Name: Un modelo preclínico de impacto cortical controlado para hemorragia traumática, contusión y neuroinflamación (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-06-10T14:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 50 s
Description: Aprende a utilizar el modelo de impacto cortical controlado en ratones para estudiar hemorragia traumática, contusión cerebral y neuroinflamación. Esta técnica permite controlar la severidad del daño cerebral mediante parámetros biomecánicos ajustables.

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<li>Saatman, K. E., Feeko, K. J., Pape, R. L., Raghupathi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+behavioral+and+histopathological+responses+to+graded+cortical+impact+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Differential behavioral and histopathological responses to graded cortical impact injury in mice.</a> Journal of Neurotrauma. 23 (8), 1241-1253 (2006).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>Taladro corto de trephine de 4 mm</td><td>Salvin Dental Specialties, Inc.</td><td>TREPH-SHORT-4</td><td></td></tr><tr><td>anticuerpo anti-Iba1</td><td>Wako químicos</td><td>#019-19741</td><td></td></tr><tr><td>anticuerpo anti-Ly76</td><td>abcam</td><td>ab91113</td><td></td></tr><tr><td>cemento de carboxilato</td><td>3M</td><td>70201136010</td><td></td></tr><tr><td>impactador de lesiones por contusión cortical</td><td>Diseño personalizado & Fabricación, Inc.</td><td>S/N 49-2004-C, eCCI Modelo 6.3</td><td>Dispositivo CCI (S/N 49-2004-C, eCCI Modelo 6.3)</td></tr><tr><td>acetato violeta de cresilo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5042</td><td></td></tr><tr><td>Kit de tinción DAB</td><td>Vector</td><td>SK-4105</td><td></td></tr><tr><td>anticuerpo secundario IgG anti-conejo de cabra, Alexa Fluor 488</td><td>Invitrogen</td><td>A11034</td><td></td></tr><tr><td>anticuerpo secundario IgG anti-rata de cabra, Alexa Fluor 594</td><td>Invitrogen</td><td>A11007</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas de Hematoxilina</td><td>ScyTek</td><td>HMM500</td><td></td>de Mayer</tr> herramientas <tr><td></td><td>de ciencia fina</td><td>11252-20 NO. 5</td><td></td></tr><tr><td>isoflurano</td><td>Panion & BF Biotech Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bupivacaína 0.25%</td><td>Hospira</td><td></td><td></td></tr><tr><td>carbonato de litio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>62470</td><td></td></tr><tr><td>marco estéril</td> tijeras <td>de calcetería</td><td></td><td></td></tr> herramientas <tr>de <td>ciencia fina</td><td>14068-12</td><td></td><td></td></tr><tr><td>azul solvente 38</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S3382</td><td></td></tr></tbody></table>

un modelo preclínico de impacto cortical controlado para hemorragia traumática, contusión y neuroinflamación

A Preclinical Controlled Cortical Impact Model for Traumatic Hemorrhage Contusion and Neuroinflammation

Ilustración de la colocación estereotáctica y el procedimiento de craneotomía.
El modelo CCI es conocido por su estabilidad y reproducibilidad en la producción de lesiones que van de leves a graves18. La técnica estereotáctica adecuada y el procedimiento de craneotomía son los principales determinantes en la producción de una lesión cerebral inducida por ICC estable y reproducible (Figura 1A, B). Un procedi...

Un modelo preclínico de impacto cortical controlado para hemorragia traumática, contusión y neuroinflamación

Cerebral contusion is a severe medical problem affecting millions of people worldwide each year. There is an urgent need to understand the ...

