4196fig3.jpg" alt="Figura 3" /> Figura 3. Vista microscópica (16X) de huevos fertilizados y sin fertilizar, donde sólo dos huevos no fertilizados, los huevos no fertilizados se indican con flechas negras (A). Mayor aumentoVer (90X) de un. fertilizado (B) y un óvulo no fertilizado (C) <img src="/files/ftp_upload/4196/4196fig4.jpg" alt="Figura 4" /> Figura 4. Un pez cebra hembra ovipositor (indicado con la flecha negro) Ilustración. <table border="1"><tbody><tr><td fo:width="2in"> Parámetro </td><td fo:width="3in"> Rango óptimo </td></tr><tr><td> Alcalinidad </td><td> 50-150 mg / L CaCO 3 </td></tr><tr><td> pH </td><td> 06.08 a 07.05 (6,0-8,5 tolerada) </td></tr><tr><td> Temperatura </td><td> 26-28.5 ° C </td></tr><tr><td> Dureza </td><td> 50-100 mg / L CaCO 3 </td></tr><tr><td> El amoníaco no ionizado </td><td> &lt;0,02 mg / L </td></tr><tr><td> El nitrato (NO 3 -) </td><td> &lt;50 mg / L </td></tr><tr><td> Nitrito (NO 2 -) </td><td> &lt;0,1 mg / L </td></tr><tr><td> El oxígeno disuelto </td><td> &gt; 6,0 mg / L </td></tr><tr><td> Salinidad </td><td> 0.5-1 g / L </td></tr><tr><td> Conductividad </td><td> 300 -1 500 mS </td></tr></tbody></table> Tabla 2. Parámetros de calidad del agua. Parámetros de calidad del agua. Rango óptimo de los parámetros ambientales en el acuario de pez cebra 11.

Este protocolo describe un mantenimiento regular y el cuidado para mantener las condiciones óptimas para la cría de peces cebra. El vídeo muestra el protocolo para el mantenimiento del sistema, la vivienda, la alimentación, la reproducción, y la crianza de larvas de pez cebra.

Cuidado y mantenimiento regulares de un pez cebra (<em&gt; Danio rerio</em&gt;) Laboratorio: Introducción

Este protocolo describe los cuidados y el mantenimiento habitual de un laboratorio de pez cebra. El pez cebra está ganando popularidad en la genética, la farmacología y...

