La completa y actualizada "rotífero policultivo Método" para la educación de primer pez cebra Alimentación
17 de enero de 2016
Las larvas de pez cebra están adaptadas para alimentarse de zooplancton. Es posible capitalizar esta característica natural en el laboratorio cultivando peces que se alimentan primero juntos en el mismo sistema con rotíferos vivos de agua salada. Esta estrategia de "policultivo" promueve un alto crecimiento y supervivencia con un mínimo de trabajo y perturbación para las larvas.
El objetivo general del Método de Policultivo de Rotíferos es aprovechar la productividad natural y las características biológicas de los rotíferos de agua salada para crear un entorno que promueva un crecimiento rápido y la máxima supervivencia de las larvas de pez cebra que se alimentan por primera vez. La principal ventaja de esta técnica es que disminuye drásticamente la cantidad de tiempo y espacio necesarios para criar con éxito un gran número de larvas de pez cebra para su uso en experimentos de investigación. Comience el mantenimiento del cultivo de rotíferos llenando el recipiente de cultivo de alimentación, o FCV, hasta el 90 por ciento de su capacidad con agua dulce limpia y declorada dosificada con 10 gramos por litro de sales de acuario.
Asegúrate de que el agua esté bien mezclada y de que toda la sal se haya disuelto por completo. Luego, configure el flujo de aire en el recipiente para que mantenga un hervor continuo. Mida la salinidad del líquido con un refractómetro.
A continuación, tome muestras de los rotíferos en el recipiente de cultivo, o CV. Asegúrese de que el cultivo esté bien mezclado. A continuación, recoja tres muestras de dos a tres mililitros con una pipeta de transferencia de diferentes partes del cultivo y combine las muestras en un tubo. Transfiera uno o dos mililitros de la muestra combinada a una placa de Petri.
Visualice la muestra bajo un microscopio de disección y verifique la calidad del cultivo. Agregue 100 microlitros de solución de yodo de Lugol al 50 por ciento a la muestra para inmovilizar a los rotíferos y contarlos. Tome inmediatamente una submuestra de dos mililitros con una pipeta de plástico y dispense un mililitro en un portaobjetos de recuento de vigas Sedgewick.
Usando el microscopio de disección, cuente la mayor cantidad de área del portaobjetos que sea necesaria para contar hasta 100 rotíferos intactos y el número total de huevos adheridos a los rotíferos. Luego, calcule el número de rotíferos por mililitro para su uso posterior. Inicie la cosecha quitando el suministro de aire y el filtro de hilo dental.
Abra lentamente la válvula en la parte inferior del CV y permita que el agua fluya suavemente hacia un colector de plancton con una pantalla de malla de 53 micras. Recoja el agua que fluye por la parte inferior del colector después de filtrarla en un balde o drenarla. A continuación, llene una botella con 10 a 15 gramos por litro de agua salada limpia.
Invierta la pantalla sobre el FCV y lave los rotíferos en el FCV con un suave chorro de agua salada. Inicie el temporizador de medición programable o PMT para entregar alimento al FCV. A continuación, frota todo el interior del CV con una almohadilla limpia.
Cree una nueva mezcla de 15 gramos por litro en un balde de cinco galones para reemplazar el volumen de agua perdido durante la cosecha. Revuelva la solución vigorosamente hasta que la mezcla se disuelva por completo. A continuación, añada la solución al CV.A continuación, enjuague el filtro de hilo dental con un spray de alta presión.
Cuando el filtro de hilo dental esté libre de residuos, devuélvalo al CV. Ajuste las tasas de alimentación de las algas entregadas al CV cambiando la duración de cada evento de dosificación. Pasadas las 24 horas, repetir el proceso, iniciando la recolección de los rotíferos que quedan en el FCV. Concentrar los rotíferos en dos litros de agua dulce, limpia y declorada con cinco gramos por litro de sal.