Este modelo se puede utilizar para estudiar las patologías asociadas con la contusión cerebral, incluyendo la hemorragia intracraneal, la toxicidad por hierro, la muerte neuronal, la lesión axonal, el déficit neurológico y la inflamación neuronal. La principal ventaja de esta técnica es que la gravedad del daño cerebral se puede controlar fácilmente mediante la manipulación de los parámetros bioquímicos como la velocidad y la muerte del impacto en el dispositivo CCI. La lesión focal por rotura cortical inducida por CCI es altamente reproducible.La técnica estereotáctica adecuada y el procedimiento de craneotomía son los principales determinantes en la producción de una lesión cerebral inducida por ICC estable y reproducible. En general, el investigador nuevo en el procedimiento tendrá dificultades para estabilizar el ratón en el marco esterotéxico y realizar la craneotomía adecuada. La Sra. Jhih Shuan Lin, una técnica de laboratorio de mi laboratorio, demostrará el procedimiento.Comience por confirmar la falta de reflejo de pellizco de los dedos del pie en el animal para asegurarse de que esté correctamente anestesiado. Afeita la cabeza del ratón con una maquinilla eléctrica en dirección de caudal a rostral. Pero no recortes los bigotes.Coloque el mouse en el marco estereotáxico e inserte con cuidado las barras de la oreja en los canales auditivos, asegurándose de que la cabeza del mouse esté estabilizada por ambas barras de la oreja por igual. Mantenga la anestesia entre uno y 2% de isoflurano durante la cirugía. Aplique vaselina en ambos ojos para evitar que se seque durante la cirugía.A continuación, utilice bastoncillos de algodón estériles para desinfectar la cabeza afeitada con betadine seguido de etanol al 70%. Administrar 100 microlitros de bupivacaína al 0,25% por vía subcutánea con una aguja de insulina de calibre 31 y masajear suavemente el lugar de la inyección para una mejor absorción. Haz una incisión longitudinal a lo largo de la línea media del cuero cabelludo con un bisturí o unas tijeras.Luego, use un hemostático para tirar de la piel hacia el lado derecho. Deje que el cráneo expuesto se seque durante un minuto. A continuación, limpie los restos de sangre y tejidos del cráneo con un bastoncillo de algodón estéril.Comprueba que la cabeza del animal está nivelada en el plano horizontal e identifica los puntos de referencia anatómicos, Bregma y Lambda, marcando ambos lugares con un lápiz. Asegúrese de que la cabeza del animal esté nivelada en la dirección rostral-caudal midiendo las coordenadas Z de Bregma y Lambda. Utilice el mismo procedimiento para colocar la cabeza horizontalmente.Use una aguja de insulina de calibre 31 para identificar el sitio de la craniectomía. Establezca el origen XY en Bregma y mueva lateralmente la aguja tres milímetros hacia la derecha. Marque esta posición como el sitio de la craniectomía y dibuje un círculo de cuatro milímetros de diámetro en el cráneo con un lápiz.Corta a lo largo del círculo delineado por el lápiz con un microtaladro de alta velocidad con la trépano para crear un agujero abierto de cuatro milímetros de diámetro. Retire el colgajo de hueso con una pinza y guárdelo en solución salina normal helada. Enjuague suavemente el orificio con solución salina antes de aplicar presión sobre la superficie del cerebro para detener el sangrado.En el dispositivo CCI, ajuste la punta redondeada del impactador de 2,5 milímetros de diámetro en un ángulo de 22,5 grados. Ponga a cero la punta de impacto en la superficie dural y ajuste los parámetros de impacto en la caja de control a una velocidad de cuatro metros por segundo y una profundidad de deformación de dos milímetros. Retraiga la punta de metal.Descarga el pistón para generar impactación en el cerebro. Luego, coloque un hisopo de algodón estéril en el área lesionada para detener el sangrado. Reemplace el colgajo de hueso y asegúrelo con cemento dental.Cierre el cuero cabelludo con adhesivo para tejidos. Coloque el mouse debajo de la lámpara de calor en una jaula de recuperación limpia con ropa de cama hasta la recuperación completa. La técnica estereotáctica adecuada y el procedimiento de craniectomía son determinantes importantes en la producción de una lesión cerebral inducida por ICC estable y reproducible.Un procedimiento ideal de craniectomía causaría una lesión histológica mínima en el cerebro operado simuladamente. Se observaron cambios en el daño cerebral y la pérdida del cuerpo calloso en los días 1, 3, 7 y 28 después de la ICC. Además, se observó atrofia cerebral unilateral en el lado de la contusión el día 28 post-ICC.La neuroinflamación fue revelada por la microglía activada Iba1-positiva y la acumulación de macrófagos alrededor del borde del área de contusión. La hemorragia intraparenquimatosa también fue detectable por la tinción positiva para Ly76 desde el primer hasta el séptimo día después de la ICC. Se observó una mezcla de glóbulos rojos con morfología celular rota e intacta en el séptimo día después de la ICC, lo que sugiere que los glóbulos rojos se lisaron en esta etapa.Este fenómeno fue consistente con la observación de que la deposición de hierro férrico fue detectable en la región de contusión desde los días siete hasta los 28 después de la ICC. Se observaron microglía y macrófagos activados en el cuerpo estriado lejos del sitio de la contusión desde los días tres hasta los 28 después de la ICC, lo que indica lesiones del cuerpo calloso y estriatal. Esta técnica allana el camino para que los investigadores exploren más a fondo la interacción neuroinflamatoria inducida por la hemorragia cerebral a través de la comprensión de la respuesta de las células inmunitarias, como la microglía, después de la contusión de la hemorragia.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Lateral fluido percusión (LFP), un modelo establecido de lesión traumática del cerebro en ratones, se demostró. LFP cumple tres criterios principales para los modelos animales: relevancia validez, fiabilidad y clínicos. El procedimiento, que consiste en una craneotomía quirúrgica, la fijación del cubo seguida por la inducción de la lesión, lo que resulta en lesiones focales y difusas, que se describe es.

