Name: Utilizando una ventana craneal para visualizar la arteria cerebral media Durante la endotelina-1 inducida por oclusión de la arteria cerebral media (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-02-22T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 43 s
Description: Aprende a visualizar la arteria cerebral media mediante una ventana craneal en ratas. Esta técnica de craniectomía temporal permite cuantificar cambios en el diámetro vascular tras la administración de endotelina-1 en modelos de isquemia cerebral.

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Este trabajo fue apoyado por becas de la Asociación Americana del Corazón Afiliado Mayor Sudeste (09GRNT2060421), la American Medical Association, y de la Universidad de Florida Clínica y Traslacional Science Institute. Adán Meca es un compañero NIH / NINDS, NRSA predoctoral (F30 NS-060335). Robert Regenhardt recibido apoyo beca predoctoral de la Universidad de Florida Programa de Entrenamiento Multidisciplinario de Hipertensión (T32 HL-083810).

Este protocolo fue aprobado por el Cuidado de Animales institucional y el empleo Comisión (IACUC) de la Universidad de Florida y está en conformidad con la &quot;Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio&quot; (octava edición de la Academia Nacional de Ciencias, 2011). Materiales <ol><li> Animales: Ocho semanas de edad, macho, Sprague Dawley (Charles River Farms, Wilmington, MA, EE.UU.) con un peso de 250-300 g en el momento de la cirugía. </li><li> Anestesia <ol class="lalpha"><li> Inhalación sistema de anestesia (VetEquip Inc., Pleasanton, CA, EE.UU.) </li><li> El isoflurano anestesia (Farmacia Baxter, Deerfield, IL, EE.UU.) </li></ol></li><li> Estereotáxica sistema (David Kopf Instruments, Tujunga, CA, EE.UU.) <ol class="lalpha"><li> Animal Pequeño sistema estereotáxico </li><li> Para no romper los oídos barras para ratas </li><li> Anestesia Gas cabeza titular para ratas </li></ol></li><li> Regulación de la temperatura <ol class="lalpha"><li> BAT-12 termómetro microsonda (WorldPrecision Instruments, Inc., Sarasota, FL, EE.UU.) </li><li> T / PUMP, TP600 manta térmica (Industrias Gaymar, Inc., Orchard Park, Nueva York, EE.UU.) </li></ol></li><li> Los instrumentos quirúrgicos <ol class="lalpha"><li> Metzenbaum tijera iris pinzas, separadores bulldog abrazadera, jeringa de 10 ml con aguja de calibre 26 biselado, Bovie cauterización kit (World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, EE.UU.) </li><li> Micromotor de perforación (Stoelting, Wood Dale, IL, EE.UU.) </li><li> 0,8 mm redondo taladro fresa (Roboz Surgical Instrument Co., Inc., Gaithersburg, MD, EE.UU.) </li><li> STORZ Bonn sutura Pinzas (Bausch and Lomb, Inc., Rochester, NY, EE.UU.) </li></ol></li><li> Suministros Quirúrgicos <ol class="lalpha"><li> 3,0 nylon sutura (Oasis, Mettawa, IL, EE.UU.) </li><li> Hisopos de algodón, pomada ocular Puralube (Fisher Científico, Pittsburgh, PA, EE.UU.) </li><li> Puntos quirúrgicos y tiras (Medtronic Xomed, Inc., Jacksonville, FL, EE.UU.) </li><li> Máquinas de cortar el cabello (eléctricas Oster, Providence, Rhode Island, EE.UU.) </li></ol></li&gt; <li> Químicos <ol class="lalpha"><li> La endotelina-1 (American Peptide, Sunnyvale, CA, EE.UU.) </li><li> La clorhexidina al 2% (Agrilabs, St. Joseph, MO, EE.UU.) </li></ol></li><li> Visualización de equipos <ol class="lalpha"><li> Microscopio quirúrgico (Seiler Instrument and Manufacturing, St. Louis, MO, EE.UU.) </li><li> Sony Handycam HDR-SR12 (Sony, Minato, Tokio, Japón) </li><li> Iluminador de fibra óptica (TechniQuip