Utilizando una ventana craneal para visualizar la arteria cerebral media Durante la endotelina-1 inducida por oclusión de la arteria cerebral media

En este protocolo de video, vamos a demostrar el uso de una ventana craneal para visualizar la arteria cerebral media durante la oclusión de la arteria cerebral media inducida por endotelina uno. Para esta preparación de la ventana craneal, se realiza una craniectomía temporal con el fin de ver las porciones proximales de la arteria cerebral media. La creación de una ventana craneal es un método que permite la visualización directa de estructuras en la superficie cortical del cerebro.

Esta técnica se puede realizar en muchos lugares que recubren el cerebro de la rata, pero se lleva a cabo más fácilmente mediante la creación de una craniectomía en C sobre los huesos frontales o parietales de fácil acceso. Lo más frecuente es que hayamos utilizado esta técnica en combinación con el modelo de ictus isquémico inducido por endotelial o ET inducido por MCAO. Se realiza un procedimiento de ventana craneal para cuantificar los cambios en el diámetro de los vasos que se producen después de la inyección de ET uno en el parénquima encefálico adyacente a la arteria cerebral media proximal o MCA.

En concreto, utilizamos una técnica para crear una ventana craneal a través del hueso temporal en la cara lateral del cráneo de la rata. Las arterias cerebrales se pueden visualizar con la duramadre intacta o con la duramadre inizada y retraída. Lo más común es que dejemos la duramadre intacta durante la visualización.

Dado que la MCAO inducida por ET uno implica la administración de un péptido vasoconstrictor en el parénquima cerebral, esto evita la necesidad de incidir la duramadre directamente sobre los vasos visualizados para la administración del fármaco. En este video, mostraremos cómo crear una ventana craneal para visualizar las arterias cerebrales de manera escalonada, así como también cómo evitar muchos de los posibles escollos comunes relacionados con este método. Después de la colocación de la cánula guía, como se menciona, se puede crear una ventana craneal para visualizar directamente las porciones proximales de la arteria cerebral media durante un procedimiento de accidente cerebrovascular, primero, haga una incisión en el cuero cabelludo como se muestra con unas tijeras y retraiga la piel para revelar el músculo temporal.

Diseccionar el músculo temporal mediante electrocauterización y luego retraerlo para visualizar la porción escamosa del hueso temporal. Obtener una exposición adecuada del hueso temporal es crucial para este procedimiento. Tenga cuidado de evitar la órbita mientras cauteriza.

Para mejorar la visualización, use sutura para retraer el músculo temporal dividido en bisección. Dibuja un cuadrado de tres a cuatro milímetros en la porción escamosa del hueso temporal hasta la órbita y superior a la base del proceso cigomático a medida que se refleja en el hueso temporal. Use una broca para cortar esta porción de hueso.

Tenga cuidado de evitar aplicar demasiada presión, ya que es posible perforar el cerebro. Asegúrese de realizar enjuagues frecuentes con solución salina estéril para mejorar la visualización del campo quirúrgico y evitar el sobrecalentamiento del cráneo. Comenzando en una esquina suelta, retire con cuidado el trozo de hueso temporal con pinzas finas de dientes de rata, asegurándose de no desgarrar ningún vaso asociado con la duramadre.

Aquí se puede visualizar una rama de la arteria cerebral media al inicio del estudio antes de la inyección endotelial. Uno. A los pocos minutos de una inyección endotelial, la arteria cerebral media comenzará a contraerse. Eventualmente, las ramas se vuelven difíciles de visualizar y el tejido cerebral se vuelve pálido.

Después de unos 20 minutos, los efectos del endotelial disminuirán y los vasos comenzarán a dilatarse gradualmente. Volver al diámetro basal después de unos 45 minutos Para medir el diámetro de los vasos En diferentes momentos antes y después de una inyección endotelial, se capturan fotogramas fijos del vídeo a intervalos de un minuto. Uso del reproductor multimedia VLC Usando el reproductor multimedia VLC, vaya a herramientas, preferencias y luego cambie la configuración a todo en mostrar configuración.

Expanda el menú de video en la barra lateral izquierda y expanda los módulos de salida. Seleccione el tipo de filtro de escena scene para el prefijo del nombre de archivo. A continuación, agregue una ruta de directorio.

A continuación, establezca la relación de grabación para la captura de fotogramas fijos en función de la velocidad de fotogramas de su video, como se explica en el protocolo escrito. Finalmente, haga clic en guardar abierto. El reproductor de vídeo y VLC deseado guardará automáticamente los fotogramas fijos una vez cada minuto para medir el diámetro del recipiente.

Usando estas imágenes primero, abra el software Image J y luego abra los fotogramas fijos que va a medir. Vaya a analizar, establecer medidas y anule la selección de todas las casillas. Seleccione la herramienta de línea recta, amplíe según sea necesario.

Coloque una línea perpendicular a la trayectoria del recipiente para medir el diámetro del recipiente. Vaya a analizar, luego haga clic en medir para obtener el diámetro del recipiente. Repita esto para todas las imágenes deseadas.

El diámetro de los recipientes en cada punto de tiempo debe normalizarse al diámetro basal de los recipientes para que se puedan hacer comparaciones utilizando ratas múltiples. Para hacer esto, use la fórmula que se muestra aquí. En resumen, esta técnica de preparación de la ventana craneal es muy versátil, ya que puede modificarse para satisfacer las necesidades de muchos experimentos con pequeñas modificaciones.

Por ejemplo, hemos monitoreado con éxito el flujo sanguíneo cerebral en ramas específicas de MCA utilizando imágenes de flujo Doppler láser para enfocar directamente una arteria cerebral visualizada a través de una ventana craneal. Además, se puede utilizar una preparación similar con el tamaño de la duramadre con la administración tópica de compuestos vasoactivos para crear un baño de reactividad vascular in vivo. Hay varios factores que deben tenerse en cuenta a la hora de preparar una ventana craneal para disminuir la tasa de fracaso de esta técnica.

Muchos de estos factores están relacionados con la obtención de una buena visualización de las arterias cerebrales. Por ejemplo, se debe tener cuidado al crear la craniectomía C para que la duramadre o los vasos sanguíneos que la recubren no se interrumpan con el lecho de perforación. Esto se logra mejor con lavadoras frecuentes con solución salina estéril para limpiar los desechos y enfriar el cráneo.

Esperamos que este video lo ayude a diseñar experimentos que utilicen una ventana craneal y lo ayude a evitar las trampas comunes que pueden ocurrir durante este procedimiento.