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May 09, 2020
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La lesión cerebral traumática es una de las principales causas de muerte y discapacidad. La lesión cerebral axonal difusa es un daño axonal generalizado que se desarrolla después de la TBI. En esta investigación, me gustaría presentar nuestro modelo sobre la inducción difusa lesión cerebral axonal basada en el resultado del mecanismo de aceleración rotacional TBI.
Seleccione ratas Sprague-Dawley machos adultos que pesen de 300 a 350 gramos. Proporcione comida de rata y agua ad libitum. Realice todos los experimentos entre las 6:00 AM y las 12:00 PM. El dispositivo se colocó en una mesa de laboratorio pesada y estable.
El dispositivo consta de los siguientes componentes: un cilindro, un peso de hierro, un mecanismo de rotación que consta de un tubo cilíndrico y pasadores de fijación de la cabeza. El peso se une a una cuerda y se eleva a la altura de 120 centímetros. El peso que cae libremente golpea el perno activando el mecanismo de rotación.
El dispositivo de rotación del cabezal lateral de rata se utilizó para girar la cabeza rápidamente de cero a 90 grados. Después de la inducción, lesión cerebral axonal difusa, la rata fue trasladada a la sala de recuperación. F es la fuerza aplicada a la cabeza del animal en kilogramos.
Capital M es el momento de la fuerza, K para la energía cinética. Little m es la masa del peso de caída, g para la aceleración gravitacional, h para la altura en centímetros, y D es la distancia entre los pasadores de oído en centímetros. Para la evaluación del déficit neurológico y los déficits del modelo de grado, utilizamos la Puntuación de Gravedad Neurológica en ratas.
Evaluamos la movilidad, la hemiplejía, la tarea de caminar de haz, el fracaso en la tarea de caminar. Fallo de la tarea de equilibrio de haz de ancho 1,5 centímetros. Estabilidad y equilibrio de haz, esfuerzo en el equilibrio de haz de 1,5 centímetros de ancho y reflejos.
48 horas después de la lesión, todas las ratas, lesiones y grupos de control, fueron profundamente anestesiadas y transcardiacalmente perfundidas con 0,9% de solución salina heparinizada seguida de 500 mililitros de 4% de formaldehído en 0,1 M de solución salina de fosfato. Después de la perfusión, se produjo la decapitación y los cerebros se extirparon inmediatamente, luego se fijaron en una solución de 4%formaldehído durante 48 horas. Los cerebros fueron entonces bloqueados en secciones coronales de cinco milímetros desde la cara del bulbo olfativo hasta la corteza visual, mientras que el cerebelo y los tallos cerebrales fueron diseccionados.
Después de la incrustación de parafina, se hicieron secciones coronales y sagitales a partir del tálamo. Producir la tinción inmunoquímica de la proteína precursora beta-amiloide. Los diversos grupos de ratas en diferentes momentos se muestran en el esquema.
Lesión cerebral axonal difusa al comienzo del experimento. En el momento 48 horas, se examinó la Puntuación de Gravedad Neurológica. En el momento de 48 horas, la tinción inmunoquímica de beta-APP se realizó en los dos grupos.
Déficit neurológico ilustrado 48 horas después de una lesión cerebral axonal difusa para dos grupos de estudio. Una prueba de Mann-Whitney indicó que el déficit neurológico fue significativamente mayor para 15 ratas con lesión cerebral axonal difusa en comparación con 15 ratas ingenuas a las 48 horas después de la intervención. Fotomicrografías representativas que revelan inmunorreactivos axonales y neuronales tras una lesión cerebral axonal difusa aislada en ratas 48 horas después de la lesión.
Las cadenas celulares más pequeñas se detectan con proteína precursora beta-amiloide. En el grupo falso, no se detectó. En nuestro trabajo, desarrollamos un nuevo modelo simple, reproducible y confiable para la lesión cerebral axonal difusa basada en el mecanismo de aceleración rotacional.
Este modelo permitirá una mejor comprensión de la fisiopatología de la lesión cerebral axonal difusa y el desarrollo de tratamientos más eficaces. Muchas gracias por su atención.
Este protocolo valida un modelo de roedor fiable, fácil de realizar y reproducible de lesión axonal difusa cerebral (DAI) que induce daño generalizado a la materia blanca sin fracturas o contusiones de cráneo.
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Frank, D., Melamed, I., Gruenbaum, B. F., Grinshpun, J., Kuts, R., Shvartsur, R., Azab, A. N., Assadi, M. H., Vinokur, M., Boyko, M. Induction of Diffuse Axonal Brain Injury in Rats Based on Rotational Acceleration. J. Vis. Exp. (159), e61198, doi:10.3791/61198 (2020).
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