Corp., Livermore, CA, EE.UU.) </li></ol></li><li> Medición del diámetro de los vasos <ol class="lalpha"><li> VLC media player (París, Francia) </li><li> Image J software (software ImageJ 1.42q, EE.UU. Institutos Nacionales de Salud, Bethesda, MA, EE.UU.) </li></ol></li></ol> 1. Pre-quirúrgicos Pasos <ol><li> Antes de la cirugía, las ratas se alojaron en un 12:12 luz / oscuridad ciclo con acceso libre a comida y agua roedores. </li><li> La anestesia se indujo con 4% de isoflurano en 100% de mezcla de gas O 2 en una cámara de inducción. </li><li> El cuervo<html> n de la cabeza rapada con cortar el pelo eléctricas. </li><li> La rata se coloca en posición de decúbito prono sobre una almohadilla absorbente tendido en una superficie de operación de temperatura controlada (manta térmica) y la cabeza se coloca en el aparato estereotáctico de partida con la colocación de la máscara facial gas anestésico. </li><li> A continuación, las barras del oído se inserta y se aprieta. </li><li> Durante el procedimiento de anestesia se mantiene con 2% de isoflurano en 100% de mezcla de gas O 2. </li><li> Pomada oftálmica lubricante se aplica a ambos ojos y los párpados están cerrados para prevenir la desecación del ojo durante el procedimiento quirúrgico. </li><li> Una sonda de temperatura rectal es insertado para mantener una temperatura constante animales núcleo de 37 ± 0,5 ° C. </li><li> Con la cabeza de la rata anestesiada mantiene firmemente en el dispositivo estereotáxico el área quirúrgica se limpia con alternancia de clorhexidina y solución salina tres veces. </li></ol> 2. Pre-craneal Ventana Preparación ONTENIDO &quot;&gt; Antes de la creación de una ventana craneal, la rata debe estar preparado para cualquier experimento mediante la implantación de hardware requerida y debe recibir ningún procedimientos quirúrgicos requeridos. Para este protocolo, se han implantado previamente una cánula guía para la endotelina-1 (ET- 1) inducida por MCAO como se muestra en una publicación que titula &quot;La endotelina-1 inducida cerebral media oclusión arterial Modelo para el ictus isquémico con Orientación flujometría láser Doppler en la rata&quot;. 3. Creación de la ventana craneal Después de la colocación de una cánula guía o el equipo requerido para la experimentación, una ventana craneal se crea para visualizar directamente las porciones proximales de la arteria cerebral media durante un procedimiento de accidente cerebrovascular. <ol><li> En primer lugar, las tijeras se utilizan para incisión en la piel que recubre el músculo temporal medial de partida y trabajar lateralmente. </li><li> El músculo temporal es atravesada con electrocauterio y luego se retractó utilizando 3,0 sutura de nylon para visua<html> lizar la porción escamosa del hueso temporal. </li><li> Un cuadrado aproximadamente 3-4 mm se dibuja sobre la porción escamosa del hueso temporal caudal a la órbita y superior a la base del proceso cigomático como se refleja fuera del hueso temporal. </li><li> Un taladro se utiliza para cortar gradualmente la pieza resumidas de hueso libre del hueso temporal. Se debe tener cuidado para evitar la aplicación de demasiada presión a la broca, ya que es posible dañar la dura o corteza cerebral. </li><li> Enjuagues frecuentes con solución salina estéril se realizan para mejorar la visualización del campo quirúrgico y evitar el sobrecalentamiento del cráneo. </li><li> A partir de una esquina suelta, el trozo de hueso temoporal se retira cuidadosamente con finos dientes de rata pinzas asegurándose de no romper ningún buque asociados con la duramadre. </li><li> La duramadre se deja intacto