Name: Explantes de tumores derivados de pacientes como una plataforma preclínica viva para predecir la resistencia a los medicamentos en pacientes (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-07T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 42 s
Description: Aprende a utilizar explantes derivados de pacientes como plataforma preclínica viva para evaluar respuestas a fármacos en tumores humanos. Este método preserva la arquitectura tridimensional y el microambiente tumoral, permitiendo predicciones precisas y descubrimiento de biomarcadores.

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Agradecemos a los cirujanos y patólogos de University Hospitals of Leicester NHS Trust por proporcionar tejido tumoral resecado quirúrgico. También agradecemos a la instalación de Histología dentro de Core Biotechnology Services por su ayuda con el procesamiento de tejidos y la seccionamiento de bloques de tejido FFPE y a Kees Straatman por su apoyo con el uso de Vectra Polaris. Esta investigación fue apoyada y financiada por el Consorcio Explant compuesto por cuatro socios: la Universidad de Leicester, la Unidad de Toxicología MRC, los Laboratorios de Descubrimiento Terapéutico de Cancer Research UK y LifeArc. El CRUK-NIHR Leicester Experimental Cancer Medicine Centre (C10604/A25151) proporcionó apoyo adicional. El financiamiento para GM, CD y NA fue proporcionado por el Programa Catalyst de Breast Cancer Now (2017NOVPCC1066), que cuenta con el apoyo de fondos de Pfizer.

Nada que revelar

Este artículo describe los métodos para la generación, el tratamiento farmacológico y el análisis de las PDE y destaca las ventajas de la plataforma como sistema modelo preclínico. El cultivo ex vivo de un tumor recién resecado, que no implica su deconstrucción, permite la retención de la arquitectura tumoral13,24 y, por lo tanto, las interacciones espaciales de los componentes celulares en la EMT, así como la heterogeneidad intratumoral. Este método demuestra có...

