Name: La endotelina-1 inducida por la arteria cerebral media oclusión Modelo para el ictus isquémico con Orientación flujometría láser Doppler en la rata (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-02-16T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 26 s
Description: Aprende el modelo MCAO inducido por endotelina-1 para estudiar ictus isquémico en ratas usando flujometría láser Doppler. Este método quirúrgico menos invasivo permite investigar mecanismos cerebrovasculares con control de flujo sanguíneo.

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Este trabajo fue apoyado por becas de la Asociación Americana del Corazón Afiliado Mayor Sudeste (09GRNT2060421), la American Medical Association, y de la Universidad de Florida Clínica y Traslacional Science Institute. Adán Meca es un compañero NIH / NINDS, NRSA predoctoral (F30 NS-060335). Robert Regenhardt recibido apoyo beca predoctoral de la Universidad de Florida Programa de Entrenamiento Multidisciplinario de Hipertensión (T32 HL-083810).

Este protocolo fue aprobado por el Cuidado de Animales institucional y el empleo Comisión (IACUC) de la Universidad de Florida y está en conformidad con la &quot;Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio&quot; (octava edición de la Academia Nacional de Ciencias, 2011). Materiales <ol><li> Animales: Ocho semanas de edad, macho, Sprague Dawley (Charles River Farms, Wilmington, MA, EE.UU.) con un peso de 250-300 g en el momento de la cirugía. </li><li> Anestesia <ol class="lalpha"><li> Inhalación sistema de anestesia (VetEquip Inc., Pleasanton, CA, EE.UU.) </li><li> El isoflurano anestesia (Farmacia Baxter, Deerfield, IL, EE.UU.) </li></ol></li><li> Estereotáxica sistema (David Kopf Instruments, Tujunga, CA, EE.UU.) <ol class="lalpha"><li> Animal Pequeño sistema estereotáxico </li><li> Para no romper los oídos barras para ratas </li><li> Anestesia Gas cabeza titular para ratas </li></ol></li><li> Regulación de la temperatura<ol class="lalpha"><li> BAT-12 microsonda termómetro (World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, EE.UU.) </li><li> T / PUMP, TP600 manta térmica (Industrias Gaymar, Inc., Orchard Park, Nueva York, EE.UU.) </li></ol></li><li> Los instrumentos quirúrgicos <ol class="lalpha"><li> Mango de bisturí y la cuchilla # 11, iris pinzas, fórceps Graefe, retractores bulldog pinza, destornillador, jeringa de 10 ml con aguja de calibre 26 biselado (World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, EE.UU.) </li><li> Micromotor taladro y soporte estereotáxico, Quintessential inyección estereotáxica (Stoelting, Wood Dale, IL, EE.UU.) </li><li> 1,0 mm fresa fresa redonda, 1,0 mm cono invertido taladro fresa (Roboz Surgical Instrument Co., Inc., Gaithersburg, MD, EE.UU.) </li></ol></li><li> Suministros Quirúrgicos <ol class="lalpha"><li> Tornillos de montaje 0-80 x 3/32 de 2,4 mm de longitud del eje, 21-calibre cánula guía [4 mm de largo por debajo del pedestal] y maniquí cánula (un plástico, Roanoke, VA, EE.UU.) </li><li> Jet acrílico de la dentadura y líquidos (Lang Dental Manufacturing Co., Inc., Chicago, IL, EE.UU.) </li><li> 3,0 nylon sutura (Oasis, Mettawa, IL, EE.UU.) </li><li> Hisopos de algodón, pomada ocular Puralube (Fisher Científico, Pittsburgh, PA, EE.UU.) </li><li> Máquinas de cortar el cabello (eléctricas Oster, Providence, Rhode Island, EE.UU.) </li></ol></li><li> Químicos <ol class="lalpha"><li> La endotelina-1 (American Peptide, Sunnyvale, CA, EE.UU.) </li><li> La clorhexidina al 2% (Agrilabs, St. Joseph, MO, EE.UU.) </li><li> Buprenorfina HCl (Hospira Inc., de Lake Forest, IL, EE.UU.) </li></ol></li><li> Visualización de equipos <ol class="lalpha"><li> Microscopio quirúrgico (Seiler Instrument and