Este protocolo describe el cuidado y mantenimiento rutinarios de un laboratorio de peces cebra. Debido al creciente interés en la investigación con peces cebra, la necesidad de establecer y mantener una instalación para su alojamiento también va en aumento. Aunque existe literatura sobre el mantenimiento de un laboratorio de peces cebra, falta un protocolo en video conciso.Este video explica el mantenimiento del sistema, la alimentación, la reproducción y el criado de larvas de pez cebra. Hola, soy ABH de la Escuela de Ciencias Médicas de la Universidad. Hola, soy Manchi del Instituto Thee.Hoy vamos a mostrarle los cuidados y mantenimiento regulares de un laboratorio de pez cebra. El pez cebra se está volviendo popular en la investigación genética, farmacológica y conductual. Debido a su fácil mantenimiento y desarrollo rápido, es altamente adecuado para la modulación genética y apropiado para cribados de fármacos a gran escala.Esta sección proporciona ideas sobre el cuidado de peces cebra a aquellos usuarios y científicos que están considerando establecer una nueva instalación para peces. Comencemos. Varias empresas ofrecen sistemas para peces, pero nosotros utilizamos sistemas de Aquatic Habitats.En nuestro laboratorio, los peces cebra se mantienen a una temperatura de 26 a 28,5 grados Celsius y un ciclo de luz-oscuridad de 14 a 10 horas. Los peces cebra se alojan en un sistema de circulación que filtra y airea continuamente el agua del sistema. Para mantener la calidad del agua necesaria para un entorno acuático saludable, el sistema utiliza un conjunto de filtros de diferentes tipos dentro de nuestro sistema.El agua de los tanques pasa a través de una almohadilla de filtración, filtro de cartucho, filtro biológico, filtro de carbón activado y filtro UV antes de recircularse de nuevo al tanque. En el sistema de pez cebra se utiliza agua desclorada o envejecida. El agua puede desclorarse mediante envejecimiento durante al menos 48 horas.Verifique diariamente el pH del agua del sistema y manténgalo entre 6,8 y 7,5. Utilizando bicarbonato de sodio, los acuarios deben limpiarse regularmente. Para limpiar un acuario, cierre el flujo de agua hacia este tanque, drene el exceso de agua inclinando el tanque hacia atrás y retire cuidadosamente el tanque del sistema.Prepare un tanque limpio y llénelo con agua del sistema. Transfiera cuidadosamente los peces a este tanque usando una red para peces. Cierre la tapa y sustituya con cuidado la etiqueta con el nombre del tanque.Coloque el tanque en el sistema. Vuelva a colocar el tubo dentro del tanque y encienda el suministro de agua. Descontamine la red para peces y el tanque con etanol al 70%.Lave con agua y deje secar. Antes de reutilizar, los filtros del sistema de circulación deben revisarse y cambiarse regularmente para garantizar su funcionamiento adecuado.El filtro de 120 micrones se verifica y reposiciona hacia el flujo de agua todos los días antes de ser reemplazado. El filtro de cartucho debe cambiarse semanalmente. Para cambiar el filtro de cartucho, retírelo con una llave inglesa o con las manos.Coloque una lámina de plástico o una toalla debajo para evitar derrames de agua. Inserte un nuevo cartucho, filtro y coloque nuevamente la unidad en el sistema. Ajuste cuidadosamente con las manos y con una llave inglesa.Si es necesario, el filtro de carbón debe cambiarse cada dos semanas. Para cambiar el filtro de carbón, retírelo con cuidado. Con una llave en la mano, deseche el carbón activado del filtro y reemplácelo con carbón activado nuevo.Vuelva a colocar el soporte de carbón y colóquelo nuevamente en la unidad de filtro. Instale la unidad de filtro de nuevo en el sistema. Encienda el sistema y verifique si el agua está fluyendo hacia el filtro.El filtro biológico debe limpiarse cada seis meses. Para cambiar el filtro biológico, retire el filtro del sistema. Libere la presión del filtro presionando el botón de liberación de presión.Saque el filtro y retire la tapa. Vacíe el contenido en un recipiente tamizador para separar el Cy Oex del agua. Si el Cy Oex está muy sucio, reemplácelo.Llene el filtro con el nuevo citrato de ax. Llene la unidad con agua del sistema. Cierre la tapa del filtro, vuelva a colocar la unidad y enciéndala.Los filtros UV se utilizan para controlar los contaminantes biológicos y deben reemplazarse cada nueve a diez meses. Los peces cebra pueden alimentarse con alimento seco o alimentos vivos como camarones de salmuera; los huevos de camarón de salmuera están disponibles en tiendas locales de mascotas y pueden eclosionarse en el laboratorio siguiendo los sencillos pasos descritos aquí. Disuelva sal marina roja en agua del sistema para obtener una solución de 30 a 35 gramos por litro.Llene el criadero de artemias con agua salada y agregue los huevos de camarón a una concentración de 1,2 cucharadas por litro. Aere el criadero vigorosamente con una bomba de aire y deje que los huevos de artemia se fertilicen durante aproximadamente 48 horas. Retire el tubo de aire y deje reposar la cultura durante cuatro a cinco minutos.Los camarones de salmuera fertilizados se reúnen en el fondo del incubador; utilizando la llave situada en la parte inferior del incubador, deseche el primer flujo, que contiene los huevos no fertilizados. A continuación, recolecte los camarones de salmuera fertilizados. Separe los camarones de salmuera del agua salada.Utilizando una red de recolección de camarones de salmuera, enjuague los camarones hacia un recipiente usando agua del sistema. Los camarones de salmuera quedan concentrados en elevada cantidad en el fondo del recipiente y ya están listos para alimentar a los peces cebra. Alimente a los peces con los camarones de salmuera utilizando una pipeta o un gotero.La cantidad de alimento dispensado depende del tamaño de la población de los tanques individuales. Después de inyectar alimento en el agua, los peces hambrientos nadan para atrapar los camarones de salmuera, lo cual es importante para su ejercicio regular. La alimentación seca puede realizarse ya sea utilizando hábitats acuáticos, un dispensador de alimento para peces, o mediante una cuchara sencilla.Los peces cebra inician el desove al comienzo de la luz. Los huevos se pueden obtener mediante desove colectivo o por parejas. Aunque el desove colectivo es más eficiente en mano de obra y se utiliza en la recolección habitual de embriones, se prefiere el desove por parejas cuando se deben analizar genes o mutaciones en el desove en tanque; arme el reproductor en el tanque y colóquelo lentamente dentro del tanque.Después del encendido de la luz, deje el conjunto de apareamiento en el tanque durante aproximadamente 15 minutos para permitir que los peces se reproduzcan antes de retirar al reproductor del tanque y recolectar los huevos. El apareamiento por pares se establece a última hora de la tarde ensamblando el tanque de reproducción y llenándolo con agua del sistema. Transfiera una hembra y un macho a lados opuestos del tanque.Las hembras pueden distinguirse de los machos por su vientre más grande. Retire el divisor a la mañana siguiente. Poco después del inicio de la luz, deje que los peces se reproduzcan sin molestias durante 20 minutos o hasta que se hayan depositado cantidades suficientes de embriones en el fondo del tanque.Después del apareamiento, devuelva los peces a sus tanques. Recoja los huevos con un colador. Lave cuidadosamente los embriones.Con agua del sistema. Transfiera los embriones a una placa de Petri enjuagando el colador con medio para embriones. Los embriones pueden observarse bajo un microscopio.Los embriones no fertilizados deben separarse de los embriones fertilizados utilizando una aguja y una pipeta. Después de separar los huevos fertilizados de los no fertilizados, se mantienen en una incubadora a aproximadamente 28,5 grados Celsius durante 72 horas, hasta que las larvas eclosionen. Ahora las larvas han salido de los COR y nadan libremente.Las larvas deben alimentarse a partir de los cinco días posteriores a la fertilización y mantenerse en agua estancada durante unos días antes de transferirlas al sistema. Transfiera suavemente las larvas a un tanque que contenga una malla de tamaño pequeño de aproximadamente entre 300 y 400 micrones. Después de 14 días, los tanques con larvas pueden colocarse en el sistema y abastecerse con un pequeño flujo de agua en circulación.Se deben utilizar deflectores de diferentes tamaños según el tamaño de las larvas y los peces adultos. Por lo general, los embriones tardan tres meses en desarrollarse hasta convertirse en adultos sexualmente maduros. Gracias por ver el menú y buena suerte en sus experimentos.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