El desarrollo de agentes anticancerígenos eficaces y seguros requiere modelos preclínicos adecuados que también puedan proporcionar información sobre los mecanismos de acción que pueden facilitar la identificación de biomarcadores predictivos y farmacodinámicos. Se sabe que la heterogeneidad inter e intratumoral1,2,3,4,5 y la TME6, 7,8,9,10,11,12 influyen en las respuestas a los medicamentos contra el cáncer, y muchos modelos de cáncer preclínicos existentes, como líneas celulares, organoides y modelos de ratón, no pueden acomodar completamente estos modelos cruciales. Funciones. Un modelo "ideal" es aquel que puede recapitular las complejas interacciones espaciales de las células malignas con las no malignas dentro de los tumores, así como reflejar las diferencias regionales dentro de los tumores. Este artículo se centra en las PDE como una plataforma emergente que puede cumplir muchos de estos requisitos13.
El primer ejemplo del uso de PDE humanos, también conocidos como histocultivos, se remonta a finales de la década de 1980 cuando Hoffman et al. generaron rebanadas de tumores humanos recién resecados y los cultivaron en una matriz de colágeno14,15. Esto implicó el establecimiento de un sistema de cultivo 3D que preservó la arquitectura del tejido, asegurando el mantenimiento de los componentes del estroma y las interacciones celulares dentro de la EMT. Sin deconstruir el tumor original, Hoffman et al.16 anunciaron un nuevo enfoque de investigación traslacional, y desde entonces, muchos grupos han optimizado diferentes métodos de explante con el objetivo de preservar la integridad del tejido y generar datos precisos de respuesta al fármaco17,18,19,20,21,22,23,24 , aunque son evidentes algunas diferencias entre protocolos. Butler et al. cultivaron explantes en esponjas de gelatina para ayudar a la difusión de nutrientes y fármacos a través de los especímenes20,21,25,mientras que Majumder et al. crearon un ecosistema tumoral cultivando explantes sobre una matriz compuesta por proteínas tumorales y estromales en presencia de suero autólogo derivado del mismo paciente22, 23.
Más recientemente, nuestro grupo estableció un protocolo por el cual los explantes se generan por fragmentación de tumores en piezas de 2 a 3 mm de tamaño 3 queluegose colocan sin componentes adicionales en membranas permeables en la interfaz aire-líquido de un sistema de cultivo24. Tomados en conjunto, estos numerosos estudios han demostrado que los PDE permiten el cultivo de fragmentos intactos y vivos de tumores humanos que conservan la arquitectura espacial y la heterogeneidad regional de los tumores originales. En los experimentos originales, los explantes o histocultivos generalmente se sometieron a homogeneización después del tratamiento farmacológico, después de lo cual se aplicaron varios ensayos de viabilidad a las muestras homogeneizadas, como el ensayo de respuesta al fármaco de histocultivo20,21, el ensayo MTT (3-(6)-2,5-diphenyltetrazolium bromide), el ensayo de lactato deshidrogenasa o el ensayo basado en resazurina26,27,28 . Los avances recientes en las técnicas de análisis de endpoints, particularmente la patología digital, han ampliado el repertorio de pruebas y ensayos de endpoints que se pueden realizar en explantes29,30. Para aplicar estas nuevas tecnologías, en lugar de homogeneización, los explantes se fijan en formalina, se incrustan en parafina (FFPE) y luego se analizan mediante técnicas de inmunotinción, lo que permite el perfil espacial. Se han documentado ejemplos de este enfoque para el cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC), el cáncer de mama, el cáncer colorrectal y los explantes de mesotelioma mediante los cuales se utilizó tinción inmunohistoquímica para el marcador de proliferación, Ki67, y el marcador apoptótico, poli-ADP ribosa polimerasa escindida (cPARP), para monitorear los cambios en la proliferación celular y la muerte celular24,31,32,33,34.
La inmunofluorescencia multiplexada es particularmente susceptible de perfil espacial de las respuestas farmacológicas en explantes en el punto final35. Por ejemplo, es posible medir la relocalización y distribución espacial de clases específicas de células inmunes, como macrófagos o células T, dentro de la EMT tras el tratamiento farmacológico13,36,37,38,e investigar si un agente terapéutico puede favorecer la transición de "tumor frío" a "tumor caliente"39 . En los últimos años, este grupo se ha centrado en la derivación de PDE de diferentes tipos de tumores (NSCLC, cáncer renal, cáncer de mama, cáncer colorrectal, melanoma) y la prueba de una variedad de agentes anticancerígenos que incluyen quimioterapias, inhibidores de moléculas pequeñas e inhibidores del punto de control inmunitario (ICI). Los métodos de análisis de endpoints se han optimizado para incluir inmunofluorescencia multiplexada para permitir el perfil espacial de biomarcadores de viabilidad, así como biomarcadores para diferentes constituyentes de la EMT.

