Name: Establecimiento del modelo de síndrome de cordón central en ratón C57BL/6J (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-09-08T12:40:00.000+00:00
Duration: 6 min 36 s
Description: Aprende a establecer un modelo de síndrome de cordón central en ratón C57BL/6J mediante compresión quirúrgica en T2. Este protocolo mejora la reproducibilidad y minimiza el daño operativo para investigar mecanismos de lesión medular.

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Este estudio contó con el apoyo del Proyecto Nacional Clave de Investigación y Desarrollo de Investigación de Células Madre y Transformación (2019YFA0112100) y el Programa Estatal Clave de Ciencias Naturales Nacionales de China (81930070).

Los experimentos fueron aprobados por el Comité de Ética y Bienestar de los Animales de Laboratorio de la Facultad de Medicina Cheeloo de la Universidad de Shandong (número de aprobación: 22021). Se realizaron de acuerdo con la Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio publicada por los Institutos Nacionales de Salud (NIH Publications No. 85-23, revisada en 1996). Todos los ratones utilizados en este estudio fueron ratones hembra C57BL/6J de 9-10 semanas de edad comprados a Jinan Pengyue Experimental Animal Company (Jinan, China). Un total de 9 ratones que participaron en este estudio fueron igualmente aleatorizados a los grupos de control, leve y grave. A los 7, 28 y 70 días después de la lesión, se sacrificó un ratón de cada grupo.
1. Laminectomía C6 y exposición de la médula espinal
NOTA: La exposición se realizó bajo un microscopio. La hemorragia puede evitarse prestando atención a dos aspectos: (i) Se deben evitar todos los vasos sanguíneos. (ii) Los músculos deben separarse en los puntos de origen y terminación del músculo.
<ol><li>Preparar instrumental quirúrgico y SCICP. NOTA: La estructura del SCICP ha sido reportada en estudios previos11. La diferencia con respecto al estudio previo es que el presente protocolo logra la lesión medular por compresión. Dos pesos diferentes (10,4 g y 20,8 g) de esta plataforma pueden producir una compresión de 5 g/mm2 y 10 g/mm2, respectivamente (Figura 1). Los pasos de exposición y compresión de la médula espinal se muestran en la Figura 2.</li>
	<li>Administrar isoflurano al ratón por inhalación utilizando un cono nasal (inducción: 3%-5%, mantenimiento: 1,5%-2%).</li>
	<li>Después de que la anestesia haga efecto, explore una pequeña protuberancia en la línea media detrás del cuello de los ratones, que es la apófisis espinosa de la segunda vértebra torácica (T2).</li>
	<li>Afeita el vello alrededor de este bulto. Desinfecte la piel con tres aplicaciones alternas de una solución de yodóforo seguida de antisépticos cutáneos al 75% de etanol.</li>
	<li>Coloque el ratón boca abajo en la mesa de operaciones. Aplique ungüento para los ojos para proteger los ojos.</li>
	<li>Coloque una almohadilla de 3-4 mm de grosor debajo del pecho para permitir una curva arqueada de la columna cervical, lo que facilita la exposición del espacio interlamina y una vía aérea sin obstrucciones durante la operación. Inyectar buprenorfina como analgesia preoperatoria (0,05-0,1 mg/kg, SQ).</li>
	<li>Realizar una incisión longitudinal de 1-1,5 cm con un bisturí estéril centrado en la2ª apófisis espinosa de la vértebra torácica para exponer la capa fascial (Figura 2A).</li>
	<li>Retire una porción del tejido adiposo por encima de T2 con microtijeras estériles para encontrar el proceso espinoso T2.</li>
	<li>Separe los músculos trapecios bilaterales y romboides de C5-T2 a lo largo de la línea media con microtijeras (Figura 2B).</li>
	<li>Separe los músculos de la lámina de las vértebras C5-T2 con microtijeras y retraiga la capa muscular hacia los lados con microrretractores estériles (Figura 2C).</li>
	<li>Corta los multífidos y los músculos de la columna cervical en la superficie de las vértebras.</li>
	<li>Localice T2 de acuerdo con el punto más alto de las apófisis espinosas. Sondea las apófisis espinosas sucesivamente hacia el extremo rostral desde T2 para localizar C6 (Figura 3).</li>
	<li>Levante la lámina C6 con fórceps, corte la lámina y la médula espinal quedará expuesta (Figura 2D).</li>
</ol>2. Lesión por compresión de la médula espinal cervical
<ol><li>Sujete las articulaciones facetarias C6-7 con el estabilizador vertebral y bloquéelo (Figura 2E).</li>
	<li>Apunte la punta de la pesa estéril a la médula espinal expuesta y asegúrese de que la parte inferior plana de la punta esté colocada paralela a la superficie dorsal de la médula espinal (Figura 2F).</li>
