Name: Dynamic Contrast mejorada de imagen de resonancia magnética de un modelo ortotópico de cáncer pancreático del ratón (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-04-18T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 24 s
Description: Aprende a aplicar DCE-MRI en xenoinjertos ortotópicos de cáncer pancreático en ratones. Esta técnica no invasiva permite visualizar la microvasculatura tumoral y evaluar respuestas vasculares a terapias novedosas en modelos fisiológicamente relevantes.

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Los autores agradecen a Jeffrey Sellers por ayudar en el modelado ortotópico de cáncer de páncreas en ratones. Este trabajo ha contado con el apoyo de las Becas Piloto de Iniciativa de Investigación del Departamento de Radiología de la UAB y las subvenciones 2P30CA013148 y P50CA101955 de los NIH.

Todos los procedimientos fueron aprobados por el Comité de Cuidado y Uso de Animales Institucional de la Universidad de Alabama en Birmingham. Modelado 1. ortotópico tumor pancreático Ratón <ol><li> Cultura líneas estándar de células de páncreas-cáncer humano en medio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) suplementado con suero bovino fetal al 10%. Mantener todas las culturas a 37 ° C en atmósfera húmeda con 5% de CO 2. </li><li> Utilice 8-10 ratones graves femeninos semanas de edad combinados inmunodeficientes. Coloque jaulas de los animales a las 12 hr luz y oscuridad ciclo de 12 horas a RT (21 ± 2 ° C) y 60% de humedad. </li><li> Anestesiar a todos los animales utilizando la ventilación con 2% de isoflurano mezclado con oxígeno (2 l / min) a lo largo de la cirugía. Confirme la profundidad de la anestesia por reflejo pizca dedo del pie. Coloque los animales en una almohadilla térmica (37 ° C) para mantener la temperatura corporal. Aplique un ungüento oftálmico veterinario en los ojos para evitar la sequedad mientras que bajo anestesia. Y# 160; </li><li> Quitar el pelo en el cuadrante superior izquierdo del abdomen de cada ratón, y dar un fármaco analgésico (carpofen, 5 mg / kg de peso corporal por vía subcutánea) en la zona. Aplique una solución de betadine a la piel expuesta. Preparar instrumentos quirúrgicos esterilizados en autoclave. </li><li> Hacer una incisión de 1 cm en la piel y el peritoneo usando iris tijeras rectas. Retire con cuidado el páncreas desde el abdomen con unas pinzas quirúrgicas. </li><li> Insertar 28 G aguja de una jeringa 0,5 ml de insulina en la cola del páncreas y luego infundir lentamente una solución de 2,5 millones de células de cáncer pancreático humano en 30 l de DMEM. Confirme que una pequeña ampolla se crea en la cabeza del páncreas por la solución. </li><li> Coloque suavemente el páncreas en el abdomen con unas pinzas quirúrgicas. Cierre el peritoneo y la piel en la capa 1 con 2 interrumpido 5-0 suturas de Prolene, y luego terminar la anestesia. No devuelva un animal que ha sido sometido a cirugía para la compañía de otros animales hasta que se recupere completamente.60; Retire las suturas en 7 ~ 10 días después de la cirugía. </li><li> Dale otra dosis del fármaco analgésico (carpofen, 5 mg / kg de peso corporal por vía subcutánea) a las 24 horas después de la cirugía. </li><li> Compruebe el tamaño del tumor mediante la palpación de la zona de la cirugía usando dos dedos. Los tumores suelen sentirse más denso y más baches de los tejidos y órganos circundantes. Normalmente se tarda ~ 1 - 2 semanas para empezar a sentirse un tumor. </li><li> Monitorear los animales diariamente para detectar signos de enfermedad. Cuando los animales parecen enfermos (conductas de aseo personal y de evitación falta normal), nosotros los terminamos por dislocación cervical, mientras que bajo anestesia. </li></ol> 2. Imagen de Resonancia Magnética <ol><li> Aplicar MRI cuando el tamaño del tumor es cerca de 5 - 7 mm de diámetro en generalmente 2 ~ 4 semanas después de la implantación de células. Utilice un escáner de RM dedicada a imágenes de pequeños animales o un escáner de RM clínica equipada con una bobina especializada para obtener imágenes de pequeños animales. NOTA: Se utilizó un animal pequeño escáner de RM 9.4T con una combinación de un volumen del resonador 1 H/ Transmisor y un receptor bobina de superficie (30 mm de diámetro) (Bruker BioSpin Corp., Billerica, MA). Una bobina de superficie proporciona una mejor relación señal-ruido (SNR) 14. </li><li> Preparar una MRI agente de contraste a base de gadolinio para inyectar ~ 0,1 a 0,2 mmol / kg a cada animal en ~ 0,1 hasta 0,2 ml de PBS (tampón