y escombros se enjuaga con solución salina estéril. </li></ol> 4. Grabación de constricción de las arterias cerebral tienda de campaña &quot;&gt; Para demostrar cómo capturar imágenes en tiempo real, una rata que está pasando por ET-1 inducida por MCAO se utiliza para este protocolo. <ol><li> Antes de la aplicación de compuestos vasoactivos, un vídeo de línea de base debe ser registrada por lo menos durante 1 min. Para ET-1 inducida por MCAO, la grabación de línea de base se realiza una vez que la aguja ha sido bajada en el parénquima cerebral, pero antes de la inyección de ET-1. </li><li> La bomba de jeringa se inicia por inyección y grabado durante 1 hora o hasta que el punto final deseado. La aguja se deja en su lugar durante la grabación de vídeo con el fin de evitar perturbaciones en el plano focal. </li><li> La rata debe ser profundamente anestesiados y sacrificados de acuerdo con un protocolo aprobado siguiendo este procedimiento. </li></ol> 5. Análisis de Imagen El diámetro del vaso se puede determinar para cualquier parte de la visualizaron MCA. Como ejemplo, vamos a utilizar una rama de la MCA para medir el diámetro del vaso en los puntos de tiempo antes y después de la inyección de ET-1. Stimarcos ll del video se capturan a intervalos de 1 min utilizando VLC media player (VideoLAN). <ol><li> VLC jugador está instalado y se abrió. </li><li> Mediante la selección de herramientas y luego preferencias, el ajuste cambia a &quot;All&quot; en &quot;Mostrar valores&quot;. </li><li> El &quot;menú de vídeo&quot; se expande en la barra lateral izquierda y &quot;módulos de salida&quot; se expande entonces. &quot;Los filtros de Escena&quot; está seleccionado para que aparezca el menú de vídeo escena filtro. </li><li> &quot;Escena&quot; se escribe en el cuadro de nombre de archivo para el prefijo. </li><li> Un prefijo de ruta del directorio está definido. Aquí es donde se guardan imágenes fijas. </li><li> Una relación de grabación se selecciona basándose en la velocidad deseada de captura de imagen fija. Si un vídeo se capturó a 29 fotogramas por segundo, a continuación, &quot;1749&quot; (29 cuadros / seg x 60 seg / min) se consignarán en la casilla para guardar una imagen fija cada 1 min. Todos los cambios se guardarán. </li><li> El vídeo deseado se abrió en el reproductor VLC para guardar automáticamente imágenes fijas una vez cada 1 min. </li><li> El diámetro del vaso se mide entonces usando estosimágenes. En primer lugar, el software ImageJ (NIH) se abre. </li><li> A continuación, los cuadros fijos que se va a medir se abren en ImageJ. </li><li> Seleccionando la opción &quot;analizar&quot; menú &quot;, establecer medidas&quot; se abrió y todas las casillas estén marcadas. </li><li> A continuación, la herramienta de la línea recta se selecciona. </li><li> La combinación de teclas &quot;Ctrl +&quot; se utiliza para hacer un zoom según sea necesario y se coloca una línea perpendicular a la trayectoria recipiente para medir el diámetro del vaso. </li><li> Por último, la eslora del buque se obtiene seleccionando la opción &quot;analizar&quot; y haga &quot;medida&quot; (Ctrl + M) para obtener la eslora del buque. </li><li> Este proceso se repitió al menos tres veces y se promediaron para cada recipiente de medida se mide en cada trama todavía. </li><li> El diámetro del vaso en cada punto de tiempo se normaliza al diámetro del vaso de referencia de modo que se pueden hacer comparaciones múltiples utilizando ratas. Para ello, utilice la fórmula actual Diámetro / diámetro basal x 100% para calcular el diámetro basal% de cada buque. </li></ol>