Percusión fluido lateral: Modelo de Lesión Cerebral Traumática en ratones

Las lesiones cerebrales traumáticas (TBI) siguen siendo un grave problema de salud. Con el modelo de cirugía de impacto cortical controlado, se pueden realizar investigaciones sobre los efectos del TCE y los posibles métodos de tratamiento.

Controlado Modelo de Impacto cortical de la lesión cerebral traumática

Este protocolo demuestra metodologías para un modelo de ratón de lesión cerebral traumática de cráneo abierto y trasplante de células pluripotentes derivadas de células madre inducidas por el ser humano cultivadas en el sitio de la lesión. Las pruebas conductuales y histológicas de los resultados de estos procedimientos también se describen brevemente.

Modelo de impacto cortical controlado de lesión cerebral de ratón con trasplante terapéutico de células neuronales derivadas de células madre pluripotentes inducidas por el hombre

La alteración del neurotransmisor es un mecanismo de disfunción neuronal que se produce después de la conmoción cerebral y contribuye a las consecuencias a largo plazo a veces catastróficas. Este modelo de rata combina microdiálisis, permitiendo la cuantificación del neurotransmisor in vivo, con una técnica de caída de peso que ejerce una rápida aceleración y desaceleración de la cabeza y el torso, un factor importante del trauma craneocerebral humano.

Un modelo de rata novedoso y traslacional de la conmoción cerebral que combina la fuerza y la rotación con la microdiálisis cerebral In Vivo

Aquí describimos un protocolo para la inducción de una lesión cerebral traumática murina a través de un impacto cortical controlado a cabeza abierta.

Modelo Murino de Impacto Cortical Controlado para la Inducción de Lesiones Cerebrales Traumáticas

Este protocolo presenta métodos para caracterizar la respuesta neuroinflamatoria y hemodinámica a la lesión cerebral traumática leve e integrar estos datos como parte de un análisis de sistemas multivariante utilizando regresión parcial de mínimos cuadrados.

Análisis de sistemas de la respuesta neuroinflamatoria y hemodinámica a la lesión cerebral traumática

El protocolo describe una lesión cerebral traumática leve en un modelo de ratón. En particular, se explica completamente un protocolo paso a paso para inducir una lesión leve en la cabeza cerrada en la línea media y la caracterización del modelo animal.

Modelo electromagnético controlado de cabeza cerrada de lesión cerebral traumática leve en ratones

Aquí, se demuestra cómo se puede usar un modelo de lesión de cabeza cerrada despierta para examinar los efectos de la lesión cerebral traumática leve repetida (r-mTBI) en la plasticidad sináptica en el hipocampo. El modelo replica características importantes de r-mTBI en pacientes y se utiliza junto con la electrofisiología in vitro .

Evaluación de los cambios en la plasticidad sináptica utilizando un modelo de lesión cerebral traumática leve con vigilia

Este protocolo presenta un modelo murino modificado de lesión cerebral traumática leve repetitiva (rmTBI) inducida a través de un método de lesión craneal cerrada (CHI). El enfoque presenta una ventana de cráneo adelgazada y percusión de fluidos para reducir la inflamación comúnmente causada por la exposición a las meninges, junto con una mejor reproducibilidad y precisión en el modelado de rmTBI en roedores.

Modelo de ratón modificado de lesión cerebral traumática leve repetitiva que incorpora ventana de cráneo adelgazada y percusión de fluidos

Los modelos simplificados de lesiones cerebrales traumáticas (TCE) han facilitado el desarrollo de enfoques terapéuticos. Este protocolo describe la creación de una corteza de ratón con heridas punzadas utilizando agujas, lo que permite el análisis de la hemorragia y la inflamación. El modelo de ratón con LCT con herida punzada ofrece la ventaja de realizarse sin necesidad de equipo especializado.

Modelo de ratón con herida de puñalada para estudiar la hemorragia y la inflamación en lesiones cerebrales traumáticas

Aprende a utilizar el modelo de impacto cortical controlado en ratones para estudiar hemorragia traumática, contusión cerebral y neuroinflamación. Esta técnica permite controlar la severidad del daño cerebral mediante parámetros biomecánicos ajustables.

Un modelo preclínico de impacto cortical controlado para hemorragia traumática, contusión y neuroinflamación

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