fosfato salino). NOTA: Se utilizó gadoteridol, y se inyectaron 0,2 mmol / kg en 0,15 ml de PBS durante un período de 15 seg (0,1 ml / seg). </li><li> Prepare un tubo de micro-polietileno (longitud: 7,62 mm, diámetro interior: 0,28 mm, diámetro exterior: 0,64 mm). Inserte una aguja 30 G (longitud de 12,7 mm) en un extremo del tubo, y una aguja de 30 G romo de la punta (9,5 mm de longitud) en el otro extremo. Conectar una jeringa de 1 ml que contiene agente de contraste MR a la aguja de punta roma, y ​​empujar lentamente la jeringa para llenar todo el tubo con el agente de contraste MR. </li><li> Anestesiar a los animales, utilizando ventilación con ~ 1 - 2% de isoflurano mezclado con oxígeno (2 L / min) durante la preparación y formación de imágenes. Confirme la profundidad de anesthesia por reflejo pizca dedo del pie. Aplique un ungüento oftálmico veterinario en los ojos para evitar la sequedad mientras que bajo anestesia. Dilatar la vena de la cola usando una lámpara de calor antes de la inserción de la aguja. Coge el medio de la aguja 30 G utilizando pinza de Kelly, y la inserta en la vena de la cola. Tape tanto la cola y el tubo en un pedazo de plástico o de papel cartón (10 mm de ancho x 100 mm de longitud) para mantener la recta cola. </li><li> Colocar el animal en posición supina en una cama de animales equipado con circulación de agua caliente (o aire caliente) para regular la temperatura corporal durante la exploración. Ajuste la temperatura en la cama a 37 ° C. Inserte una sonda de temperatura rectal para monitorear la temperatura del cuerpo durante la exploración. </li><li> Aplicar un tablero plástico ortogonalmente doblada en la zona abdominal. Asegúrese de que el tumor se localiza detrás del extremo superior de la placa, y luego tire hacia abajo el tablero ligeramente (~ 2 mm) para asegurarse de que el tumor se detecta por la junta. Tape el tablero a la cama de los animales con firmeza. </li><li> Pegue un transduce almohadilla respiraciónr (SA Instrument, Inc., Stony Brook, Nueva York) en el área del pecho para monitorear la respiración animal durante la exploración. Coloque una bobina de superficie en la parte superior de la región del tumor, y la cinta a la cama de los animales con firmeza. Empuje la cama de los animales en el escáner de RM para colocar la región del tumor en el centro de la bobina de volumen (diámetro interior: 72 mm). </li><li> La igualación y puesta a punto tanto para el receptor y el transmisor, seguido de calzas. </li><li> Comience con una secuencia de RM anatómica para localizar el tumor. Utilice una secuencia spin-echo (T2W) turbo T2 para obtener imágenes axiales con los siguientes parámetros de adquisición. Tiempo de repetición (TR) / tiempo de eco (TE) = 3000/34 mseg, 128 x 128 de matriz, 30 x 30 mm campo de visión, número de promedios = 1, longitud de los trenes de eco = 4, y 20 contiguos 1 mm en rodajas gruesas un modo entrelazado para cubrir la región entera del tumor (tiempo total de barrido: 1,6 min). NOTA: Dado que los tumores pancreáticos ortotópico son más difíciles que se encuentra que las subcutáneas, locali convencionalzer imágenes tienen una resolución más baja pueden no ser útiles. </li><li> Adquirir imágenes ponderadas en T1 (T1W) con varios ángulos de tirón para recuperar mapa T1. Para este propósito, usar un gradiente de eco enfoque ángulo MultiFlip con los siguientes parámetros: tiempo de repetición (TR) / tiempo de eco (TE) = 115/3 mseg, 128 x 128 de matriz, un campo de 30 x 30 mm de vista, el número de promedios = 4, ~ 5 - 7 1 mm de espesor cortes contiguos en un modo entrelazado para cubrir la región del tumor, y siete ángulos flip de 10, 20, 30, 40, 50, 60, y 70 (tiempo total de exploración por ángulo flip: 1 min). NOTA: Sin embargo, el enfoque ángulo MultiFlip es eficaz sólo cuando el campo B1 homogeneidad es alta. Si no es así, mapas de T1 se puede obtener con enfoque múltiple TR lugar 15. </li><li> Adquirir imágenes T1W antes y después de la inyección de contraste de gadolinio basada MR. Utilice los mismos parámetros de adquisición y la geometría para el mapeo T1 pero con el ángulo de rotación fija de 30. Usar codificación lineal para garantizar el estado de equilibrio cuando se obtiene el centro del espacio k, especially cuando se utilizan un corto TR y un ángulo bajo flip grado. Adquirir 5 imágenes de referencia antes de la inyección de contraste. Luego de adquirir 40 imágenes tras la inyección de contraste (tiempo total de barrido: 45 min). Utilice una bomba de jeringa para inyectar agente de contraste a una