<ol><li>Levasseur, J. E., Wei, E. P., Raper, A. J., Kontos, A. A., Patterson, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detailed+description+of+a+cranial+window+technique+for+acute+and+chronic+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Detailed description of a cranial window technique for acute and chronic experiments.</a> Stroke. 6, 308-317 (1975).</li>
<li>Baumbach, G. L., Dobrin, P. B., Hart, M. N., Heistad, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanics+of+cerebral+arterioles+in+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Mechanics of cerebral arterioles in hypertensive rats.</a> Circ. Res. 62, 56-64 (1988).</li>
<li>Regrigny, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+melatonin+on+rat+pial+arteriolar+diameter+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Effects of melatonin on rat pial arteriolar diameter in vivo.</a> Br. J. Pharmacol. 127, 1666-1670 (1999).</li>
<li>Mecca, A. P., O'Connor, T. E., Katovich, M. J., Sumners, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candesartan+pretreatment+is+cerebroprotective+in+a+rat+model+of+endothelin-1-induced+middle+cerebral+artery+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Candesartan pretreatment is cerebroprotective in a rat model of endothelin-1-induced middle cerebral artery occlusion.</a> Exp. Physiol. 94, 937-946 (2009).</li>
<li>Mecca, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebroprotection+by+angiotensin-%281-7%29+in+endothelin-1-induced+ischaemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Cerebroprotection by angiotensin-(1-7) in endothelin-1-induced ischaemic stroke.</a> Exp. Physiol. 96, 1084-1096 (2011).</li>
</ol>