<table><tbody><tr><td><Ácido acético fuerte></</td><td>>Sigma</td> fuerte <td></td><td>320099 Reactivo de tinción</td></tr><tr><td><fuerte>Diluyente de anticuerpo / Bloque, 1x</fuerte></td><td>Perkin Elmer</td><td>ARD1001EA</td><td>Diluyente de anticuerpos/tampón de bloqueo</td></tr><tr><td><fuerte>Barnstead NANOpure Diamond</fuerte></td><td>Barnstead</td><td></td><td>Ultra Pure (UP) H2O máquina</td></tr><tr><td><fuerte> Ácido cítrico monohidrato</fuerte></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C7129</td><td>Reactivo para tampón de citrato</td></tr><tr><td><fuerte>Costar Placas de cultivo celular de pocillos múltiples</fuerte></td><td>Corning Incorporated</td><td>3516</td> 6 <td>placas multipocillos</td></tr><tr><td><fuerte>DAPI Dilactato</fuerte></td><td>Life Technologies</td><td>D3571</td><td></td></tr><tr><td><fuerte>100 x 17 mm Plato, Nunclon Delta</fuerte></td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>150350</td><td>Plato de 100 mm de diámetro para cultivo de tejidos</td></tr><tr><td><fuerte>DMEM (1x) Medio Eagle modificado de Dubelcco + 4,5 g/L de D-glucosa + 110 mg/ml de piruvato de sodio</fuerte></td><td>Gibco (Life Technologies)</td><td>10569-010</td><td>Medio de cultivo de tejidos (500 mL)</td></tr><tr><td><fuerte>Montaje DPX</fuerte></td><td>VWR</td><td>360294H</td><td>Montaje medio</td></tr><tr><td><fuerte>Montaje DPX</td><td>Merck</td><td>6522</td><td>Montaje < mediofuerte</td></tr><tr><td>>Ácido etilendiaminotetraacético (EDTA)</fuerte></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>3609</td><td>Reactivo para tampón</td></tr> <tr><td>TEEosina</td><td>CellPath</td><td>RBC-0100-00A</td><td>Reactivo de tinción</td></tr><tr><td><fuerte>Suero bovino fetal</fuerte></td><td>Gibco</td><td>10500-064</td><td>Para uso en cultivo de tejidos medio</td></tr><tr><td><fuerte>37% Formaldehído</fuerte></td><td>Fisher (Acros)</td><td>119690010</td><td>10% Formalina</td></tr><tr><td><fuerte>iGenix, horno de microondas IG2095</td><td>iGenix</td><td>IG2095</td><td>Microondas utilizado para la retreivación de antígenos</td></tr><tr><td><fuerte>alcohol metilado industrial (IMS)</fuerte></td><td>Genta Medical</td><td>199050</td><td>99% Alcohol desnaturalizado industrial (IDA)</td></tr><tr><td>InForm Software de análisis de imágenes avanzado</td><td>Akoya Biosciences</td><td>InForm</td><td></td></tr><tr><td>Leica ASP3000 Tissue Processor</td><td>Leica Biosystems</td><td></td><td>Automated Vacuum Tissue Processor</td></tr><tr><td>Leica Arcadia H y C</td><td>Leica Biosystems</td><td></td><td>Baño de cera incrustante</td></tr><tr><td>Leica RM2125RT</td><td>Leica Biosystems</td><td></td><td>Microtomo rotativo</td></tr><tr><td><fuerte>Leica ST4040 Tinción lineal</fuerte></td><td>Leica Biosystems</td><td></td><td>H& E stainer</td></tr><tr><td>Mayer's Haematoxylin</td><td>Sigma</td><td>GHS132-1L</td><td>Reactivo de tinción</td></tr><tr><td>Millicell Cell Cell Culture Inserts, 30 mm, PTFE hidrófilo, 0,4 y micro; m</td><td>Merck Milipore</td><td>PICMORG50</td><td>Inserto de cultivo organotípico en disco</td></tr><tr><td>Sistema de detección de polímeros Novolink</fuerte></td><td>Leica Biosystems</td><td>RE7150-K Kit de</td><td>tinción