velocidad constante (0,01 ml / seg). </li><li> Controlar la respiración de los animales de forma continua, y ajustar la concentración de isoflurano para mantener la frecuencia respiratoria a 50-100 respiraciones por min. Controle la temperatura corporal del animal a lo largo de la imagen. </li><li> Después de completar DCE-MRI, quítese la aguja y otras sondas, y colocar al animal en una jaula vacía camas con toallas de papel. Masajear suavemente la zona inferior del abdomen. La jaula debe ser colocado un medio bajo una lámpara de calor para permitir que el animal se mueva dentro y fuera del gradiente de calor a medida que se recupera. No deje a un animal sin vigilancia hasta que se haya recuperado el conocimiento suficiente para mantener decúbito esternal. </li></ol> 3. Procesamiento y Análisis de Imágenes <ol><li> Regi tumorales Segmento<html> en las imágenes T2W. En imágenes T2W, la intensidad de la señal en la región del tumor es más brillante que la de los tejidos circundantes, por lo que el límite del tumor se puede delinear manualmente. NOTA: técnicas de segmentación semi-automáticas tales como umbralización global o contorno activo se pueden utilizar 16,17, pero la intensidad de fondo desigual deben corregirse especialmente cuando se utiliza una bobina de superficie. </li><li> Crear mapas de T1 y densidad de protones. En las imágenes adquiridas T1W con una secuencia de eco de gradiente, suponiendo que el tiempo de eco (TE) es mucho menor que T2 * valor, el valor de píxel se determina por <img alt="Ecuación 1" fo:content-width="3in" src="/files/ftp_upload/52641/52641eq1.jpg" /> donde S 0 es la densidad de protones, T es T 1 1 constante de tiempo de relajación, TR es tiempo de repetición, y θ es un ángulo flip. La ecuación (1) puede ser reescrita para 641eq2.jpg &quot;/&gt; cuando S (θ) / sinθ se sustituye con Y, y S (θ) / tanθ se sustituye por X. La ecuación (2) es una ecuación lineal, y su pendiente y la intersección se puede utilizar para recuperar T1 y S 0 valores, respectivamente. </li><li> Calcular la concentración de contraste MR en imágenes DCE-MR. Cuando se inyecta medio de contraste MR basado gadolinio, T Tiempo 1 relajación constante se cambia con el tiempo. Así, la ecuación (1) puede ser reescrita para <img alt="Ecuación 3" fo:content-width="3in" src="/files/ftp_upload/52641/52641eq3.jpg" /> T 1 (t) está relacionada con la concentración de contraste MR, C (t), como sigue, <img alt="Ecuación 4" fo:content-width="3in" src="/files/ftp_upload/52641/52641eq4.jpg" /> donde r 1 es la capacidad de relajación longitudinal del agente de contraste MR. Así, mediante la combinación de las ecuaciones (3) y (4), la concentración de contraste MR se determina por <img alt = &quot;Ecuación 5&quot; fo: contenido-width = src &quot;3in&quot; = &quot;/ files / ftp_upload / 52641 / 52641eq5.jpg&quot; /&gt; </li><li> Cuantificar los parámetros farmacocinéticos de MR agente de contraste. C p (t) presenta la concentración de contraste MR en el plasma sanguíneo en el tiempo t después de iniciar la inyección de contraste. C p (t) se denomina función de entrada arterial (AIF). Si AIF está disponible, los parámetros farmacocinéticos de agente de contraste MR pueden calcularse <img alt="Ecuación 6" fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/52641/52641eq6.jpg" /> donde C t (t) es la concentración de contraste MR en un tejido diana, p v es el volumen de plasma de sangre fraccionada, v es el volumen extracelular e extravascular fraccionada, y K trans es la transferencia de volumen constante. Constante de velocidad de flujo, k ep, es igual a K trans dividido por v e. Si AIF no está disponible, entonces el modelo de región de referencia puede utilizarse en lugar 18,19. El modelo de región de referencia se basa en el modelo de Kety limitado de flujo 20 y utiliza la concentración de contraste en una región de referencia para eliminar la necesidad de AIF de la siguiente manera, <img alt="Ecuación 7" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/52641/52641eq7.jpg" /> donde C t, ROI (t), K trans, ROI, y v e, ROI son la concentración de contraste, la transferencia de volumen constante, y el volumen extravascular extracelular-fraccionada, respectivamente, en la región de interés (ROI), mientras que C t, RR (t), K trans, RR, y v e, RR son aquellos en la región de referencia. Muscular paravertebral se selecciona a menudo como la región de referencia, y v e, RR en pa murinomuscular ravertebral se supone que es constante a 0,08 21. Se utilizó el modelo de región de referencia. </li></ol>