No hay conflictos de interés declarado.

En resumen, esta técnica de ventana craneal preparación es muy versátil ya que puede modificarse para satisfacer las necesidades de muchos experimentos con modificaciones menores 4, 5. Por ejemplo, hemos logrado controlarse el flujo sanguíneo cerebral en determinadas ramas de MCA con la flujometría láser Doppler para centrarse directamente en una arteria cerebral visualizada a través de una ventana craneal (Meca AP 2009 y 2011). Además, una preparación similar con el incisa duramadre puede ser utilizado con l...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre del reactivo </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentarios (opcional) </td></tr><tr><td> Inhalación sistema de anestesia </td><td> VetEquip Inc., Pleasanton, California, EE.UU. </td><td> 901806 </td><td></td></tr><tr><td> El isoflurano anestesia </td><td> Baxter Farmacia, Deerfield, IL, EE.UU. </td><td> 1001936060 </td><td></td></tr><tr><td> Animal Pequeño sistema estereotáxico </td><td> David Kopf Instruments, Tujunga, CA, EE.UU. </td><td> 900 </td><td></td></tr><tr><td> Los no ruptura bares oído, rata </td><td> David Kopf Instruments, Tujunga, CA, EE.UU. </td><td> 957 </td><td></td></tr><tr><td> Gas Rat anestesia cabeza titular </td><td> David Kopf Instruments, Tujunga, CA, EE.UU. </td><td> 1929 </td><td></td></tr><tr><td> BAT-12 microsonda termómetro </td><td> World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, EE.UU. </td><td> BAT-12 </td><td&gt; </td></tr><tr><td> T / PUMP, manta térmica </td><td> Gaymar Industries, Inc., Orchard Park, Nueva York, EE.UU. </td><td> T / PUMP, TP600 </td><td></td></tr><tr><td> Metzenbaum Scissors </td><td> World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, EE.UU. </td><td> 501254 </td><td></td></tr><tr><td> Iris fórceps </td><td> World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, EE.UU. </td><td> 15915 </td><td></td></tr><tr><td> Bulldog abrazadera retractores </td><td> World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, EE.UU. </td><td> 14119-G </td><td></td></tr><tr><td> 10 l jeringa 26-gaugue </td><td> World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, EE.UU. </td><td> SGE010RNS </td><td></td></tr><tr><td> Bovie, alta temperatura kit cauterización </td><td> World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, EE.UU. </td><td> 500392 </td><td></td></tr><tr><td> Diente de rata fórceps 0,12 </td><td> Stotz </td><td> E1811 </td><td></td></tr><tr><td> Micromotor taladro </td><td> Stoelting,Wood Dale, IL, EE.UU. </td><td> 51449 </td><td></td></tr><tr><td> 0,8 mm fresa fresa redonda </td><td> Roboz Surgical Instrument Co., Inc., Gaithersburg, MD, EE.UU. </td><td> RS-6280C-1 </td><td></td></tr><tr><td> STORZ Bonn sutura Pinzas </td><td> Bausch and Lomb, Inc., Rochester, NY, EE.UU. </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Sutura Nylon, tamaño 3,0 </td><td> Oasis, Mettawa, IL, EE.UU. </td><td> MV-663 </td><td></td></tr><tr><td> Esponjas de algodón </td><td> Fisher Scientific, Pittsburg, PA, EE.UU. </td><td> 22-029-488 </td><td></td></tr><tr><td> Puralube pomada para los ojos </td><td> Fisher Scientific, Pittsburg, PA, EE.UU. </td><td> NC0138063 </td><td></td></tr><tr><td> Máquinas de cortar el pelo eléctricas </td><td> Oster, Providence, RI, EE.UU. </td><td> 78005-301 </td><td></td></tr><tr><td> ET-1 se diluye a 80 μ M de concentración en PBS </td><td> American Peptide, Sunnyvale, CA, EE.UU. </td><td> 88-1-10A </td><td></td></tr><tr><td> Clorhexidina, 2% </td&gt; <td> Agrilabs, St. Joseph, MO, EE.UU. </td><td> 1040, Rev. 6.6, NAC No.: 10580322 </td><td></td></tr><tr><td> Microscopio quirúrgico </td><td> Seiler Instrument and Manufacturing, St. Louis, MO, EE.UU. </td><td> Evolución XR6 </td><td></td></tr><tr><td> Sony Handycam </td><td> Sony, Minato, Tokio, Japón </td><td> HDR-SR12 </td><td></td></tr><tr><td> Iluminador de fibra óptica </td><td> TechniQuip Corp., Livermore, CA, EE.UU. </td><td> FO1-150 </td><td></td></tr><tr><td> VLC Media Player </td><td> (París, Francia) </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Image J software </td><td> EE.UU. Institutos Nacionales de Salud, Bethesda, MA, EE.UU. </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