El pez cebra maxilar barbos es un órgano sensorial que contiene tegumentario ectodérmica, mesodérmica y derivados de la cresta neural. Es importante destacar que, el barbo adultos pueden regenerarse después de una amputación proximal. Este video presenta el desarrollo del maxilar barbos y demuestra un protocolo quirúrgico para inducir la regeneración, seguida por la imagen recogida, incorporación y posterior de las muestras barbos.

Métodos para el Estudio de la barbo pez cebra maxilar

El embrión de pez cebra es un excelente modelo para la investigación de la biología del desarrollo. Durante la embriogénesis, el desarrollo de pez cebra con una masa de yema, que presenta retos en tres dimensiones para la observación de muestras y análisis. Este protocolo se describe cómo crear dos dimensiones planas montar preparaciones de todo el montaje in situ (WISH), teñidas muestras de embriones de pez cebra.

Preparativos Piso en observación y análisis de embrión de pez cebra muestras teñidas por todo el montaje<em&gt; In situ</em&gt; La hibridación

Una instalación de pez cebra adecuada para la cría y la investigación in vivo se construye de manera fácil y asequible. El mantenimiento es mínimo. Esta instalación es ideal para la participación de los estudiantes y la investigación independiente.

Construcción de un Build-Fácil-Fondo de pez cebra asequible y

Las larvas de pez cebra están adaptadas para alimentarse de zooplancton. Es posible capitalizar esta característica natural en el laboratorio cultivando peces que se alimentan primero juntos en el mismo sistema con rotíferos vivos de agua salada.  Esta estrategia de "policultivo" promueve un alto crecimiento y supervivencia con un mínimo de trabajo y perturbación para las larvas.

La completa y actualizada &quot;rotífero policultivo Método&quot; para la educación de primer pez cebra Alimentación

Este protocolo describe los pasos principales para obtener embriones de peces libres de gérmenes (GF) y mantenerlos desde las larvas hasta la etapa juvenil, incluido el muestreo y la detección de su estado estéril. El uso de modelos de GF con infección es importante para comprender el papel de los microbios en la salud del huésped.

Generación, mantenimiento e identificación de modelos de pez cebra libres de gérmenes desde las larvas hasta las etapas juveniles

Este protocolo describe un método de microscopía óptica de bajo costo para evaluar la morfología y función cardíaca en embriones de pez cebra, lo que permite una evaluación reproducible de la cardiotoxicidad del desarrollo sin la necesidad de sistemas de imágenes avanzados.

Imágenes cardíacas funcionales en embriones de pez cebra mediante microscopía estándar y análisis de video: aplicaciones en investigación ambiental y biomédica

Aquí presentamos un protocolo novedoso, fácil de construir y de bajo coste para la recirculación de alojamientos de peces cebra.

Un sistema de alojamiento recirculante personalizado para peces cebra

Mantener el microscopio óptico limpio es importante para la imagen de alta calidad. Polvo, huellas dactilares, aceite de inmersión en exceso, o en medio de montaje o en un microscopio produce una reducción en el contraste y resolución. DIC es especialmente sensible a la contaminación y los arañazos en la superficie de las lentes. Este protocolo se detalla el procedimiento para mantener limpio el microscopio.

Limpieza y cuidado apropiado del microscopio

A continuación se describe la técnica de preparación y mantenimiento de cámaras de compartimentos de las neuronas sensoriales de cultivo de los ganglios de la raíz dorsal.

Preparación y mantenimiento de las neuronas dorsales ganglios de raíz en las culturas con compartimientos

El epitelio sensorial del oído interno de los adultos de pez cebra es un buen modelo de sistema para la comprensión de los mecanismos de regeneración de las células ciliadas en los vertebrados adultos. Este protocolo demuestra la disección fina de los epitelios, a través del cual podemos obtener muestras de tejido para el estudio de los eventos de regeneración a nivel celular y subcelular.

La disección fina y gruesa de los epitelios sensoriales del oído interno en adultos de pez cebra ( Danio rerio)

Aprende el mantenimiento regular de un laboratorio de peces cebra Danio rerio, incluyendo alimentación, cría y cuidado de larvas. Este protocolo ayuda a investigadores a establecer instalaciones óptimas.

Cuidado y mantenimiento regulares de un pez cebra (

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