Un método no invasivo para In situ Determinación de Éxito de apareamiento en americano femenino Langostas ( Homarus americanus)

La langosta americana es un elemento icónico en toda su área geográfica desde el Atlántico canadiense hasta Nueva Inglaterra. Es el objetivo de una de las pesquerías más grandes de una sola especie en el este de los Estados Unidos en muchas áreas. El éxito continuo de esta pesquería se atribuye a una variedad de medidas de ordenación, incluidos los controles biológicos destinados a conservar las poblaciones reproductoras.

Estas regulaciones incluyen límites de tamaño mínimo y máximo, protección para las hembras portadoras de huevos y prohibición de la captura de hembras con muescas v que se consideran reproductoras comprobadas. El futuro de la pesquería de langosta depende en parte de un suministro saludable de nuevos reclutas que dependen del éxito del sistema de apareamiento de la langosta. Sin embargo, la naturaleza densamente explotada de esta pesquería, similar a otras pesquerías de crustáceos a nivel mundial, puede influir en la dinámica reproductiva de esta especie.

Por lo tanto, el objetivo de este trabajo fue desarrollar un método simple y no invasivo para determinar el éxito del apareamiento de langostas hembras sexualmente maduras. El sexo de una langosta se distingue mejor observando su superficie ventral vista a la izquierda como una hembra caracterizada principalmente por el primer par de vainas PLE, que son planas y plumosas. Las hembras también tienen un receptáculo seminal de forma ovalada en el que almacenan la metáfora del spam que pasa el macho.

El macho se muestra a la derecha, identificable por el primer par de vainas de pleo que son algo cónicas y endurecidas. Estas vainas de gono ayudan a transferir el espermatóforo al de la hembra. Receptáculo Seminole.

También se muestran los poros gono del macho de los que se extruye esta metáfora de SPO. Durante el proceso de cortejo, las langostas macho y hembra muestran comportamientos complejos que incluyen la comunicación mediada químicamente y el intercambio de madrigueras. El comportamiento de compartir la guarida ocurre tanto antes como después de la muda de la hembra y puede interpretarse como una protección del macho, el apareamiento generalmente ocurre dentro de una hora después de la muda de la hembra y dura solo un tiempo muy corto.

El macho gira a la hembra recién mudada sobre su espalda con el fin de transferir la metáfora de S SPM a su receptáculo seminal. Una langosta hembra es capaz de almacenar esperma de un evento de apareamiento durante dos años o más, después de lo cual extruye su nidada de huevos. Los huevos están unidos a las vainas de la hembra en la parte inferior de su abdomen.

El desarrollo de los huevos generalmente toma de nueve a 11 meses y depende en gran medida de la temperatura del agua de mar. Los huevos eclosionan como larvas planctónicas en la primavera y el verano y progresan a través de varias etapas larvales antes de establecerse en el fondo como juveniles. El método que describimos aquí proporciona una técnica para obtener muestras de esperma de un gran número de langostas hembras mientras se encuentran a bordo de barcos comerciales de langosta u otras plataformas de estudio en el mar.

Se inserta una aguja de punta roma en el receptáculo seminal femenino y se extrae una porción del espermatóforo con los espermatozoides asociados. La muestra de esperma puede almacenarse y examinarse posteriormente en el laboratorio. Debido a la estructura del receptáculo seminola, no hemos encontrado mortalidad asociada a esta técnica.

Los suministros necesarios para el muestreo de campo incluyen un refrigerador con hielo para mantener las muestras frías pequeñas. Dos viales de muestra de mililitros. Utilizamos tubos de plástico einor, una aguja de punta roma de calibre 18 sujeta a una jeringa de tres cc y agua de mar limpia y fría.

Estéril es ideal, pero no es necesario. Además, necesitará calibradores para registrar las características morfométricas de la langosta, como la longitud del carpo, el ancho abdominal y las dimensiones de las pinzas, si lo desea. Las hojas de datos preimpresas se utilizan para registrar estas métricas junto con el número de identificación de los tubos de muestra.

El muestreador también debe registrar detalles como la fecha de muestreo, la ubicación y el método de captura de la trampa comercial. Por ejemplo, mida cada langosta el milímetro más cercano usando los calibradores, la longitud del carus debe tomarse dorsalmente desde la parte posterior de la cuenca del ojo hasta el final del carus. A veces, medidas adicionales, como el ancho abdominal, pueden ser útiles para estimar un índice de madurez.