utilizando una ventana craneal para visualizar la arteria cerebral media durante la endotelina-1 inducida por oclusión de la arteria cerebral media

Utilizing a Cranial Window to Visualize the Middle Cerebral Artery During Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion

Creación de una ventana craneal es un método que permite la visualización directa de las estructuras en la superficie cortical del cerebro 1-3. Esta técnica se puede realizar en muchas localizaciones que recubren el cerebro de rata, pero es más fácil de llevar a cabo mediante la creación de una craniectomía sobre los huesos de fácil acceso frontal o parietal. Con más frecuencia, se ha utilizado esta técnica en combinación con la endotelina-1 medio modelo oclusión de la arteria cerebral del accidente cerebrovascular isquémico para cuantificar los cambios en el diámetro medio vaso cerebral arteria que se producen con inyección de endotelina-1 en el parénquima cerebral adyacente a la MCA proximal 4, 5. Con el fin de visualizar la parte proximal de la MCA durante endotelina -1 inducida MCAO, se utiliza una técnica para crear una ventana craneal a través del hueso temporal en el aspecto lateral del cráneo de rata (Figura 1). Arterias cerebrales puede ser visualizado o bien con la duramadre intacta o con la duramadre y incisa RetraDirección Ejecutiva. Por lo general, dejamos la duramadre intacta durante la visualización desde la endotelina-1 inducida por MCAO implica la entrega del péptido vasoconstrictor en el parénquima cerebral. Esto evita la necesidad de una incisión en la duramadre directamente sobre los vasos visualizado para la administración de fármacos. Este protocolo se describe cómo crear una ventana craneal para visualizar las arterias cerebrales de una forma gradual, así como la manera de evitar muchos de los problemas potenciales relacionados con este método.

Las imágenes fijas tomadas de la serie de vídeo capturado que el cambio en el diámetro de la arteria cerebral después de la inyección de ET-1 se puede apreciar fácilmente utilizando esta técnica de ventana craneal (Figura 2). Pocos minutos después de la inyección de ET-1, el recipiente comienza a constreñir. Eventualmente los vasos será difícil de visualizar y el tejido cerebral se convertirá pálido. Después de unos 20 min de los efectos de ET-1 disminuye y los vasos comenzará a dilatarse, volviendo gra...

Este artículo describe un método para la visualización de las arterias cerebrales de rata a través de una ventana craneal mediante craniectomía temporal con el fin de ver las partes proximales de la arteria cerebral media (<strong&gt; Figura 1</strong&gt;). Este método versátil se puede combinar con diversas técnicas de administración de fármacos para medir la reactividad de la arteria cerebral<em&gt; In vivo</em&gt;.