Estos pueden almacenarse a cuatro grados centígrados como suministro de reserva, o utilizarse para alimentar a los peces en etapas posteriores más allá de lo descrito en este protocolo. Recoja embriones de pez cebra de un evento de desove vertiendo los embriones desovados a través de un colador de té. Y luego, enjuague suavemente con agua de pescado estéril de una botella de lavado en placas de Petri.
Una vez recogidos todos los embriones, incubarlos. Comienza la fase de policultivo cuando más del 90 por ciento de las larvas eclosionadas nadan activamente en la columna de agua. Agregue 500 mililitros del cultivo de rotíferos directamente desde el FCV a un tanque de vivero de 3,5 litros.
A continuación, vierta suavemente las larvas de una placa de Petri en el tanque del vivero. Asegúrese de que no queden larvas en el plato. Agregue 500 mililitros de agua de pescado limpia y acondicionada de una fuente de agua dedicada al tanque hasta un volumen final de un litro y 5 gramos por litro de salinidad final.
Observe el tanque de policultivo al menos una vez al día para asegurarse de que los rotíferos y los peces estén presentes y creciendo. Compruebe que los rotíferos sean visibles en toda la columna de agua. Asegúrese de que los peces también sean visibles dentro de la columna de agua y que estén nadando entre los rotíferos.
Es fundamental evaluar el estado de cada tanque a diario para asegurarse de que estén vivos y nadando con rotíferos disponibles para todas las larvas de peces. Una vez asegurado que los rotíferos y los peces están creciendo, inicie el flujo normal de agua a través del tanque. Finalmente, coloque una pantalla sobre el puerto de drenaje para asegurarse de que las larvas no salgan del tanque.
El rendimiento típico de un cultivo de rotíferos se monitoreó durante un período de 30 días y arrojó una densidad media de cultivo de 932 rotíferos por mililitro. Y un máximo de 1.330 rotíferos por mililitro. La población de rotíferos en un tanque de policultivo con pez cebra tiene una densidad media de rotíferos de 589,4 rotíferos por mililitro.
El valor mínimo de 481 rotíferos por mililitro es 10 veces mejor que el trabajo publicado anteriormente. El pez cebra mostró un crecimiento constante cada día durante el período de cinco días, desde una longitud total media de 3,9 milímetros hasta 5,4 milímetros. Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo cultivar rotíferos para su uso en un sistema de policultivo diseñado para satisfacer las demandas nutricionales del pez cebra que se alimenta por primera vez.
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Descripción general
El método de policultivo con rotíferos utiliza rotíferos de agua salada para mejorar el crecimiento y la supervivencia de larvas de pez cebra en la fase inicial de alimentación. Esta técnica reduce significativamente los recursos necesarios para criar grandes cantidades de larvas de pez cebra con fines de investigación.
Componentes Clave del Estudio
Área de la ciencia
- Neurociencia
- Biología del desarrollo
- Técnicas de acuicultura
Antecedentes
- Los peces cebra larvales se alimentan naturalmente de zooplancton.
- El uso de rotíferos vivos de agua salada puede mejorar el crecimiento larval.
- Este método minimiza el trabajo y las perturbaciones durante el cultivo.
- Un cultivo eficiente es fundamental para aplicaciones de investigación.
Objetivo del estudio
- Para promover el crecimiento rápido de los peces cebra larvales.
- Para maximizar las tasas de supervivencia de las larvas en su primera alimentación.
- Para agilizar el proceso de cría con fines de investigación.
Métodos Utilizados
- Mantenimiento del cultivo de rotíferos en un recipiente de cultivo de alimentación.
- Preparación de agua limpia y desclorinada con sales para acuario.
- Ajuste del flujo de aire para mantener una ebullición constante en el recipiente de cultivo.
- Medición de la salinidad con un refractómetro para condiciones óptimas.
Resultados principales
- El método reduce significativamente el tiempo y el espacio necesarios para el cultivo de larvas.
- Se observaron altas tasas de crecimiento y supervivencia de larvas de pez cebra.
- Se logró un uso eficiente de los recursos mediante la policultura.
Conclusiones
- El método de policultivo de rotíferos es efectivo para el cultivo de larvas de pez cebra.