DAB</td></tr><tr><td><fuerte>OPAL 480</fuerte></td><td>Akoya Biosciences</td><td></td><td>FP1500001KT Fluoróforo con diluyente de dimetilsulfóxido (DMSO)</td></tr><tr><td><fuerte>OPAL 520</fuerte></td><td>Akoya Biosciences</td><td>FP1487001KT</td><td>Fluoróforo con diluyente de dimetilsulfóxido (DMSO<</td></tr><tr><td>fuerte>OPAL 570</fuerte></td><td>Akoya Biosciences</td><td>FP1488001KT</td><td>Fluoróforo con diluyente de dimetilsulfóxido (DMSO)</td></tr><tr><td><fuerte>OPAL 620</fuerte>Akoya</td> <td>Biosciences</td><td>FP1495001KT</td><td>Fluoróforo con diluyente de dimetilsulfóxido (DMSO)</td></tr><tr><td><fuerte>OPAL 650</fuerte> </td><td>Akoya Biosciences</td><td>FP1496001KT</td><td>Fluoróforo con diluyente de dimetilsulfóxido (DMSO<</td></tr><tr><td>fuerte>OPAL 690</fuerte></td><td>Akoya Biosciences</td><td>FP1497001KT</td><td>Fluoróforo con diluyente de dimetilsulfóxido (DMSO)</td></tr><tr><td><fuerte>OPAL 780 / OPAL Reactivo TSA-DIG</fuerte></td><td>Akoya Biosciences</td><td>FP1501001KT</td><td>Fluoróforo con diluyente de dimetilsulfóxido (DMSO) y reactivo TSA-DIG</td></tr><tr><td>Opal Polymer HRP Ms Plus Rb, 1x</td><td>Perkin Elmer</td><td>ARH1001EA</td> <<td>solución</td></tr> <tr><td>> penicilina/estreptomicina fuerte</fuerte></td><td>Fisher Scientific</td><td>11548876</td><td>Para uso en cultivo de tejidos medianamente</td></tr><tr><td>PhenoChart Whole Slide Contextual Viewer</td><td>Akoya Biosciences</td><td>PhenoChart</td><td>Viewer software para imágenes escaneadas</td></tr><tr><td>Phosphate Buffered Saline Tablets</td><td>Thermo Scientific Oxoid</td><td>BR0014G</td><td>PBS</td></tr><<tr><td>strong>1x Plus Amplification Diluyente</fuerte></td><td>Perkin Elmer</td><td>FP1498</td><td>Diluyente de fluoróforo</td></tr><tr><td>Prolong Diamond Antifade Mountant</td><td>Invitrogen</td><td>P36961</td><td>Montaje medio</td></tr><tr><td><fuerte>Portaobjetos Portaobjetos</td><td>Perkin Elmer</td><td></td><td>Para cargar portaobjetos en el Slide Carrier Hotel para escanearlos con Vectra Polaris</td></tr><tr><td>Sodium Chloride</td><td>Fisher Scientific</td><td>S/3160/63</td><td>10% Formalina</td></tr><tr><td><fuerte>Hidróxido de sodio pellets</td><td>Fisher Scientific</td><td>S/4920/53</td><td>Reactivo para citrato tampón</td></tr><tr><td>Tenatex Cera endurecida - Rosa (500 g)</td><td>KEMDENT</td><td>1-601 Superficie de</td><td>cera dental</td></tr><tr><td>Thermo Scientific&nbsp; Shandon Sequenza Slide Rack para centro de inmunotinción</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td>10098889 Soporte para portaobjetos y clips de portaobjetos</td></tr><tr><td>Thermo Scientific Shandon Plastic Coverplates</td><td>Fisher Scientific</td><td>11927774</td><td>Clips de portaobjetos</td></tr><tr><td>Tris(hidroximetil)aminometano (Tris)</fuerte></td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td>252859 Reactivo para tampón TE</td></tr><tr><td>VectaShield</td><td>Vecta Laboratories</td><td>H-1000-10</td><td>Montaje medio</td></tr><tr><td><fuerte>Vectra Polaris Slide Scanner</td><td>Perkin Elmer</td><td>Vectra Polaris</td><td>Slide scanner</td></tr><tr><td>Xylene</td><td>Genta Medical</td><td>XYL050</td><td>Agente desparafinante</td></tr></tbody></table>