Manufacturing, St. Louis, MO, EE.UU.) </li><li> Iluminador de fibra óptica (TechniQuip Corp., Livermore, CA, EE.UU.) </li></ol></li><li> Flujometría láser Doppler del sistema (ADInstruments, Inc., Colorado Springs, CO, EE.UU.) <ol class="lalpha"><li> StPencil Probe Andard </li><li> Probe titular </li><li> Sangre FlowMeter </li><li> Powerlab 4/30 con LabChart 7 </li></ol></li><li> Medición del volumen del infarto <ol class="lalpha"><li> Rata cerebro matriz (Zivic-Miller Lab., Inc., Allison Park, PA, EE.UU.) </li><li> 2,3,5-trifeniltetrazolio (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, EE.UU.) diluido al 0,05% en PBS </li><li> Escáner plano (Epson Perfection V30 de Epson America, Inc., Long Beach, CA, EE.UU.) </li><li> Image J software (software ImageJ 1.42q, EE.UU. Institutos Nacionales de Salud, Bethesda, MA, EE.UU.) </li></ol></li></ol> 1. Pre-quirúrgicos Pasos <ol><li> Antes de la cirugía, las ratas se alojaron en un 12:12 luz / oscuridad ciclo con acceso libre a comida y agua roedores. </li><li> La anestesia se indujo con 4% de isoflurano en el 100% de mezcla gas O 2 en una cámara de inducción hasta que la rata ya no retiradas a pinch pata trasera. </li><li> Latécnica séptica se debe mantener durante este procedimiento, incluyendo el uso de guantes estériles y estériles instrumentos quirúrgicos y un campo estéril quirúrgico 11. </li><li> La corona de la cabeza rapada con cortar el pelo eléctricas. </li><li> La rata se coloca en la posición de decúbito prono sobre una almohadilla absorbente tendido en una superficie de operación de temperatura controlada (manta térmica). </li><li> La cabeza se coloca en el aparato estereotáctico de partida con la colocación de la máscara facial gas anestésico. </li><li> A continuación, las barras del oído se inserta y se aprieta. </li><li> Durante el procedimiento de anestesia se mantiene con 2% de isoflurano en 100% de mezcla de gas O 2. </li><li> Ungüento oftálmico lubricante se aplica a ambos ojos y los párpados están cerrados para prevenir la desecación del ojo durante el procedimiento quirúrgico. </li><li> Una sonda de temperatura rectal es insertado para mantener una temperatura constante animales núcleo de 37 ± 0,5 ° C. </li><li> Con la cabeza mantiene firmemente en la estereotáxicodispositivo, el área quirúrgica se limpia con alternancia de clorhexidina al 2% y solución salina tres veces. </li></ol> 2. Pasos quirúrgicos <ol><li> Con un escalpelo, una incisión central se hace en la piel que cubre la bóveda craneal de los aspectos más caudales de los ojos (nasión) a entre las orejas (línea nucal superior). </li><li> La piel se retrae lateralmente con 3 pinzas bulldog. </li><li> El tejido conectivo está retirado del cráneo utilizando hisopos de algodón seco para que múltiples estructuras se pueden ver claramente. Estos incluyen bregma, la sutura coronal, y la cresta lateral derecha del cráneo. Bastoncillos de algodón se utilizan para eliminar la sangre del campo quirúrgico. </li><li> El uso del microscopio quirúrgico, bregma se encuentra, y los manipuladores estereotáxica se ajustan hasta que la fresa 1,0 mm redondo taladro se pone a cero a bregma. </li><li> La fresa de perforación se mueve entonces a 1,6 mm anterior y 5,2 mm lateral al bregma. </li><li> Un agujero de fresa que penetra en el cráneo perforado por cannula colocación (Figura 1). El exceso de suciedad y la sangre están constantemente limpiado utilizando hisopos de algodón. </li></ol> En este punto, una cánula de guía puede ser insertado (paso 7) o una directa ET-1 de inyección a través del orificio de fresa se puede realizar (vaya directamente al paso 16). <ol start="7"><li> Luego los agujeros, BUR 3 para los tornillos de montaje están perforados a través de espesor parcial del cráneo usando