- Este enfoque puede ser beneficioso para diversas aplicaciones de investigación.
- Estudios futuros podrían explorar una mayor optimización de este método.
Preguntas frecuentes
Relevancia Ejecutiva para la Industria
El cultivo eficiente de peces cebra alimentados por primera vez es fundamental para el cribado de alto rendimiento in vivo y la validación temprana de objetivos en la I+D de biotecnología farmacéutica. El Método de Policultivo de Rotíferos permite la producción escalable y reproducible de larvas de pez cebra sanas, favoreciendo la implementación robusta del sistema modelo en flujos de trabajo de descubrimiento y preclínicos. Este enfoque reduce las limitaciones de recursos y mejora la fiabilidad experimental en programas de cartera que utilizan el pez cebra como sistema relevante para enfermedades.
Aplicaciones Estratégicas en I+D de Biotecnología Farmacéutica
Descubrimiento Temprano y Validación de Blancos
- Permite la generación consistente de grandes cohortes de larvas de pez cebra para estudios basados en hipótesis.
- Apoya la validación funcional de objetivos al garantizar altas tasas de supervivencia y crecimiento en organismos modelo.
- Reduce la variabilidad biológica, fortaleciendo la confianza predictiva en ensayos de etapas iniciales.
Desarrollo de Pruebas y Tamizaje
- Facilita la preparación de larvas estandarizadas y sanas para ensayos de cribado fenotípico.
- Mejora la reproducibilidad del ensayo al minimizar factores de confusión nutricionales y ambientales.
- Permite la escalabilidad y el reutilización de plataformas para tuberías de evaluación de compuestos.
Investigación Traductacional y Preclínica
- Proporciona una base sólida para la modelización de enfermedades y estudios de biomarcadores traslacionales en pez cebra.
- Asegura la continuidad desde el descubrimiento inicial hasta la validación preclínica mediante el mantenimiento de la integridad del modelo.
- Permite tomar decisiones de avance ajustadas al riesgo basadas en datos confiables in vivo.
Integración de la canalización y flujo de trabajo
Este método se integra en la interfaz entre el descubrimiento inicial y la identificación de compuestos prometedores, proporcionando un suministro confiable de larvas de pez cebra para ensayos posteriores y estudios mecanicistas.
- Biología de Descubrimiento: Apoya la comprobación de hipótesis y la reducción de riesgos biológicos asegurando la consistencia del modelo.
- Selección: Proporciona resultados cuantitativos reproducibles para el análisis comparativo de condiciones experimentales.
- Análisis: Permite mediciones robustas del crecimiento y la supervivencia como variables dependientes para la evaluación estadística.
- Investigación Traductiva: Mantiene la fidelidad del sistema relevante a la enfermedad para estudios de biomarcadores y eficacia.
- Reutilización Empresarial: Establece un flujo de trabajo estandarizado y escalable para su uso repetido en múltiples programas.
Impacto Operativo y Empresarial
- Valor científico: Aumenta la confianza predictiva y reduce la ambigüedad mecanicista en estudios basados en pez cebra.
- Valor operativo: Optimiza los procesos de cría, reduciendo los requisitos de mano de obra y recursos.
- Valor estratégico: Mejora la calidad de las decisiones de avance o interrupción y la eficiencia del capital al facilitar la generación confiable de datos in vivo.
- Impacto en la cartera: Permite la priorización y el avance ajustados al riesgo de activos en descubrimiento y preclínicos.
Consideraciones de Implementación
- Requiere experiencia técnica en el mantenimiento de sistemas modelo acuáticos y en el manejo de alimento vivo.
- Necesita acceso a control de calidad del agua, monitoreo de salinidad y microscopía básica para la cuantificación de rotíferos.
- Exige estandarización entre equipos para garantizar la reproducibilidad entre lotes experimentales.
- La adaptación a otros sistemas modelo puede requerir la optimización del protocolo según las necesidades específicas de cada especie.
- Depende del suministro constante de rotíferos vivos y del monitoreo de la salud del cultivo.