explantes de tumores derivados de pacientes como una plataforma preclínica "viva" para predecir la resistencia a los medicamentos en pacientes

Patient-Derived Tumor Explants As a "Live" Preclinical Platform for Predicting Drug Resistance in Patients

La comprensión de la resistencia a los medicamentos y el desarrollo de nuevas estrategias para sensibilizar a los cánceres altamente resistentes dependen de la disponibilidad de modelos preclínicos adecuados que puedan predecir con precisión las respuestas de los pacientes. Una de las desventajas de los modelos preclínicos existentes es la incapacidad de preservar contextualmente el microambiente tumoral humano (EMT) y representar con precisión la heterogeneidad intratumoral, limitando así la traducción clínica de los datos. Por el contrario, al representar el cultivo de fragmentos vivos de tumores humanos, la plataforma de explante derivado del paciente (PDE) permite examinar las respuestas a los medicamentos en un contexto tridimensional (3D) que refleja las características patológicas y arquitectónicas de los tumores originales lo más cerca posible. Informes previos con PDE han documentado la capacidad de la plataforma para distinguir tumores quimiosensibles de los quimiorresistentes, y se ha demostrado que esta segregación es predictiva de las respuestas de los pacientes a las mismas quimioterapias. Simultáneamente, las PDE permiten la oportunidad de interrogar las características moleculares, genéticas e histológicas de los tumores que predicen las respuestas a los medicamentos, identificando así biomarcadores para la estratificación del paciente, así como nuevos enfoques intervencionistas para sensibilizar a los tumores resistentes. Este documento informa sobre la metodología PDE en detalle, desde la recolección de muestras de pacientes hasta el análisis de punto final. Proporciona una descripción detallada de la derivación de explantes y los métodos de cultivo, destacando las condiciones a medida para tumores particulares, cuando corresponda. Para el análisis de endpoints, hay un enfoque en la inmunofluorescencia multiplexada y las imágenes multiespectrales para el perfil espacial de biomarcadores clave dentro de las regiones tumorales y estromales. Al combinar estos métodos, es posible generar datos cuantitativos y cualitativos de respuesta a los medicamentos que pueden relacionarse con diversos parámetros clínicopatológicos y, por lo tanto, potencialmente utilizarse para la identificación de biomarcadores.

La imagen multiespectral de secciones histológicas teñidas con mIF permite la identificación y fenotipado de poblaciones celulares individuales y la identificación de componentes tumorales y estromales en el explante TME (Figura 2). La imagen multiespectral es particularmente útil para el análisis de tejidos con alta autofluorescencia intrínseca, como tejidos con un alto contenido de colágeno, ya que permite que la señal de autofluorescencia se desconecte de otras señales y se excluya del an...

Este artículo describe métodos para la generación, el tratamiento farmacológico y el análisis de explantes derivados del paciente para evaluar las respuestas a los medicamentos tumorales en un sistema modelo preclínico vivo, relevante para el paciente.

Explantes de tumores derivados de pacientes como una plataforma preclínica "viva" para predecir la resistencia a los medicamentos en pacientes

An understanding of drug resistance and the development of novel strategies to sensitize highly resistant cancers rely on the availability of suitable ...