	<li>Ajuste la manga para que el peso comprima la médula espinal. Deje de ajustar cuando el peso mantenga una posición relativa constante con la médula espinal (Figura 2G). NOTA: No haga que este proceso sea demasiado violento o rápido en caso de que el peso ejerza una fuerza de contusión sobre la médula espinal.</li>
	<li>Retire el peso y el estabilizador vertebral después de una compresión de 5 minutos.</li>
	<li>Observar las alteraciones de color de la médula espinal después de la compresión bajo el microscopio (Figura 2H).</li>
	<li>Enjuague con PBS estéril y use succión para limpiar el sitio de operación.</li>
	<li>Suturar los músculos y la piel en capas con sutura de polipropileno no absorbible (tamaño: 6-0).</li>
	<li>Desinfecte el área quirúrgica, coloque el mouse sobre una almohadilla tibia hasta que el mouse recupere la conciencia completa y luego regrese el mouse a la jaula del mouse.</li>
	<li>Inyectar buprenorfina para analgesia (0,05-0,1 mg/kg, SQ) cada 8-12 h durante 3 días.</li>
</ol>3. Análisis histológico
<ol><li>Anestesiar al ratón mediante inyección intraperitoneal de tribromoetanol al 1,25% (0,02 ml/g de peso corporal) los días 7, 28 o 70 después de la lesión. Infundir por vía transcardíaca al ratón 60 ml de solución salina tamponada con fosfato (PBS) y 20 ml de paraformaldehído al 4%11.</li>
	<li>Seccionar la médula espinal a 0,5 cm del centro de la lesión desde ambos lados con microtijeras y conservar la sección de 1 cm de largo.</li>
	<li>Sumergir la sección de la médula espinal preservada en sacarosa al 30% a 4 °C durante 48 h.</li>
	<li>Incruste los tejidos con OCT, corte los tejidos en secciones de 6 μm de grosor con un criotomo y recoja las secciones en un portaobjetos de vidrio.</li>
	<li>Tinción de hematoxilina y eosina<ol><li>Enjuague las secciones de 6 μm con 1x PBS durante 5 minutos 3 veces para eliminar la OCT residual.</li>
		<li>Sumergir las secciones en hematoxilina durante 90 s. Lave las secciones con agua corriente durante 3 min.</li>
		<li>Sumerge las secciones en eosina durante 4 min. Remojar en alcohol al 95% durante 30 s para eliminar el exceso de eosina.</li>
		<li>Por último, deshidratar los portaobjetos con alcohol (95% de alcohol y 100% de alcohol dos veces, sucesivamente) durante 30 s y poner los portaobjetos en un baño de xileno para su limpieza durante 2 min. A continuación, sella las secciones con un cubreobjetos y gel de resina.</li>
	</ol></li>
	<li>Tinción de azul de Prusia<ol><li>Sumerja los portaobjetos durante 20 minutos en una mezcla igual de ferrocianuro de potasio (10%) y ácido clorhídrico (10%).</li>
		<li>Enjuague 3 veces con agua destilada y vuelva a teñir durante 5 minutos con Nuclear Fast Red.</li>
		<li>Enjuague tres veces con agua destilada, seguido de un enjuague con alcohol al 95% y dos enjuagues con alcohol al 100% durante 5 min.</li>
		<li>Limpie las secciones en xileno dos veces durante 3 minutos cada una y luego selle con gel de resina12.</li>
	</ol></li>
	<li>Tinción por inmunofluorescencia<ol><li>Incubar los portaobjetos con los siguientes anticuerpos primarios durante 1 h a 37 °C: molécula adaptadora de unión al calcio antiionizada de conejo 1 (Iba-1) (1:500), que se reguló al alza en la microglía después de una lesión nerviosa; proteína ácida fibrilar antiglial (GFAP) de ratón (1:300), que se expresa en los astrocitos del sistema nervioso central; anti-neurofilamento-200 de conejo (NF-200) (1:2000), que se expresa en neurofilamento.</li>
		<li>Incubar con anticuerpos secundarios durante 1 h a temperatura ambiente (RT): Alexa Fluor488 cabra anti-ratón y Alexa Fluor594 cabra anti-conejo (1:1.000).</li>
		<li>Tome fotografías y analice más a fondo con un microscopio de fluorescencia13.</li>
	</ol></li>
</ol>4. Resonancia magnética
<ol><li>Anestesiar al ratón a los 7 días después de la lesión con anestesia de isoflurano (1%-2% de isoflurano, 20%-30% deO2) administrada a través de una mini máscara.</li>
	<li>Escanear la médula espinal cervical en orientación sagital. Utilice los siguientes ajustes para la obtención de imágenes de RMN: secuencia de espín-eco (SE) en forma multicorte e intercalada con TR/TE = 2500/12 ms, matriz de adquisición = matriz de 256 x 128 sobre el campo de visión (FOV) = 12 x 8 mm2, grosor de corte = 1 mm y número de excitaciones (NEX) = 2. NOTA: Mantenga la frecuencia respiratoria del ratón entre 10 y 15 por minuto durante la exploración para eliminar los artefactos de imagen relacionados con la respiración14.</li>
</ol>

<ol><li>Liu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival+in+222+Patients+With+Severe+CSCI%3A+An+8-Year+Epidemiologic+Survey+in+Western+China%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Physical+Medicine+and+Rehabilitation%22%5BJournal%5D)">Survival in 222 Patients With Severe CSCI: An 8-Year Epidemiologic Survey in Western China.</a> Archives of Physical Medicine and Rehabilitation. 100 (10), 1872-1880 (2019).</li>