un cono invertido 1,0 mm taladro fresa (Figura 1). Un agujero es perforado en cada hueso frontal aproximadamente 1-2 mm por delante de la sutura coronal y 1-2 mm lateral a la sutura sagital. Un agujero es perforado en el hueso parietal de unos 2-3 mm posterior a la sutura coronal y 2-3 mm lateral a la sutura sagital ipsilateral al agujero de guía para cánula fresa. Tres 0-80 x 3/32 tornillos de montaje se colocan en los agujeros fresa y proporcionará apoyo para el cemento que en la cánula. Los tornillos deben ser avanzado 2 o 3 vueltas a fin de no dañar la duramadre. </li&gt; <li> La cánula de guía se coloca en el soporte de cánula estereotáxico y se encuentra bregma. </li><li> Los manipuladores estereotáxica se ajustan hasta que la cánula guía se pone a cero a bregma. La cánula se mueve en el orificio situado fresa de 1,6 mm anterior y 5,2 mm lateral al bregma. </li><li> Finalmente, la cánula guía se introduce en el agujero de la fresa con la posición de la punta final de 4,5 mm ventral a la bregma. </li><li> Laser Doppler sonda de colocación (opcional) <ol class="lalpha"><li> Con el fin de controlar el flujo sanguíneo cerebral usando LDF, un soporte de la sonda se puede colocar en posición antes de la colocación de la cánula guía con cemento dental. </li><li> La base de soporte de la sonda se recorta a ras con el pedestal a excepción de pestaña en forma de cuña pequeña. </li><li> El soporte de la sonda se coloca posterior a la cánula guía y justo medial al canto lateral del cráneo con la pestaña orientado medialmente (Figura 1). </li><li> El soporte de la sonda y guía cánula se fijan entre sí mediante cemento dental. </li></ol></li><li> Cemento dental se utiliza entonces para asegurar la cánula en su lugar. El cemento está en contacto con los tres tornillos y rodea toda la base de la cánula. </li><li> El cemento debe estar completamente seca antes de la retirada del soporte de cánula. Esto toma alrededor de 5 min. </li></ol> Después de estos pasos, la incisión quirúrgica se puede cerrar y el maniquí cánula se puede atornillar en la cánula guía. Alternativamente, ET-1 inducida por MCAO se puede realizar en la rata después de un período de recuperación de la cirugía de implante de la cánula. Para este método, el paso 19 se debe realizar próximo y pasos 14-18 se puede realizar en un momento posterior. Para llevar a cabo la implantación cánula guía y la inyección de ET-1 durante la misma cirugía, el paso 14 se debe realizar después. <ol start="14"><li> La jeringuilla de infusión se carga con ET-1 (diluida a 80 mM en PBS) y luego se monta en el inyector estereotáxica. </li><li> Lamanipuladores estereotáxicas se ajustan hasta que la punta de la aguja se pone a cero en el borde de la cánula guía. </li><li> La punta de la aguja se baja a través de la cánula guía hasta una posición de 17,2 mm ventral a la llanta de la cánula guía. Si una cánula guía no se utiliza, la punta de la aguja se pone a cero al bregma y bajado a través del agujero de la fresa para una posición de 8,7 mm ventral a la bregma. </li><li> 3 l de 80 mM ET1 se infunde a una velocidad de 1 l por min. </li><li> La jeringa se deja en su lugar durante 3 min después de la infusión es completa y luego se extrae lentamente. </li><li> La incisión se cierra con sutura de nylon 3,0 y el maniquí cánula se enrosca en la cánula. </li><li> Una dosis de analgésico apropiado (es decir, la buprenorfina en 0.05-0.1 mg / kg) se debe utilizar después de la cirugía para minimizar el dolor y la incomodidad durante el período de recuperación. </li><li> La rata se retira de la sala de operaciones y se coloca en un lugar caliente y seco recuperación para prevenir la hipotermia, con acceso libre y fácil a una alimentación suave y agua. </li&gt; </ol>