Los explantes derivados del paciente son un método a corto plazo que proporciona datos de respuesta inmediata al fármaco que pueden predecir con precisión los resultados del paciente. Las plataformas de EP permiten examinar las respuestas a los fármacos en un contexto 3D que refleja las características patológicas y arquitectónicas de los tumores regionales lo más cerca posible. Los explantes tienen el potencial de ofrecer nuevos conocimientos sobre el metabolismo y el mecanismo de acción de un fármaco y facilitar la identificación de nuevos biomarcadores farmacodinámicos.Antes de comenzar el experimento, limpie todo el equipo quirúrgico con una solución de licores metilados al 70% industrial. Llene un plato de cultivo de 10 centímetros con 25 mililitros de medio fresco sobre hielo. Usando pinzas, transfiera la muestra a una superficie de cera dental Y use dos cuchillas de injerto de piel para cortar el tejido en fragmentos de aproximadamente dos a tres milímetros cúbicos.Transfiera los explantes a un plato de 10 centímetros y coloque de seis a nueve piezas del tejido en un tubo de un mililitro que contenga una solución de formalina no tamponada al 10% durante una incubación de 24 horas a temperatura ambiente. Llene el número deseado de pocillos de una placa de seis pocillos con 1,5 mililitros de medio fresco por pozo. Y coloque un plato organotípico de cultivo inserte en cada pozo para que flote sobre el medio.Coloque de seis a nueve explantes en cada disco de inserción y guárdelo durante una incubación de 16 horas en una incubadora de dióxido de carbono al 5% para permitir la recuperación. Al día siguiente, agregue medio fresco y droga a cada pocillo de un plato nuevo. Incluye un pozo para el control del vehículo.Cuando se hayan preparado todos los tratamientos farmacológicos, use pinzas para transferir un inserto a cada pozo de la nueva placa de seis pocillos para una incubación de 24 a 48 horas en la incubadora de dióxido de carbono. Después del tratamiento farmacológico, transfiera los discos a nuevas placas de seis pocillos que contengan 10% de formalina. Y agregue unas gotas de formalina al 10% en la parte superior de cada explante para garantizar una cobertura completa con el fijador durante 24 horas de incubación a temperatura ambiente.Al día siguiente, remoje un número apropiado de pequeñas esponjas histológicas en una solución metilada industrial al 70%. Y coloca las esponjas dentro de casetes histológicos. Cuando se hayan colocado todas las esponjas, transfiera todos los explantes de la misma condición de tratamiento farmacológico a una sola esponja con el lado tratado con el medicamento de cada explante en contacto con el disco insertado.Coloque otra esponja presomada encima de cada explante y cierre el cassette para asegurar los explantes en el cassette. Luego sumerja los casetes en una solución metilada industrial al 70% antes de continuar con el procesamiento histológico. Después del escaneo, realice un análisis de entrenamiento y cargue los escaneos que contienen los sellos para el entrenamiento en el software de análisis apropiado.En la vista de modo único, navegue por las imágenes y seleccione los escaneos a analizar y el escaneo con fluorescencia intrínseca. con la exploración de fluorescencia intrínseca en una sola vista, haga clic en el selector de autofluorescencia para dibujar un segmento en un área de tejido no teñido. Haga clic en editar marcadores y colores e introduzca los nombres de los marcadores en el cuadro asociado a cada fluoróforo.Haga clic en preparar imágenes para permitir que el software reste la intensidad de la fluorescencia intrínseca de todas las imágenes cargadas. Haga clic en el paso de tejido de segmento en la parte superior de la pantalla para abrir la ventana de entrenamiento de segmentación de tejido. En el panel Categorías de tejidos, introduzca el nombre de cada categoría de tejidos que se va a segmentar.Haga clic en dibujar para dibujar regiones alrededor de grupos de células en la categoría de tejido de interés. A continuación, cambie a la siguiente categoría de tejido y dibuje nuevas regiones. Cuando se hayan definido todas las regiones de entrenamiento, use el segmentador de tejidos de tren y espere a que se asiente la precisión del entrenamiento.Posiblemente a un valor cercano al 100%Click segmenta todo para segmentar los tejidos. Después de verificar la calidad de la segmentación del tejido, haga clic en segmentación celular y seleccione los compartimentos celulares para segmentar. Para configurar el componente nuclear, utilice el control deslizante de intensidad típico para ajustar el umbral utilizado para detectar los píxeles nucleares.Los comentarios en vivo son proporcionados por la ventana de vista previa. Para dividir los grupos de píxeles nucleares, en el panel de división de componentes nucleares, seleccione el botón que mejor describa la calidad de tinción de los núcleos y use la barra deslizante para ajustar la sensibilidad de división. A continuación, haga clic en segmentar todo para segmentar todas las imágenes.Cuando todas las imágenes se hayan segmentado, en el panel fenotipos, agregue la lista de fenotipos a detectar e ingrese el nombre de los fenotipos en el cuadro de texto correspondiente. Haga clic en editar fenotipos para seleccionar una celda en particular y seleccione el fenotipo correspondiente en el menú desplegable. Después de completar la selección para el entrenamiento, haga clic en el clasificador de trenes para evaluar el resultado de cada fenotipo.Continúe con el fenotipo todo, guarde el proyecto y haga clic en exportar. Seleccione la ficha análisis de lotes y cargue el proyecto en el algoritmo por lotes o en el cuadro de proyecto. Para exportar las imágenes y tablas, seleccione todas las casillas de las opciones de exportación, haga clic en agregar diapositivas y cargue todas las imágenes que contienen los sellos de los lotes preparados anteriormente.A continuación, haga clic en Ejecutar para iniciar el análisis por lotes de un sello y exporte los datos correspondientes cuando se haya adquirido. La imagen multiespectral del tejido explantado de NSCLC teñido para marcadores de viabilidad celular, permite la identificación y fenotipado de poblaciones celulares individuales, así como la identificación de componentes tumorales y estromales dentro del microambiente tumoral de explante. La segmentación tisular y celular de las manchas de marcadores de viabilidad celular de imágenes multiespectrales como se ha demostrado, se puede utilizar para cuantificar la muerte celular y la proliferación en explantes derivados de pacientes tratados con fármacos de interés.Por ejemplo, en este análisis, en muestras de tejido de tumores tratados con Nivolumab, se identificó un mayor número de células moribundas en comparación con las muestras tumorales tratadas con control. Además, como se ilustra, la capacidad de extraer información espacial de disecciones teñidas, permite el cálculo de distancias intercelulares. Los explantes también se pueden utilizar para perfiles espaciales extensos o citometría de masas, lo que permite perfilar cientos de biomarcadores simultáneamente a resolución subsidiaria al tiempo que se preserva la estructura 3D de la muestra.Los PD podrían predecir la eficacia de la inmunoterapia. Por ejemplo, podría ser posible distinguir los casos sensibles o resistentes a los inhibidores del punto de control inmunitario e investigar los mecanismos que sustentan esta distinción.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Cancer Research