Utilizando una ventana craneal para visualizar la arteria cerebral media Durante la endotelina-1 inducida por oclusión de la arteria cerebral media

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be ...

En este protocolo en video, vamos a demostrar el uso de una ventana craneal para visualizar la arteria cerebral media durante la oclusión inducida por endotelina-1 de la arteria cerebral media. Para la preparación de esta ventana craneal, se realiza una craneotomía temporal con el fin de observar las porciones proximales de la arteria cerebral media. La creación de una ventana craneal es un método que permite la visualización directa de estructuras sobre la superficie cortical del cerebro.Esta técnica puede realizarse en varias ubicaciones sobre el cerebro de la rata, pero se lleva a cabo más fácilmente mediante una craneotomía en forma de C sobre los huesos frontales o parietales, que son fácilmente accesibles. Con mayor frecuencia, hemos utilizado esta técnica en combinación con el modelo de oclusión de la arteria cerebral media inducida por endotelina-1 o el modelo de OACM inducido por ET-1 de accidente cerebrovascular isquémico. Se realiza un procedimiento de ventana craneal para cuantificar los cambios en el diámetro vascular que ocurren tras la inyección de ET-1 en el parénquima cerebral adyacente a la arteria cerebral media proximal o ACM.En concreto, utilizamos una técnica para crear una ventana craneal a través del hueso temporal en la cara lateral del cráneo de la rata. Las arterias cerebrales pueden visualizarse entonces bien con la duramadre intacta, bien con la duramadre incisa y retraída. Lo más frecuente es que dejemos la duramadre intacta durante la visualización.Dado que la oclusión de la arteria cerebral media inducida por ET-1 implica la administración de un péptido vasoconstrictor en el parénquima cerebral, este método evita la necesidad de incisionar directamente la duramadre sobre los vasos visualizados para la administración del fármaco. En este video, mostraremos cómo crear una ventana craneal para visualizar las arterias cerebrales de manera progresiva, así como cómo evitar muchos de los errores potenciales comunes relacionados con este método. Después de la colocación de la cánula guía, según se indica, puede crearse una ventana craneal para visualizar directamente las porciones proximales de la arteria cerebral media durante un procedimiento de accidente cerebrovascular; primero, realice una incisión en el cuero cabelludo como se muestra, utilizando tijeras, y retráigase la piel para exponer el músculo temporal.Seccione el músculo temporal utilizando electrocauterización y luego retráctelo para visualizar la porción escamosa del hueso temporal. Obtener una exposición adecuada del hueso temporal es crucial para este procedimiento. Tenga cuidado de evitar la órbita durante la cauterización.Para mejorar la visualización, utilice sutura para retraer el músculo Temporalis dividido por la mitad. Dibuje un cuadrado de tres a cuatro milímetros en la porción escamosa del hueso temporal, adyacente a la órbita y por encima de la base del proceso cigomático donde este se refleja desde el hueso temporal. Utilice una fresa para extraer esta porción ósea.Tenga cuidado de no aplicar demasiada presión, ya que es posible perforar el cerebro. Asegúrese de realizar enjuagues frecuentes con solución salina estéril para mejorar la visualización del campo quirúrgico y prevenir el sobrecalentamiento del cráneo. Comenzando por una esquina suelta, retire cuidadosamente el fragmento de hueso temporal utilizando pinzas finas de dientes de rata, teniendo cuidado de no romper ningún vaso asociado con la duramadre.Aquí puede visualizarse una rama de la arteria cerebral media en condiciones basales antes de la inyección de Endothelial.One. Minutos después de la inyección de Endothelial.One, la arteria cerebral media comenzará a contraerse. Con el tiempo, las ramas se vuelven difíciles de visualizar y el tejido cerebral se tornará pálido.Después de aproximadamente 20 minutos, los efectos de la endotelina uno disminuirán y los vasos comenzarán a dilatarse gradualmente. Regresan al diámetro basal después de unos 45 minutos. Para medir el diámetro vascular en diferentes momentos antes y después de la inyección de endotelina uno, se capturan cuadros fijos del video a intervalos de un minuto. Utilizando el reproductor multimedia VLC, vaya a herramientas, preferencias, y luego cambie la configuración a todo en mostrar configuraciones.Expanda el menú de video en la barra lateral izquierda y expanda los módulos de salida. Seleccione el tipo de escena de filtro de escena como prefijo del nombre de archivo. Luego agregue una ruta de directorio.A continuación, configure la relación de grabación para la captura de fotogramas fijos según la frecuencia de cuadros de su video, tal como se explica en el protocolo escrito. Finalmente, haga clic en guardar abierto. El video deseado y el reproductor VLC guardarán automáticamente fotogramas fijos cada minuto para medir el diámetro del vaso sanguíneo.Utilizando primero estas imágenes, abra el software Image J y luego abra los fotogramas fijos que medirá. Vaya a Analizar, Establecer mediciones y desactive todas las casillas. Seleccione la herramienta de línea recta y acerque el zoom según sea necesario.Trace una línea perpendicular al trayecto del vaso para medir el diámetro del vaso. Vaya a analizar, luego haga clic en medir para obtener el diámetro del vaso. Repita esto para todas las imágenes deseadas.El diámetro del vaso en cada punto temporal debe normalizarse al diámetro basal del vaso para permitir comparaciones utilizando múltiples ratas. Para ello, utilice la fórmula mostrada aquí. En resumen, esta técnica de preparación de ventana craneal es muy versátil, ya que puede modificarse ligeramente para adaptarse a las necesidades de muchos experimentos.Por ejemplo, hemos monitoreado con éxito el flujo sanguíneo cerebral en ramas específicas de la arteria cerebral media utilizando imágenes de flujo por láser doppler para enfocarnos directamente en una arteria cerebral visualizada a través de una ventana craneal. Además, una preparación similar con la duramadre intacta puede utilizarse con la administración tópica de compuestos vasoactivos para crear un baño in vivo de reactividad vascular. Se deben considerar varios factores al preparar una ventana craneal con el fin de reducir la tasa de fallos de esta técnica.Muchos de estos factores están relacionados con obtener una buena visualización de las arterias cerebrales. Por ejemplo, se debe tener cuidado al crear la craneotomía en C para que la duramadre o los vasos sanguíneos que la cubren no se alteren con el lecho del taladro. Esto se logra mejor mediante lavados frecuentes con solución salina estéril para eliminar los desechos y enfriar el cráneo.Esperamos que este video le ayude a diseñar experimentos que utilicen una ventana craneal y le permita evitar las dificultades comunes que pueden surgir durante este procedimiento.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Inducción quirúrgica del daño cerebral isquémico en la rata es un modelo ampliamente utilizado para la investigación del accidente cerebrovascular. Aquí se demuestra la inducción de isquemia cerebral focal por oclusión de la arteria cerebral media. Visualización del infarto como resultado de la tinción histológica y la resonancia magnética también se indica.