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</ol>

Los autores no tienen ningún conflicto de intereses que declarar.

Hemos introducido los métodos detallados de modelado tumor pancreático ortotópico utilizando ratones inmunodeficientes, DCE-MRI de los tumores abdominales en ratones, y la cuantificación de sus parámetros cinéticos. En el modelado tumor pancreático ortotópico, se debe tener cuidado cuando se inserta una aguja en la cola del páncreas. Si tiene éxito, las células se transfieren a la cabeza de páncreas creando una pequeña ampolla. Cuando se aplica una tabla de plástico ortogonalmente doblada, es fundamental para confirmar ...

El objetivo general de este método consiste en aplicar un mayor contraste de imagen dinámica de resonancia magnética (RM-RT) para xenoinjertos de tumores pancreáticos ortotópico en ratones. DCE-MRI es un método no invasivo para evaluar la microvasculatura en un tejido diana mediante la supervisión del cambio de contraste MR durante un cierto período de tiempo después de la inyección. DCE-MRI se ha utilizado para diagnosticar los tumores malignos y para evaluar la respuesta del tumor a diversas terapias 1-4. Cuantitativa DCE-MRI ha presentado una alta reproducibilidad 5. Para cuantificar los parámetros farmacocinéticos de un agente de contraste MR en un tejido diana, todas las imágenes DCE-MR adquiridos en diferentes puntos temporales y mapa T1 obtenidas antes de la inyección de contraste deben ser corregistrados 6. Sin embargo, debido a los movimientos respiratorios y peristálticas en la zona abdominal, cuantitativa DCE-MRI ha tenido una aplicación limitada para los tumores gastrointestinales. Se han utilizado modelos de tumores de páncreas ortotópico para evaluarrespuesta de páncreas-tumor siguientes terapias biológicas y las quimioterapias 7,8. Modelos de tumores ortotópicos se consideran superiores a los modelos subcutáneos convencionales, puesto que el microambiente en el sitio del tumor original se refleja y de ese modo la respuesta del tumor a la terapia humana se puede predecir con más precisión. Sin embargo, el páncreas del ratón se encuentra en el cuadrante superior izquierdo del abdomen, por lo cuantitativo DCE-MRI de ortotópico xenoinjertos de tumores pancreáticos en ratones no se ha aplicado fácilmente. Hemos establecido un protocolo de DCE-MRI de los tumores abdominales en ratones mediante la fijación de los tumores usando un tablero plástico ortogonalmente doblada para evitar la transferencia de movimiento de la región del pecho 9. La presión aplicada por este tablero fue localizado en el área abdominal, y no ha dado lugar a dificultad respiratoria. Una técnica automatizada imagen coregistration ha sido validado para DCE-MRI de los órganos abdominales en un modo sin respiración, pero realiza effectively sólo cuando las regiones objetivo se mueve lenta y regularmente 10. La frecuencia respiratoria de los animales es variable durante la exploración, la restricción de manera física en la zona abdominal será necesario recuperar los parámetros farmacocinéticos fiables en modelos de ratón de tumores pancreáticos ortotópico. Hemos cuantificado con éxito los parámetros farmacocinéticos de un agente de contraste MR en ortotópico xenoinjertos tumorales pancreáticas utilizando el tablero plástico ortogonalmente doblada en DCE-MRI 11-13. Aquí presentamos el procedimiento detallado de modelado tumor pancreático ortotópico, DCE-MRI de los xenoinjertos de tumores en ratones, y la cuantificación de los parámetros farmacocinéticos.