Más tarde, con un par de pinzas, mida la longitud estándar del carus. A continuación, gire el lado ventral del animal hacia arriba para medir la anchura abdominal. Para recoger la muestra de esperma del receptáculo seminal, sostenga la langosta hembra con el lado ventral hacia arriba con el abdomen hacia usted.

Inserte la aguja de la jeringa en el receptáculo seminal. Si hay un espermatóforo presente, habrá un tapón de espermatozoides muy firme. Deberá penetrar, vaciar cuidadosamente la jeringa en un tubo preetiquetado, llenar la jeringa con una pequeña cantidad de agua de mar limpia e inyectarla en el receptáculo seminal.

Esto ayudará a disociar los espermatozoides del enchufe duro. A continuación, vuelva a levantar el émbolo y deposite esta muestra adicional en el mismo tubo de muestra. El ángulo y la profundidad de la aguja son fundamentales para obtener muestras consistentes.

En esta imagen, el receptáculo seminal ha sido diseccionado y dividido verticalmente. El tapón de espermatozoides ocupa la parte superior del receptáculo, mientras que los espermatozoides se encuentran en la parte inferior, el punto más profundo del receptáculo. El receptáculo tiene aproximadamente un centímetro de profundidad, dependiendo del tamaño de la hembra, y la aguja deberá penetrar en el tapón endurecido para recolectar la muestra de esperma.

Tenga cuidado de no empujar a través de la cáscara como una sustancia en el fondo del receptáculo. Ahora mostraremos el proceso de muestreo más lentamente. En un entorno de laboratorio.

Recomendamos a cualquier persona que desee utilizar esta técnica que practique primero en el laboratorio antes de intentar recolectar muestras en el campo. Nuevamente, sostenga la langosta con el lado ventral hacia arriba y el abdomen hacia usted. Use una aguja con punta roma que comience en un ángulo de 45 grados con una punta hacia el abdomen para penetrar el receptáculo seminal y pruebe si hay un tapón de esperma.

Si hay un tapón, aquí es donde se sentirá la resistencia aplicando una presión constante. Gire la aguja ligeramente para ayudar con esta penetración. Empuje a través del tapón de espermatozoides, insertando la aguja aproximadamente un centímetro como se indica en la marca de referencia negra en la aguja que se muestra.

Vacíe la jeringa en un tubo de muestra. A continuación, llene la jeringa con una cantidad muy pequeña de agua de mar fresca y fría para enjuagar el receptáculo seminal y, de nuevo, vacíe el contenido en el tubo de muestra entre langostas. Asegúrese de lavar bien la jeringa para evitar la contaminación.

Limpie la aguja, luego llene y vacíe la jeringa varias veces para asegurarse de que se haya eliminado el material de la muestra. Antes de tomar muestras de otra langosta, recomendamos reemplazar la jeringa y la aguja después de varios usos para el procesamiento e identificación de espermatozoides. Necesitará una pipeta de 200 microlitros, puntas de pipeta desechables, portaobjetos de microscopio y cubreobjetos.

Tome un tubo de muestra de esperma y extraiga aproximadamente 200 microlitros de material líquido. Pipetee esto en un portaobjetos de microscopio debidamente etiquetado con cubreobjetos utilizando un microscopio compuesto estándar a un aumento de 100 x, determine la cantidad de espermatozoides presentes. Los espermatozoides en el portaobjetos del microscopio pueden estar orientados en muchas posiciones diferentes, incluidas las vistas vertical y lateral.

Como se ve en estas imágenes de muestra, recomendamos utilizar descripciones cualitativas como muchos, pocos o ninguno para describir la cantidad de espermatozoides presentes. Hemos empleado con éxito esta técnica en muchos lugares en el mar y tomando muestras de langostas en los puertos. Los resultados que se muestran aquí son de langostas en alta mar capturadas en el banco de George, que pudimos muestrear en una instalación comercial.

Un 84% de estas hembras tenían espermatozoides en sus receptáculos seminales. Sorprendentemente, los que no lo hicieron estaban en el medio del rango de tamaños, no en los tamaños más pequeños y potencialmente inmaduros. Esta técnica no pretende cuantificar las cantidades reales de esperma en la metáfora del esperma.

Más bien, proporciona un método no invasivo que se puede utilizar en el mar para determinar si una langosta hembra ha sobrevivido con éxito. Cuanto más sepamos sobre el éxito reproductivo de las langostas, mejor podremos comprender los impactos de la explotación de esta especie y, por lo tanto, gestionar adecuadamente este valioso recurso marino.