Investigación del cáncer

En este caso, hemos establecido un método para la prueba de eficacia del fármaco con la pieza quirúrgica de los tumores cerebrales, llamado "método de explante del tumor". Con este método, podemos evaluar la eficacia del medicamento sin romper el microambiente de los tumores sólidos. Para validar la fiabilidad de este método, se describen los datos representativos de nuestra muestra de glioma tratadas con la actual primera línea del agente quimioterapéutico, la temozolomida.

Método para el desarrollo de nuevos fármacos contra el cáncer utilizando explantes tumorales de las piezas quirúrgicas

Establecido líneas celulares de cáncer y xenoinjertos han sido el pilar de la investigación del cáncer durante las últimas décadas. Sin embargo, la evidencia reciente sugiere que la respuesta terapéutica está fuertemente influenciado por el microambiente de las células tumorales. Por lo tanto, hemos desarrollado un análisis ex vivo de las muestras de tumor primario con fines de desarrollo de fármacos.

Ex Vivo respuesta al tratamiento de los tumores primarios y / o Asociados Metástasis de Preclínica y Desarrollo Clínico de Terapéutica

La utilización de los tumores derivados del paciente en un modelo preclínico subcutánea es una manera excelente para estudiar la eficacia de nuevas terapias, el descubrimiento de biomarcadores predictivos y vías resistentes a los fármacos. Este modelo, en el proceso de desarrollo de fármacos, es fundamental para determinar el destino de muchas nuevas terapias contra el cáncer antes de la investigación clínica.

Desarrollo y mantenimiento de un tumor del paciente preclínicos Derivado modelo de xenoinjerto para la Investigación de Novela Anti-Cancer Therapies

Para permitir la detección altamente sensible de lo cáncer colorrectal humano difundiendo células (CRC) colonizando los tejidos, aquí mostramos un protocolo para la transducción eficiente de partículas lentivirales proteína fluorescente verde (GFP) en células de organoides derivados de PDX CRC antes de su inyección en ratones receptores, con observación en el microscopio estéreo-fluorescencia.