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>Invitrogen</td><td>11965-118</td><td></td></tr><tr><td>Suero fetal bovino</td><td>Harlan Laboratories</td><td>BT-9501</td><td></td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Productos de Purdue</td><td>67618-153-01</td><td></td></tr><tr><td>5-0 Suturas de Prolene</td><td>Ethicon</td><td>8720H</td><td></td></tr><tr><td>9.4T Escáner de resonancia magnética</td><td>Bruker Biospin Corporation</td><td>BioSpec 94/20 USR</td><td></td></tr><tr><td>Gadoteridol</td><td>Bracco Diagnostics Inc</td><td>NDC 0270-1111-03</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de micropolietileno</td><td>Strategic Applications, Inc</td><td>#PE-10-25</td><td></td></tr><tr><td>Aguja de punta roma de 30 G</td><td>Strategic Applications, Inc</td><td>89134-194</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de monitoreo y compuerta</td><td>SA instruments, Inc</td><td>Modelo 1030</td><td>Este es un sistema compatible con RM para medir la clasificación de resitorio y la temperatura corporal de animales pequeños al mismo tiempo.</td></tr><tr><td>Bomba de jeringa</td><td>New Era Pump Systems, Inc.</td><td>NE-1600</td><td></td></tr></tbody></table>

dynamic contrast mejorada de imagen de resonancia magnética de un modelo ortotópico de cáncer pancreático del ratón

Dynamic Contrast Enhanced Magnetic Resonance Imaging of an Orthotopic Pancreatic Cancer Mouse Model

La resonancia magnética mejorada con contraste dinámico (DCE-MRI) se ha utilizado de manera limitada para xenoinjertos de tumores pancreáticos ortotópicos debido a un artefacto de movimiento respiratorio severo en el área abdominal. Los modelos tumorales ortotópicos ofrecen ventajas sobre los subcutáneos, ya que pueden reflejar el microambiente del tumor primario que afecta el suministro de sangre, la neovascularización y la invasión de células tumorales. Recientemente hemos establecido un protocolo de DCE-MRI de xenoinjertos ortotópicos de tumores pancreáticos en modelos de ratón mediante la fijación de tumores con una placa de plástico doblada ortogonalmente para evitar la transferencia de movimiento desde la región torácica durante la toma de imágenes. La presión ejercida por esta tabla se localizó en la zona abdominal, y no ha resultado en dificultad respiratoria de los animales. Este artículo demuestra el procedimiento detallado del modelado ortotópico de tumores pancreáticos utilizando animales pequeños y DCE-MRI de los xenoinjertos tumorales. También se introduce el método de cuantificación de parámetros farmacocinéticos en DCE-MRI. El procedimiento descrito en este artículo ayudará a los investigadores a aplicar DCE-MRI para modelos de ratones de cáncer gastrointestinal ortotópico.