<li>Qi, C., Xia, H., Miao, D., Wang, X., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+timing+of+surgery+in+the+outcome+of+spinal+cord+injury+without+radiographic+abnormality+%28SCIWORA%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Orthopaedic+Surgery+and+Research%22%5BJournal%5D)">The influence of timing of surgery in the outcome of spinal cord injury without radiographic abnormality (SCIWORA).</a> Journal of Orthopaedic Surgery and Research. 15 (1), 223(2020).</li>
<li>Brooks, N. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+cord+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery+Clinics+of+North+America%22%5BJournal%5D)">Central cord syndrome.</a> Neurosurgery Clinics of North America. 28 (1), 41-47 (2017).</li>
<li>Avila, M. J., Hurlbert, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+cord+syndrome+redefined%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery+Clinics+of+North+America%22%5BJournal%5D)">Central cord syndrome redefined.</a> Neurosurgery Clinics of North America. 32 (3), 353-363 (2021).</li>
<li>Forgione, N., Chamankhah, M., Fehlings, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+bilateral+cervical+contusion-compression+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">A mouse model of bilateral cervical contusion-compression spinal cord injury.</a> Journal of Neurotrauma. 34 (6), 1227-1239 (2017).</li>
<li>López-Dolado, E., Lucas-Osma, A. M., Collazos-Castro, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+motor+compensations+with+permanent%2C+focal+loss+of+forelimb+force+after+cervical+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Dynamic motor compensations with permanent, focal loss of forelimb force after cervical spinal cord injury.</a> Journal of Neurotrauma. 30 (3), 191-210 (2013).</li>
<li>Allen, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phrenic+motor+neuron+survival+below+cervical+spinal+cord+hemisection%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">Phrenic motor neuron survival below cervical spinal cord hemisection.</a> Experimental Neurology. 346, 113832(2021).</li>
<li>Reinhardt, D. R., Stehlik, K. E., Satkunendrarajah, K., Kroner, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bilateral+cervical+contusion+spinal+cord+injury%3A+A+mouse+model+to+evaluate+sensorimotor+function%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">Bilateral cervical contusion spinal cord injury: A mouse model to evaluate sensorimotor function.</a> Experimental Neurology. 331, 113381(2020).</li>
<li>Ropper, A. E., Ropper, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+spinal+cord+compression%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Acute spinal cord compression.</a> The New England Journal of Medicine. 376 (14), 1358-1369 (2017).</li>
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<li>Elzat, E. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishing+a+mouse+contusion+spinal+cord+injury+model+based+on+a+minimally+invasive+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Establishing a mouse contusion spinal cord injury model based on a minimally invasive technique.</a> Journal of Visualized Experiments. (187), 64538(2022).</li>
<li>Lu, J., Xu, F., Lu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LncRNA+PVT1+regulates+ferroptosis+through+miR-214-mediated+TFR1+and+p53%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sciences%22%5BJournal%5D)">LncRNA PVT1 regulates ferroptosis through miR-214-mediated TFR1 and p53.</a> Life Sciences. 260, 118305(2020).</li>
<li>Zeng, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lentivirus-mediated+downregulation+of+%CE%B1-synuclein+reduces+neuroinflammation+and+promotes+functional+recovery+in+rats+with+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Lentivirus-mediated downregulation of α-synuclein reduces neuroinflammation and promotes functional recovery in rats with spinal cord injury.</a> Journal of Neuroinflammation. 16 (1), 283(2019).</li>
<li>Bilgen, M., Al-Hafez, B., Berman, N. E., Festoff, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+resonance+imaging+of+mouse+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22Magnetic+Resonance+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">Magnetic resonance imaging of mouse spinal cord.</a> Magnetic Resonance in Medicine. 54 (5), 1226-1231 (2005).</li>
<li>Yilihamu, E. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+mouse+model+of+central+cord+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Regeneration+Research%22%5BJournal%5D)">A novel mouse model of central cord syndrome.</a> Neural Regeneration Research. 18 (12), 2751-2756 (2023).</li>
