Un ensayo de fluorescencia de calcio de "doble adición" para el cribado de alto rendimiento de receptores acoplados a proteínas G recombinantes

El ensayo de doble adición de fluorescencia de calcio de alto rendimiento permite la identificación de nuevos ligandos de moléculas pequeñas de un receptor acoplado a proteína G que envía señales a través de la cascada de calcio intracelular. La principal ventaja del ensayo de doble adición es la detección de HTS agonista y antagonista en un solo ensayo con las mismas células, siempre que la señal de fluorescencia dure dos minutos. Este método se puede aplicar a cualquier GPCR que señale a través de la cascada de calcio, que incluye la mayor parte de la familia de péptidos de neuronas artrópodos, un GPCR.

Para la reproducibilidad del ensayo, es importante optimizar la densidad celular, la velocidad de inyección y la concentración del agonista conocido para la segunda edición. Demostrando el procedimiento estará Bianca Henriques-Santos, investigadora postdoctoral asociada en mi laboratorio. Comience el ensayo de fluorescencia de calcio retirando el medio gastado del matraz T-75 que contiene 70 a 90% de tres células BMLK confluentes.