<ol><li>Stroke--1989. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recommendations+on+stroke+prevention%2C+diagnosis%2C+and+therapy.+Report+of+the+WHO+Task+Force+on+Stroke+and+other+Cerebrovascular+Disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Recommendations on stroke prevention, diagnosis, and therapy. Report of the WHO Task Force on Stroke and other Cerebrovascular Disorders.</a> Stroke. 20, 1407-1431 (1989).</li>
<li>Lloyd-Jones, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+disease+and+stroke+statistics--2009+update%3A+a+report+from+the+American+Heart+Association+Statistics+Committee+and+Stroke+Statistics+Subcommittee%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Heart disease and stroke statistics--2009 update: a report from the American Heart Association Statistics Committee and Stroke Statistics Subcommittee.</a> Circulation. 119, 480-486 (2009).</li>
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<li>Mecca, A. P., O'Connor, T. E., Katovich, M. J., Sumners, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candesartan+pretreatment+is+cerebroprotective+in+a+rat+model+of+endothelin-1-induced+middle+cerebral+artery+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Candesartan pretreatment is cerebroprotective in a rat model of endothelin-1-induced middle cerebral artery occlusion.</a> Exp. Physiol. 94, 937-946 (2009).</li>
<li>Braeuninger, S., Kleinschnitz, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+models+of+focal+cerebral+ischemia%3A+procedural+pitfalls+and+translational+problems%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Transl.+Stroke+Med%22%5BJournal%5D)">Rodent models of focal cerebral ischemia: procedural pitfalls and translational problems.</a> Exp. Transl. Stroke Med. 1, 8(2009).</li>
<li>Tomsick, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+thrombolysis+for+acute+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vasc.+Interv.+Radiol%22%5BJournal%5D)">Intravenous thrombolysis for acute ischemic stroke.</a> J. Vasc. Interv. Radiol. 15, 67-76 (2004).</li>
<li>Olsen, T. S., Lassen, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dynamic+concept+of+middle+cerebral+artery+occlusion+and+cerebral+infarction+in+the+acute+state+based+on+interpreting+severe+hyperemia+as+a+sign+of+embolic+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">A dynamic concept of middle cerebral artery occlusion and cerebral infarction in the acute state based on interpreting severe hyperemia as a sign of embolic migration.</a> Stroke. 15, 458-468 (1984).</li>
<li>Pritchett-Corning, K. R., Luo, Y., Mulder, G. B., White, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+of+rodent+surgery+for+the+new+surgeon%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Principles of rodent surgery for the new surgeon.</a> J. Vis. Exp. (47), e2586(2011).</li>
<li>Gonzalez, C. L., Kolb, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+different+models+of+stroke+on+behaviour+and+brain+morphology%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A comparison of different models of stroke on behaviour and brain morphology.</a> Eur. J. Neurosci. 18, 1950-1962 (2003).</li>
<li>Ansari, S., Azari, H., McConnell, D. J., Afzal, A., Mocco, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraluminal+middle+cerebral+artery+occlusion+%28MCAO%29+model+for+ischemic+stroke+with+laser+doppler+flowmetry+guidance+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model for ischemic stroke with laser doppler flowmetry guidance in mice.</a> J. Vis. Exp. (51), e2879(2011).</li>
<li>Sharkey, J., Butcher, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterisation+of+an+experimental+model+of+stroke+produced+by+intracerebral+microinjection+of+endothelin-1+adjacent+to+the+rat+middle+cerebral+artery%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Characterisation of an experimental model of stroke produced by intracerebral microinjection of endothelin-1 adjacent to the rat middle cerebral artery.</a> J. Neurosci. Methods. 60, 125-131 (1995).</li>
<li>Macrae, I. M., Robinson, M. J., Graham, D. I., Reid, J. L., McCulloch, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelin-1-induced+reductions+in+cerebral+blood+flow%3A+dose+dependency%2C+time+course%2C+and+neuropathological+consequences%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Endothelin-1-induced reductions in cerebral blood flow: dose dependency, time course, and neuropathological consequences.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 13, 276-284 (1993).</li>
<li>Mecca, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebroprotection+by+angiotensin-%281-7%29+in+endothelin-1-induced+ischaemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Cerebroprotection by angiotensin-(1-7) in endothelin-1-induced ischaemic stroke.</a> Exp. Physiol. 96 (1-7), 1084-1096 (2011).</li>
<li>Fisher, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Update+of+the+stroke+therapy+academic+industry+roundtable+preclinical+recommendations%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Update of the stroke therapy academic industry roundtable preclinical recommendations.</a> Stroke. 40, 2244-2250 (2009).</li>
</ol>