Modelo de isquemia cerebral focal por oclusión endovascular de sutura de la arteria cerebral media en la rata

Se demuestra en el video de un método para producir una oclusión de arteria cerebral media en ratones adultos con un monofilamento intraluminal. También mostrará cómo evaluar la extensión del infarto cerebral por el cloruro de 2,3,5-trifenil tetrazolio (TTC) tinción.

Modelo de ratón de la oclusión arteria cerebral media

Este video muestra el procedimiento de realizar una oclusión permanente de la arteria cerebral media distal, o MCAO, con la arteria carótida común, o ligadura de CCA, en ratas envejecidas para modelar un accidente cerebrovascular isquémico. Esto bloquea el flujo sanguíneo al cerebro, lo que conduce a la muerte neuronal y genera un modelo para estudiar los mecanismos del accidente cerebrovascular y los posibles tratamientos.

Inducción de isquemia a través de la oclusión de la arteria carótida común y cerebral media en un modelo de rata

Varios modelos animales de isquemia cerebral han sido desarrollados para simular la condición humana de accidente cerebrovascular. Este protocolo describe la endotelina-1 (ET-1) inducida por la oclusión de la arteria cerebral media (MCAO) modelo de accidente cerebrovascular isquémico en ratas. Además, las consideraciones importantes, ventajas y deficiencias de este modelo se discuten.

La endotelina-1 inducida por la arteria cerebral media oclusión Modelo para el ictus isquémico con Orientación flujometría láser Doppler en la rata

Monitorización de la perfusión cerebral se ha demostrado para mejorar la precisión en modelos de ictus isquémicos. Las dificultades técnicas a menudo limitan el uso de esta herramienta esencial para la investigación cerebrovascular. En este vídeo, un sistema optimizado se muestra para obtener una monitorización hemodinámica única o multi-sitio durante la oclusión intraluminal de la arteria cerebral en ratas.

Sistema optimizado para la monitorización de la perfusión cerebral en el modelo de rata de Carrera intraluminal oclusión arteria cerebral media

Se describe un método altamente reproducible para la oclusión permanente de un vaso sanguíneo principal cerebral de roedor. Esta técnica se puede lograr con muy poco daño periférico, mínima pérdida de sangre, una alta tasa de supervivencia a largo plazo, y el volumen del infarto coherente acorde con la población clínica humana.

Permanente oclusión vascular cerebral<em&gt; Vía</em&gt; Ligadura doble y transección

Con el fin de entender la fisiopatología del accidente cerebrovascular, es importante utilizar modelos fiables. En este trabajo se va a describir uno de los modelos de accidente cerebrovascular de uso más frecuente en los ratones, llamado el medio modelo de oclusión de la arteria cerebral (MCAO) (también llamado el filamento de sutura intraluminal o modelo) con reperfusión.

Técnica quirúrgica para la oclusión de la arteria cerebral media y la reperfusión del movimiento inducidos en ratones

oclusión quirúrgica de una rama distal de la arteria cerebral media (MCAO) es un modelo frecuentemente usado en investigación del accidente cerebrovascular experimental. Este manuscrito describe la técnica básica de la MCAO permanente, combinado con la inserción de una ventana craneal lateral, que ofrece la oportunidad para microscopía intravital longitudinal en ratones.

Ventana lateral crónica craneal Preparación Activa En Vivo Observación Siguiendo distal de la arteria cerebral media oclusión en ratones

Este protocolo demuestra un modelo único de brazada de ratón con un infarto de tamaño medio y una excelente tasa de supervivencia. Este modelo permite a los investigadores preclínicos de accidentes cerebrovasculares extender la duración de la isquemia, utilizar ratones de edad avanzada y evaluar los resultados funcionales a largo plazo.

Un modelo de oclusión transcraneal modificado de la arteria cerebral media para estudiar los resultados del accidente cerebrovascular en ratones ancianos

Este protocolo describe el modelo de isquemia cerebral focal transitoria en ratones a través de la oclusión intraluminal de la arteria cerebral media. Además, se muestran ejemplos de evaluación de resultados mediante resonancia magnética y pruebas de comportamiento.

Modelo de oclusión transitoria de la arteria cerebral media de accidente cerebrovascular

El objetivo de este estudio fue establecer un método reproducible para realizar una craneectomía seguida de una oclusión permanente y selectiva de la arteria cerebral media en ratas, para su aplicación en estudios experimentales de déficits de memoria motora y espacial.

Oclusión selectiva y permanente de la arteria cerebral media en ratas: un enfoque experimental para estudiar déficits de memoria motora y espacial

Aprende a visualizar la arteria cerebral media mediante una ventana craneal en ratas. Esta técnica de craniectomía temporal permite cuantificar cambios en el diámetro vascular tras la administración de endotelina-1 en modelos de isquemia cerebral.

Utilizando una ventana craneal para visualizar la arteria cerebral media Durante la endotelina-1 inducida por oclusión de la arteria cerebral media (Video) | JoVE Journal

Utilizando una ventana craneal para visualizar la arteria cerebral media Durante la endotelina-1 inducida por oclusión de la arteria cerebral media

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