Células tumorales pancreáticas humanas crecen con éxito en páncreas de ratón creando un tumor sólido. La figura 1 muestra fotografías de (A) un páncreas normal donde se inyecta solución de células de tumor, y (B) un ratón representativo que lleva un xenoinjerto de tumor de páncreas ortotópico (MIA PaCa-2 ). Tumor está localizado en el cuadrante superior izquierdo del abdomen, al lado del bazo. Por lo general toma 2-4 semanas para que los tumores crezcan hasta 5-7 mm de diámetro después de la implantació...

El objetivo de este protocolo es aplicar imágenes de resonancia magnética mejorada con contraste dinámico (DCE-MRI) para xenoinjertos ortotópicos de tumores pancreáticos en ratones. La DCE-MRI es un método no invasivo para analizar la microvasculatura en un tejido diana, y útil para evaluar la respuesta vascular en un tumor después de una terapia novedosa.

Dynamic Contrast mejorada de imagen de resonancia magnética de un modelo ortotópico de cáncer pancreático del ratón

Dynamic contrast enhanced magnetic resonance imaging (DCE-MRI) has been limitedly used for orthotopic pancreatic tumor xenografts due to severe ...

El objetivo general de este procedimiento es aplicar imágenes por resonancia magnética con contraste dinámico, o D-C-E-M-R-I, a xenoinjertos ortotópicos de tumores pancreáticos en ratones. Esto se logra primero extrayendo el páncreas del abdomen y luego infundiendo lentamente células humanas de cáncer de páncreas en la cola del páncreas. A continuación, el páncreas se devuelve al abdomen, y cuando el tumor alcanza un diámetro de cinco a siete milímetros, se coloca una placa de plástico y una bobina superficial encima de la masa tisular humas.Finalmente, la microvasculatura del xenoinjerto tumoral puede visualizarse mediante D-C-E-M-R-I. La principal ventaja de esta técnica frente al método convencional como D-C-M-R-I, de xenoinjertos tumorales subcutáneos, es que los modelos ortotópicos de tumores pancreáticos permiten la evaluación del microambiente tumoral primario, incluyendo el suministro sanguíneo de neovascularización y la invasión de células tumorales. El procedimiento será demostrado por Sharon Samuel, asociada de investigación, y Marie Warren, técnica de investigación, ambas de nuestro laboratorio.Comience colocando un ratón de mar hembra de ocho semanas de edad anestesiado sobre una almohadilla calefactora tras confirmar el nivel adecuado de sedación mediante la compresión del dedo del pie. A continuación, retire el vello del cuadrante superior izquierdo del abdomen del animal y administre un fármaco analgésico en la piel utilizando tijeras rectas de iris. Realice una incisión de un centímetro en la piel y el peritoneo y levante suavemente el páncreas a través de la incisión.Luego, utilice una jeringa de insulina de 0,5 mililitros, equipada con una aguja de calibre 28, para infundir lentamente 2,5 millones de células de cáncer pancreático humano en 30 microlitros de DMEM en la cola del páncreas. Confirme que se forma una pequeña ampolla en la cabeza del páncreas debido a la solución. A continuación, coloque suavemente el páncreas de nuevo en el abdomen y cierre el peritoneo y la piel en una sola capa con dos suturas de prolina 5-0 interrumpidas.Revise el tamaño del tumor diariamente mediante la palpación con dos dedos del área quirúrgica. Los tumores suelen tener una consistencia más densa y irregular en comparación con los tejidos y órganos circundantes. También supervise diariamente a los animales en busca de signos de enfermedad.Cuando el tumor alcance un diámetro de cinco a siete milímetros, inserte una aguja fina de calibre 30 en un extremo de un tubo micro de polietileno y la punta de una aguja rompa de calibre 30 en el otro extremo. Conecte una jeringa de un mililitro que contenga agente de contraste para RM recién preparado a la punta de la aguja rompa e impulse lentamente el émbolo para llenar completamente todo el tubo. A continuación, dilate las venas de la cola del animal bajo una lámpara de calor y utilice fórceps Kelly para sujetar el vástago de la aguja fina de calibre 30.Inserte cuidadosamente la aguja en una de las venas dilatadas de la cola y sujete con cinta adhesiva tanto la cola como el tubo a un trozo de plástico de 10 por 100 milímetros para mantener la cola recta. A continuación, coloque al ratón en posición supina sobre una camilla para animales equipada con agua tibia circulante para regular la temperatura corporal del animal durante la obtención de imágenes. En este momento, también inserte una sonda de temperatura rectal.Cuando el animal esté en posición, coloque una lámina de plástico doblada ortogonalmente sobre la zona abdominal, asegurándose de que el tumor se encuentre detrás del extremo superior de la lámina, y luego baje la lámina aproximadamente dos milímetros para garantizar que el tumor quede firmemente sujeto. Sujete la lámina al lecho del animal con cinta adhesiva. A continuación, coloque un transductor de almohadilla respiratoria sobre la zona torácica para monitorear la respiración del animal durante la adquisición de imágenes. Ahora coloque la bobina superficial sobre la región del tumor, asegurándola firmemente con cinta adhesiva al lecho del animal.Luego, introduzca el lecho del animal en el escáner de RM hasta que la región del tumor se encuentre en el centro de la bobina volumétrica. Aplique resonancia magnética ponderada en T2 para localizar el tumor, seguida de resonancia magnética ponderada en T1 con diversos ángulos de giro para la obtención del mapa de T1. A continuación, para la imagen por resonancia magnética con contraste dinámico (D-C-E-M-R-I), aplique resonancia magnética ponderada en T1 con un ángulo de giro fijo de forma continua antes, durante y después de la inyección del contraste para RM a base de gadolinio.Monitoree continuamente la respiración y la temperatura corporal del animal durante la adquisición de imágenes. Al final de la adquisición, retire la aguja y otras sondas, y coloque al animal bajo una lámpara de calor mientras masajea suavemente la zona abdominal inferior. Continúe así hasta que el animal despierte. La resonancia magnética con contraste dinámico (D-C-E-M-R-I) puede aplicarse con éxito en xenoinjertos de tumores pancreáticos ortotópicos.Utilizando el modelo de región de referencia, por ejemplo, estos mapas de contraste muestran la región tumoral en escala de colores un minuto antes de la inyección del agente de contraste por RM. Y a los cinco y 40 minutos después, superpuestos con imágenes de RM ponderadas en T2 en escala de grises. El ratón en este experimento portaba un xenoinjerto ortotópico de tumor pancreático humano.Estas curvas de realce de contraste se promediaron a partir de la región tumoral y la región del músculo paravertebral. Estos mapas de kts y KEP para el tumor demuestran la velocidad de entrada y salida del agente de contraste Mr. Mientras se intenta este procedimiento TCMI, es importante asegurarse de que el tumor se encuentre detrás del extremo superior de la tabla.