No hay conflictos de interés declarado.

La ET-1 inducida por MCAO es un modelo establecido de accidente cerebrovascular isquémico experimental que se utiliza regularmente en múltiples cepas de ratas. Muchas variables, como la cepa de rata, la edad del animal, la temperatura corporal, el método de anestesia, y la experiencia del operador puede conducir a una mayor variabilidad en los volúmenes de infarto cuando se utiliza este modelo de 5, 14. Sin embargo, varios investigadores han demostrado que las ventajas de este modelo incluyen el enfoque rela...

<table border="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td><td><ol><li> Animales: Ocho semanas de edad, macho, Sprague Dawley (Charles River Farms, Wilmington, MA, EE.UU.) con un peso de 250-300 g en el momento de la cirugía. </li><li> Anestesia <ol class="lalpha"><li> Inhalación sistema de anestesia (VetEquip Inc., Pleasanton, CA, EE.UU.) </li><li> El isoflurano anestesia (Farmacia Baxter, Deerfield, IL, EE.UU.) </li></ol></li><li> Estereotáxica sistema (David Kopf Instruments, Tujunga, CA, EE.UU.) <ol class="lalpha"><li> Animal Pequeño sistema estereotáxico </li><li> Para no romper los oídos barras para ratas </li><li> Anestesia Gas cabeza titular para ratas </li></ol></li><li> Regulación de la temperatura <ol class="lalpha"><li> BAT-12 microsonda termómetro (World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, EE.UU.) </li><li> T / PUMP, TP600 manta térmica (Industrias Gaymar, Inc., Orchard Park, Nueva York, EE.UU.) </li></ol></li><li> Los instrumentos quirúrgicos <ol class="lalpha"><li> Mango de bisturí y la cuchilla # 11, iris pinzas, fórceps Graefe, retractores bulldog pinza, destornillador, jeringa de 10 ml con aguja de calibre 26 biselado (World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, EE.UU.) </li><li> Micromotor taladro y soporte estereotáxico, Quintessential inyección estereotáxica (Stoelting, Wood Dale, IL, EE.UU.) </li><li> 1,0 mm fresa fresa redonda, 1,0 mm cono invertido taladro fresa (Roboz Surgical Instrument Co., Inc., Gaithersburg, MD, EE.UU.) </li></ol></li><li> Suministros Quirúrgicos <ol class="lalpha"><li> Tornillos de montaje 0-80 x 3/32 de 2,4 mm de longitud del eje, 21-calibre cánula guía [4 mm de largo por debajo del pedestal] y maniquí cánula (un plástico, Roanoke, VA, USA) </li><li> Jet acrílico de la dentadura y líquidos (Lang Dental Manufacturing Co., Inc., Chicago, IL, EE.UU.) </li><li> 3,0 nylon sutura (Oasis, Mettawa, IL, EE.UU.) </li><li> Hisopos de algodón, pomada ocular Puralube (Fisher Scientific, Pittsburg, PA, EE.UU.) </li><li> Máquinas de cortar el cabello (eléctricas Oster, Providence, Rhode Island, EE.UU.) </li></ol></li><li> Químicos <ol class="lalpha"><li> La endotelina-1 (American Peptide, Sunnyvale, CA, EE.UU.) </li><li> La clorhexidina al 2% (Agrilabs, St. Joseph, MO, EE.UU.) </li><li> Buprenorfina HCl (Hospira Inc., de Lake Forest, IL, EE.UU.) </li></ol></li><li> Visualización de equipos <ol class="lalpha"><li> Microscopio quirúrgico (Seiler Instrument and Manufacturing, St. Louis, MO, EE.UU.) </li><li> Iluminador de fibra óptica (TechniQuip Corp., Livermore, CA, EE.UU.) </li></ol></li><li> Flujometría láser Doppler del sistema (ADInstruments, Inc., Colorado Springs, CO, EE.UU.) <ol class="lalpha"><li> Probe lápiz estándar </li><li> Probe titular </li><li> Sangre FlowMeter </li><li> Powerlab 4/30 con LabChart 7 </li></ol></li><li> Medición del volumen del infarto <ol class="lalpha"><li> De cerebro de ratamatriz (Zivic-Miller Lab., Inc., Allison Park, PA, EE.UU.) </li><li> 2,3,5-trifeniltetrazolio (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, EE.UU.) diluido al 0,05% en PBS </li><li> Escáner plano (Epson Perfection V30 de Epson America, Inc., Long Beach, CA, EE.UU.) </li><li> Image J software (software ImageJ 1.42q, EE.UU. Institutos Nacionales de Salud, Bethesda, MA, EE.UU.) </li></ol></li></ol></td></tr></tbody></table>

la endotelina-1 inducida por la arteria cerebral media oclusión modelo para el ictus isquémico con orientación flujometría láser doppler en la rata

Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Rat

El ictus es la primera causa de discapacidad y la tercera causa de muerte en el mundo, con un costo estimado de $ 70 mil millones en los Estados Unidos en 2009 1, 2. Varios modelos de isquemia cerebral se han desarrollado para imitar la condición humana de accidente cerebrovascular. Se ha sugerido que hasta el 80% de todos los accidentes cerebrovasculares resultado de daño isquémico en la arteria cerebral media (MCA) zona 3. En la década de 1990, la endotelina-1 (ET-1) 4 fue utilizado para inducir isquemia aplicándolo directamente adyacente a la superficie de la MCA después de la craneotomía. Más tarde, este modelo fue modificado 5 mediante el uso de una inyección estereotáxica de ET-1 adyacente a la MCA para producir isquemia cerebral focal. Las principales ventajas de este modelo incluyen la capacidad de realizar el procedimiento rápidamente, la capacidad de controlar la constricción de las arterias mediante la alteración de la dosis de ET-1 emitido, no hay necesidad de manipular los vasos extracraneales que suministran sangre al cerebro, así como gradual reperfusien las tarifas que más estrechamente imita la reperfusión en los seres humanos 5-7. Por otro lado, el modelo ET-1 tiene desventajas que incluyen la necesidad de una craneotomía, así como una mayor variabilidad en el volumen de eyección 8. Esta variabilidad se puede reducir con el uso de la flujometría láser Doppler (LDF) para verificar la isquemia cerebral durante la infusión de ET-1. Factores que afectan la variabilidad apoplejía incluyen precisión de la infusión y el lote de la ET-1 usado 6. Otra consideración importante es que a pesar de la reperfusión es una ocurrencia común en el ictus humano, la duración de la oclusión para ET-1 inducida por MCAO no puede imitar estrechamente la de apoplejía humana donde muchos pacientes tienen reperfusión parcial durante un período de horas a días después de la oclusión 9, 10. Este protocolo se describen en detalle la ET-1 inducida por MCAO modelo de accidente cerebrovascular isquémico en ratas. También se hará referencia a consideraciones especiales e inconvenientes potenciales durante el procedimiento.

1. Post-Op evaluación neurológica Después de que el animal recobre el conocimiento, una amplia variedad de pruebas se puede utilizar para evaluar los déficits neurológicos, incluyendo el equilibrio, la fuerza de agarre, colocación pata, la asimetría postural y la escalera de escalada. La tarea de semilla de girasol es una evaluación bruto de la función motora y sensorial que tiene una correlación significativa con el volumen de infarto 7, 12. Durante esta tarea, las ratas son a tiemp...

Varios modelos animales de isquemia cerebral han sido desarrollados para simular la condición humana de accidente cerebrovascular. Este protocolo describe la endotelina-1 (ET-1) inducida por la oclusión de la arteria cerebral media (MCAO) modelo de accidente cerebrovascular isquémico en ratas. Además, las consideraciones importantes, ventajas y deficiencias de este modelo se discuten.

La endotelina-1 inducida por la arteria cerebral media oclusión Modelo para el ictus isquémico con Orientación flujometría láser Doppler en la rata

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in ...