Alta sensibilidad detección de micrometástasis de GFP Lentivirus-transduced organitas cultivados de un Tumor de Colon paciente derivado

Nos proporcionan un método para la generación, cultivo y análisis sistemático de rebanadas organotypic derivadas de tumores de pulmón murino. También se describe cómo optimizar el grosor de corte y cómo seleccionar las concentraciones de la droga para el tratamiento de rodajas de tumor.

Establecimiento y análisis de segmento de Tumor explantes como prerrequisito para la prueba de diagnóstico

Los modelos de xenoinjerto derivado del paciente (PDX) recapitulan más robustamente las características moleculares y biológicas del melanoma y son más predictivos de la respuesta terapéutica en comparación con los ensayos tradicionales basados en el cultivo de tejido plástico. Aquí describimos nuestro protocolo operativo estándar para el establecimiento de nuevos modelos PDX y la caracterización/experimentación de los modelos PDX existentes.

Un modelo de xenoinjerto derivado del paciente de melanoma

Aquí presentamos un protocolo para probar la eficacia de las terapias dirigidas seleccionadas en base a la composición genómica de un tumor. El protocolo describe la identificación y validación de reordenamientos estructurales del ADN, injerto de tumores de los pacientes en ratones y pruebas de respuestas a los fármacos correspondientes.

Pruebas de terapias dirigidas en cáncer mediante análisis de alteración estructural del ADN y xenoinjertos derivados del paciente

Introducimos un protocolo para medir la respuesta de fármacos en tiempo real en rebanadas de tejido tumoral orgatípico. La estrategia experimental descrita aquí proporciona una plataforma para llevar a cabo pantallas de fármacos de rendimiento medio-alto en rodajas de tejido derivadas de tumores clínicos o de ratón en condiciones ex vivo.

Medición de la respuesta de fármacos en tiempo real en rebanadas de tejido tumoral organotípico

Los modelos de xenoinjerto derivado del paciente (PDX) y los modelos de ratón genéticamente modificados trasplantables recapitulan fielmente la enfermedad humana y son modelos preferidos para la investigación básica y traslacional del cáncer de mama. Aquí, se describe un método para trasplantar ortotópicamente fragmentos de tumores de mama en la almohadilla de grasa mamaria para estudiar la biología del tumor y evaluar la respuesta al fármaco.

Trasplante ortotópico de tumores de mama como modelos preclínicos para el cáncer de mama

Un método se describe para crear organoids usando los xenografts paciente-derivados (PDX) para la investigación in vitro, dando por resultado pares hechos juego de modelos in vivo/ines vitro. Los tumores de PDX fueron cosechados/procesados en pedazos pequeños mecánicamente o enzimático, seguidos por el Clevers' método para crecer los organoids del tumor que fueron pasados, cryopreserved y caracterizados contra el PDX original.

Creación de pares de modelos in vivo/in vitro derivados de pacientes de PDX y organoides derivados de PDX para la investigación farmacológica del cáncer

Este protocolo describe una evaluación estandarizada de las sensibilidades de los medicamentos a los inhibidores de señalización dirigidos en modelos organoides derivados de pacientes con NSCLC.

Perfil de la sensibilidad a las terapias dirigidas en organoides derivados de pacientes con NSCLC con mutación de EGFR

Aprende a utilizar explantes derivados de pacientes como plataforma preclínica viva para evaluar respuestas a fármacos en tumores humanos. Este método preserva la arquitectura tridimensional y el microambiente tumoral, permitiendo predicciones precisas y descubrimiento de biomarcadores.

Explantes de tumores derivados de pacientes como una plataforma preclínica viva para predecir la resistencia a los medicamentos en pacientes (Video) | JoVE Journal

Explantes de tumores derivados de pacientes como una plataforma preclínica "viva" para predecir la resistencia a los medicamentos en pacientes

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