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Investigación

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Medicina

El video explica un método quirúrgico escalonado para la implantación ortotópica de un fragmento de tumor de un donante canceroso al páncreas de un ratón receptor no canceroso para el desarrollo de cáncer de páncreas. El PDAC implantado ortotópicamente podría recapturar el microambiente tisular de los cánceres de páncreas humanos con mayor precisión que los modelos subcutáneos (SC) convencionales.

Trasplante de tumor ortotópico con homoinjerto: una técnica para generar modelos de ratón de tumores pancreáticos

Este video describe la técnica de DCE-MRI para xenoinjertos de tumores pancreáticos ortotrópicos en ratones. La DCE-MRI es un método no invasivo para analizar la microvasculatura en un tejido diana, y útil para evaluar la respuesta vascular en un tumor después de una terapia novedosa. Este método ayudará a los investigadores a aplicar DCE-MRI para modelos de ratón de cáncer gastrointestinal ortotópico.

DCE-MRI de xenoinjertos ortotópicos de tumores pancreáticos: un método para evaluar la microvasculatura en un tejido tumoral objetivo

Este video muestra un modelo ortotópico de cáncer de páncreas que utiliza Matrigel para la administración celular localizada e imágenes de bioluminiscencia in vivo para el monitoreo no invasivo de la progresión tumoral. El modelo ortotópico es adecuado tanto para modelos singénicos como de xenoinjertos y podría utilizarse en ensayos preclínicos para investigar el impacto de nuevas terapias contra el cáncer en el crecimiento del tumor pancreático primario y la metástasis.