Este protocolo de video describe un modelo de oclusión de la arteria cerebral media inducida por endotelio para el accidente cerebrovascular isquémico con guía inflamatoria por doppler láser en rata. Esto se logra observando varios puntos de referencia como se muestra e inyectando uno endotelial a través de un orificio de rebaba con o sin el uso de una cánula guía. Se han desarrollado múltiples métodos de isquemia cerebral para modelar la condición humana del accidente cerebrovascular.Un modelo consiste en la inyección de un potente vasoconstrictor endotelial uno u 81 en el cerebro adyacente a la arteria cerebral media después de un tumor craneal. Las principales ventajas del modelo ET de un solo golpe son que la cirugía se puede realizar rápidamente y es menos invasiva en comparación con otros modelos, como la oclusión intraluminal de la arteria cerebral media inducida por filamentos. Sin embargo, el modelo ET de un solo golpe tiene algunas desventajas, incluida la necesidad de craneotomía, así como una mayor variabilidad en el volumen sistólico.Este video demostrará de manera escalonada el modelo ET de un solo golpe para el accidente cerebrovascular isquémico en ratas. También discutiremos varias consideraciones especiales, así como las trampas comunes de este procedimiento. Así que comencemos.La anestesia se induce con flúor ISO al 4% en oxígeno en una cámara de inducción y se mantiene durante la cirugía al 2%Después de anestesiar a la rata, se extrae el pelo de la coronilla con cortapelos eléctricos. A continuación, la rata se coloca en posición prona sobre una gasa colocada en una superficie de funcionamiento con temperatura controlada con la cabeza colocada en el aparato estereotáctico. A continuación, se aprietan y ajustan las barras de los oídos.El ungüento oftálmico lubricante se aplica en ambos ojos para prevenir la desecación de los ojos. Durante el proceso quirúrgico, el cuero cabelludo se limpia con una solución de clorhexidina y solución salina estéril. Se realiza una incisión en la línea media de la piel que recubre el calvario desde entre los aspectos más mimosos de los ojos hasta entre las orejas.A continuación, la piel se retrae lateralmente. Los hisopos de algodón secos se utilizan para mover el tejido conectivo lateralmente, por lo que se pueden observar puntos de referencia óseos como se muestra aquí. A continuación, el taladro se desplaza a 1,6 milímetros anterior y a 5,2 milímetros lateral en relación con el torema.A continuación, se perfora un pequeño orificio en este lugar, que debe penetrar en el cráneo sin dañar la duramadre. A continuación, el taladro se mueve aproximadamente de tres a cuatro milímetros de distancia para perforar tres agujeros poco profundos separados. Eso servirá como colocación para tres tornillos de anclaje de montaje, atornille parcialmente tres tornillos de montaje que proporcionarán soporte para la sujeción del cemento en la cánula guía.Una guía de acero inoxidable de calibre 21. A continuación, se inserta la cánula en el orificio de la fresa a 4,5 milímetros por debajo de bgma. A continuación, se coloca un soporte de sonda de fotometría láser Doppler justo detrás de la cánula guía y medial al cráneo lateral.El cemento dental Ridge se utiliza para asegurar la cánula y el soporte de la sonda en su lugar. Es importante dar forma al cemento de manera que esté en contacto con los tres tornillos evitando la piel. A continuación, se retira el accesorio del brazo estereotáctico una vez que el cemento está completamente seco.Para registrar el flujo sanguíneo de la arteria cerebral media. A continuación, se coloca una sonda inflamatoria láser Doppler en el soporte de la sonda. Una jeringa Hamilton de calibre 26 se carga con una endotelial fresca de 80 micromolares y se carga en una bomba de inyección automática.Usando los ataques estéreo, la aguja de la jeringa Hamilton se baja hasta que toca el borde de la cánula guía. A continuación, la aguja se baja ventralmente 17,2 milímetros a través de la cánula guía y tres microlitros de endotelio. Uno se inyecta a una velocidad de un microlitro por minuto utilizando fotometría láser Doppler.Puede ver que el flujo sanguíneo disminuye en más del 50% desde el inicio. Después de unos minutos con el tiempo, vuelve gradualmente al valor de referencia. Unos minutos después de completar la inyección, la aguja se retira suavemente de la cánula guía.Por último, se cierra la herida con sutura y se tapa la cánula. Para valorar el grado de déficit del ictus, se pueden realizar diferentes exámenes neurológicos. Este es un ejemplo de la tarea de comer semillas de girasol.Las ratas se evalúan tanto por el tiempo que tardan en consumir cinco semillas como por el número de trozos de cáscara que quedan. Las ratas con mayor déficit de brazadas consumirán las semillas más lentamente y dejarán más trozos de cáscara. Además de los exámenes neurológicos, el volumen del infarto también se puede evaluar mediante la tinción TTC, como se describe en detalle en un protocolo de video separado, que se puede encontrar en la dirección en la pantalla.La oclusión de la arteria cerebral media inducida por ET one es un modelo de accidente cerebrovascular isquémico que se utiliza regularmente en especies murinas. Este método permite el control de la constricción arterial mediante la alteración de la dosis de ET una administrada y gradual, en lugar de la reperfusión abrupta que se asemeja más a la de los seres humanos. Aunque la reperfusión es una ocurrencia común en el accidente cerebrovascular humano, la reperfusión para la oclusión de la arteria cerebral media inducida por ET uno puede no parecerse mucho a la del accidente cerebrovascular humano, donde la mayoría de los pacientes tienen al menos una reperfusión parcial, pero durante un período de horas a días después de la oclusión.Otro inconveniente del método ET de una carrera es que muchas variables, como la cepa de la rata, la edad, el peso, así como la experiencia del operador, pueden provocar inconsistencias y volúmenes de infarto. Sin embargo, esta variabilidad puede reducirse con el uso de un árbol de flujo Doppler láser para verificar la isquemia cerebral durante la infusión de ET uno. Por último, la constricción rápida y la reperfusión gradual durante la oclusión de la arteria cerebral media inducida por ET uno podrían imitar de cerca el vasoespasmo observado después de la hemorragia subaracnoidea.Por lo tanto, este modelo también podría ser una herramienta útil para estudiar la isquemia que ocurre durante los eventos de vasoespasmo. Esperamos que este vídeo te haya resultado útil y buena suerte con tus experimentos.

