Un modelo simplificado para el trasplante heterotópico de válvulas cardíacas en roedores

El trasplante de válvula cardíaca se propone como un nuevo tipo de trasplante con el potencial de administrar válvulas cardíacas duraderas, capaces de crecimiento somático sin necesidad de anticoagulación. Esta técnica es práctica y más sencilla que los métodos anteriores para estudiar la inmunobiología del trasplante de válvula cardíaca. Después de anestesiar a la rata, use las tijeras de disección para incisar la piel desde la xifoidea hasta la muesca esternal.

Y realizar una esternectomía cortando las costillas de cada lado, laterales al esternón hasta lograr un acceso óptimo al corazón. Inyecte heparina en la aurícula izquierda. Después del sacrificio, extirpa el timo para mejorar la visualización de las grandes vasijas.

Luego retire el corazón en bloque con la aorta ascendente hasta el nivel de la arteria innominada. Después de colocar el corazón del donante en una placa de Petri estéril inmediatamente después de la cardiectomía, en un tampón de almacenamiento en frío helado, use las pinzas y las tijeras Vannas Spring para diseccionar el corazón hasta que solo quede la raíz aórtica con un manguito ventricular de un milímetro proximal a la válvula aórtica. Para abrir la válvula aórtica, haga un corte longitudinal para abrir el seno de Valsalva entre los senos izquierdo y no coronario para visualizar las tres valvas.

Para extirpar cada valva de la válvula aórtica individualmente, use los fórceps contundentes para agarrar el borde del folíolo y use las tijeras vannas Spring para extirpar el prospecto cortando desde una comisura hasta el anillo y luego hacia la siguiente comisura. Guarde los prospectos extirpados en una solución tampón de almacenamiento en frío hasta que estén listos para ser implantados en la rata receptora, pero implante todos los prospectos dentro de las cuatro horas posteriores al almacenamiento en frío. Una vez que la rata receptora esté completamente anestesiada, mantenga la temperatura corporal a 36 a 38 grados centígrados durante toda la cirugía con la almohadilla térmica.

A continuación, coloque a la rata en una posición recostada lateral derecha para acceder al riñón izquierdo. Administrar buprenorfina a la rata receptora por vía subcutánea antes de la cirugía. Y use las tijeras para incisar la piel sobre el flanco longitudinalmente durante una pulgada.

Del mismo modo, incise la pared abdominal subyacente. Usando el pulgar y el índice, aplique una ligera presión dorsal y ventralmente mientras usa las pinzas curvas. Levante el polo caudal del riñón a través de la incisión abdominal y cutánea.

Exteriorice el extremo craneal del riñón de manera similar. Alternativamente, el riñón puede exteriorizarse agarrando la grasa perirrenal y tirando hacia arriba con ligera tensión. Una vez exteriorizado, mantenga el riñón húmedo con un hisopo salino tibio sobre el riñón.

Para crear una bolsa subcapsular, comience aplicando una ligera presión a la cápsula renal utilizando un conjunto de fórceps contundentes para que la cápsula renal pueda distinguirse claramente del parénquima subyacente. Simultáneamente usando otro juego de pinzas romas, agarre cuidadosamente la cápsula y tire suavemente hacia arriba para crear un agujero en la cápsula. Con fórceps contundentes, extienda la incisión hasta que se haya creado un espacio de aproximadamente dos milímetros para acomodar la valva de la válvula aórtica.

Desarrolle una bolsa subcapsular poco profunda que sea ligeramente más grande que la valva de la válvula mientras levanta el borde de la incisión con un juego de fórceps y avanza una sonda roma debajo de la cápsula renal. Iniciar el trasplante de la válvula aórtica recuperada levantando la cápsula fibrosa de borde haciendo avanzar la valva aórtica hacia la bolsa subcapsular con fórceps contundentes. La incisión y la cápsula renal se pueden dejar abiertas.

Empuje el riñón suavemente hacia atrás en su posición anatómica mediante contratracción aplicada a los bordes de la incisión. Cierre la incisión abdominal con una sutura quirúrgica estéril y cierre la piel con grapas. Después de la operación, coloque a la rata en una jaula limpia en una almohadilla térmica con acceso a alimentos y agua.

Si es necesario, administre buprenorfina a la rata receptora cada seis a doce horas para aliviar el dolor. Monitoree al animal diariamente para evaluar la cicatrización rutinaria de heridas y los signos de dolor o angustia. Y retire las grapas después de siete a diez días de la cirugía.

Una imagen representativa muestra la posición de la valva de la válvula aórtica debajo de la cápsula renal para la implementación. Y después de tres, siete y veintiocho días dentro de la rata receptora, localizar y recuperar el tejido trasplantado se volvió fácil. Las valvas de la válvula aórtica conservaron su arquitectura nativa después del trasplante heterotópico en animales singénicos.

Demostrando la utilidad de este modelo como línea de base para comparar la respuesta inmune en trasplantes alergénicos. La histología con tinción de hematoxilina y eosina reveló que las valvas valvulares en los trasplantes singénicos después de siete días estaban estructuralmente intactas sin signos de hinchazón edematosa. La integridad estructural de la valva valvular después del trasplante fue confirmada por Inmunohistoquímica para la actina del músculo liso y CD31.

Las valvas de la válvula aórtica son muy delicadas. Es importante manipularlos con mucho cuidado sin dañar las válvulas. El trasplante de válvula cardíaca subcapsular renal simplifica el trasplante heterotópico de válvula cardíaca.

Esto permitirá a los investigadores con capacidades microquirúrgicas limitadas explorar la inmunobiología del trasplante de válvulas cardíacas.