Modelo de ratón ortotópico bioluminiscente para cáncer de páncreas: una técnica no invasiva para monitorear la progresión del cáncer en ratones

Una mejor comprensión de la biología del cáncer de páncreas es una necesidad vital para permitir el desarrollo de mejores opciones terapéuticas para el tratamiento de cáncer de páncreas. Para hacer frente a esta necesidad, se demuestra un modelo ortotópico de cáncer de páncreas que permite la monitorización no invasiva de la progresión del cáncer...

Modelo ortotópico bioluminiscente de la progresión del cáncer de páncreas

Aquí se presenta un procedimiento para implantar células de cáncer de páncreas que expresan proteínas fluorescentes verdes (PANC-1 GFP) ortotópicamente en el páncreas de ratones Balb-c Ola Hsd-Fox1nu para evaluar la progresión tumoral y la metástasis.

Fluorescente modelo de ratón ortotópico de cáncer de páncreas

Este artículo describe la utilización de la ecografía de alta resolución en ratones modificados genéticamente el cáncer de páncreas. El objetivo principal es proporcionar una instrucción detallada para la detección y evaluación de los tumores pancreáticos endógenos.

Utilizando ultrasonido de alta resolución Monitor Tumor Inicio y crecimiento en modelos de cáncer pancreático genéticamente

Describimos un protocolo para la implantación guiada por ultrasonido de líneas celulares de adenocarcinoma ductal pancreático derivados de la murino directamente en el sitio del tumor nativo. Este enfoque resultó en tumores pancreáticos detectables por la ecografía dentro de 2-4 semanas de la inyección, y redujo significativamente la proporción de la sesión de células tumorales en la pared peritoneal en comparación con la implantación ortotópica quirúrgica.

Ultrasonido-Guiado Implantación Ortotópica de Adenocarcinoma Ductal Pancreático Murino

En el contexto clínico, los pacientes con cáncer de páncreas localizado se someterán a pancreatectomía seguida de tratamiento adyuvante. Este protocolo divulgado aquí apunta establecer un método seguro y de manera efectiva de modelar este escenario clínico en ratones desnudos, con la implantación orthotopic del cáncer pancreático seguido por pancreatectomy y splenectomy distales.

Un modelo ortotópico de ratón reseccional de cáncer de páncreas

Presentamos un protocolo para generar un modelo de cáncer de páncreas ortotópico mínimamente invasivo mediante inyección guiada por ultrasonido de células de cáncer de páncreas humano y el posterior monitoreo del crecimiento tumoral in vivo por imagen ecográfica.

Generación de un xenoinjerto ortotópico de células de cáncer de páncreas mediante inyección guiada por ultrasonido

Los aloinjertos ortotópicos singénicos de ratón del adenocarcinoma ductal pancreático (PDAC) recapitulan la biología, los fenotipos y las respuestas terapéuticas de los subtipos de enfermedades. Debido a su progresión tumoral rápida y reproducible, son ampliamente utilizados en estudios preclínicos. Aquí, mostramos prácticas comunes para generar estos modelos, inyectando cultivos singénicos murinos de PDAC en el páncreas.

Aloinjertos ortotópicos singénicos de ratón para modelar el cáncer de páncreas

Este protocolo utiliza una cama de múltiples cámaras para la resonancia magnética paralela (RM) de hasta cuatro animales para detectar tumores de adenocarcinoma pancreático en modelos de ratón modificados genéticamente. Este protocolo de resonancia magnética multianimal es rápido y rentable para detectar y medir tumores, facilitando la selección animal para estudios preclínicos y el seguimiento longitudinal del crecimiento tumoral.

Imagen por resonancia magnética multianimal para mediciones tumorales en modelos de ratón con cáncer de páncreas

Aprende a aplicar DCE-MRI en xenoinjertos ortotópicos de cáncer pancreático en ratones. Esta técnica no invasiva permite visualizar la microvasculatura tumoral y evaluar respuestas vasculares a terapias novedosas en modelos fisiológicamente relevantes.

Dynamic Contrast mejorada de imagen de resonancia magnética de un modelo ortotópico de cáncer pancreático del ratón

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