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Investigación

JoVE Journal

Medicine

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Inducción quirúrgica del daño cerebral isquémico en la rata es un modelo ampliamente utilizado para la investigación del accidente cerebrovascular. Aquí se demuestra la inducción de isquemia cerebral focal por oclusión de la arteria cerebral media. Visualización del infarto como resultado de la tinción histológica y la resonancia magnética también se indica.

Modelo de isquemia cerebral focal por oclusión endovascular de sutura de la arteria cerebral media en la rata

El intraluminal de arteria cerebral media oclusión (MCAO) es el modelo más empleado entre los modelos experimentales de ictus isquémico. Aquí vamos a demostrar todo el modelo en detalle con la guía de la flujometría láser Doppler, y sus resultados representativos.

Intraluminal la arteria cerebral media de oclusión (MCAO) Modelo para el ictus isquémico con Orientación flujometría láser Doppler en ratones

Este artículo describe un método para la visualización de las arterias cerebrales de rata a través de una ventana craneal mediante craniectomía temporal con el fin de ver las partes proximales de la arteria cerebral media...

Utilizando una ventana craneal para visualizar la arteria cerebral media Durante la endotelina-1 inducida por oclusión de la arteria cerebral media

Monitorización de la perfusión cerebral se ha demostrado para mejorar la precisión en modelos de ictus isquémicos. Las dificultades técnicas a menudo limitan el uso de esta herramienta esencial para la investigación cerebrovascular. En este vídeo, un sistema optimizado se muestra para obtener una monitorización hemodinámica única o multi-sitio durante la oclusión intraluminal de la arteria cerebral en ratas.

Sistema optimizado para la monitorización de la perfusión cerebral en el modelo de rata de Carrera intraluminal oclusión arteria cerebral media

Aquí, describimos un modelo de ratón de isquemia retiniana por oclusión bilateral transitoria de la arteria carótida común bilateral utilizando suturas simples y una abrazadera. Este modelo puede ser útil para entender los mecanismos patológicos de la isquemia retiniana causados por anomalías cardiovasculares.

Un modelo murino de lesión retiniana isquémica inducida por la oclusión bilateral transfronteriza de la arteria carótida común

Este protocolo describe el modelo de isquemia cerebral focal transitoria en ratones a través de la oclusión intraluminal de la arteria cerebral media. Además, se muestran ejemplos de evaluación de resultados mediante resonancia magnética y pruebas de comportamiento.

Modelo de oclusión transitoria de la arteria cerebral media de accidente cerebrovascular

El protocolo actual describe un modelo de rata de oclusión/reperfusión de la arteria cerebral media que preserva la estructura anatómica de los vasos cerebrales sin causar daño.

Un modelo en ratas de oclusión/reperfusión de la arteria cerebral media sin dañar la estructura anatómica de los vasos cerebrales

Este protocolo presenta una guía paso a paso para que los investigadores realicen el procedimiento de oclusión de la arteria cerebral media en ratones utilizando el método modificado de la arteria carótida externa de Longa. Las modificaciones presentadas en este artículo tienen como objetivo aumentar la precisión de la oclusión de la arteria cerebral media y asegurar una reperfusión completa.

Optimización del método de oclusión de la arteria cerebral media de Longa para la reperfusión completa

Aquí se muestra un procedimiento quirúrgico mínimamente invasivo, que consiste en colocar la sonda láser Doppler en el cráneo sobre la región distal de la arteria cerebral media (ACM), una ubicación periorbitaria adecuada para ratas y ratones, para evaluar el flujo sanguíneo durante la oclusión transitoria de ACM.

Colocación periorbitaria de una sonda láser Doppler para la monitorización del flujo sanguíneo cerebral antes de la oclusión de la arteria cerebral media en modelos de roedores

Este protocolo describe el proceso de preparación para la reperfusión de la oclusión de la arteria cerebral media a través de la arteria carótida común.

Un modelo modificado de preparación para la reperfusión de oclusión de la arteria cerebral media

Aprende el modelo MCAO inducido por endotelina-1 para estudiar ictus isquémico en ratas usando flujometría láser Doppler. Este método quirúrgico menos invasivo permite investigar mecanismos cerebrovasculares con control de flujo sanguíneo.

La endotelina-1 inducida por la arteria cerebral media oclusión Modelo para el ictus isquémico con Orientación flujometría láser Doppler en la rata (Video) | JoVE Journal

La endotelina-1 inducida por la arteria cerebral media oclusión Modelo para el ictus isquémico con Orientación flujometría láser Doppler en la rata

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