<li>Chikuda, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+early+vs+delayed+surgical+treatment+on+motor+recovery+in+incomplete+cervical+spinal+cord+injury+with+preexisting+cervical+stenosis%3A+A+randomized+clinical+trial%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA+Network+Open%22%5BJournal%5D)">Effect of early vs delayed surgical treatment on motor recovery in incomplete cervical spinal cord injury with preexisting cervical stenosis: A randomized clinical trial.</a> JAMA Network Open. 4 (11), e2133604(2021).</li>
<li>Jimenez, O., Marcillo, A., Levi, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+histopathological+analysis+of+the+human+cervical+spinal+cord+in+patients+with+acute+traumatic+central+cord+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Spinal+Cord%22%5BJournal%5D)">A histopathological analysis of the human cervical spinal cord in patients with acute traumatic central cord syndrome.</a> Spinal Cord. 38 (9), 532-537 (2000).</li>
<li>Menezes, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+mesenchymal+stromal%2Fstem+cells+recruit+resident+pericytes+and+induce+blood+vessels+maturation+to+repair+experimental+spinal+cord+injury+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Human mesenchymal stromal/stem cells recruit resident pericytes and induce blood vessels maturation to repair experimental spinal cord injury in rats.</a> Scientific Reports. 10 (1), 19604(2020).</li>
<li>Hutson, T. H., Di Giovanni, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+translational+landscape+in+spinal+cord+injury%3A+focus+on+neuroplasticity+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Neurology%22%5BJournal%5D)">The translational landscape in spinal cord injury: focus on neuroplasticity and regeneration.</a> Nature Reviews. Neurology. 15 (12), 732-745 (2019).</li>
<li>El-Bohy, A. A., Schrimsher, G. W., Reier, P. J., Goshgarian, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+assessment+of+respiratory+function+following+contusion+injury+of+the+cervical+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">Quantitative assessment of respiratory function following contusion injury of the cervical spinal cord.</a> Experimental Neurology. 150 (1), 143-152 (1998).</li>
<li>El-Bohy, A. A., Goshgarian, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+single+phrenic+axon+recordings+to+assess+diaphragm+recovery+after+cervical+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">The use of single phrenic axon recordings to assess diaphragm recovery after cervical spinal cord injury.</a> Experimental Neurology. 156 (1), 172-179 (1999).</li>
<li>Gonzalez-Rothi, E. J., Lee, K. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intermittent+hypoxia+and+respiratory+recovery+in+preclinical+rodent+models+of+incomplete+cervical+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">Intermittent hypoxia and respiratory recovery in preclinical rodent models of incomplete cervical spinal cord injury.</a> Experimental Neurology. 342, 113751(2021).</li>
<li>Locke, K. C., Randelman, M. L., Hoh, D. J., Zholudeva, L. V., Lane, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Respiratory+plasticity+following+spinal+cord+injury%3A+perspectives+from+mouse+to+man%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Regeneration+Research%22%5BJournal%5D)">Respiratory plasticity following spinal cord injury: perspectives from mouse to man.</a> Neural Regeneration Research. 17 (10), 2141-2148 (2022).</li>
<li>Forgione, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bilateral+contusion-compression+model+of+incomplete+traumatic+cervical+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Bilateral contusion-compression model of incomplete traumatic cervical spinal cord injury.</a> Journal of Neurotrauma. 31 (21), 1776-1788 (2014).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

De los numerosos tipos de lesión medular, la CCS es uno de los tipos de lesión potencialmente más tratables 3,4. Debido a la falta de modelos de investigación de laboratorio, las investigaciones sobre CCS de la década de 1950 se centraron en estudios clínicos e investigaciones de disección cadavérica 3,16,17. El presente estudio muestra el uso de herramientas compatibles y procedimientos mínimamente invasivos para establecer el modelo CCS de ratones. Desde el punto de vista técnico, esta plataforma tiene una gran operatividad y una buena reproducibilidad. Dado que los resultados del experimento demuestran la validez, nuestra técnica para establecer el modelo más cercano al estándar que estudios previos han definido para CCS4.
Los estudios previos de lesión por compresión han empleado principalmente clips de aneurisma, balones y pinzas calibradas 9,10,18. Además, la mayoría de las lesiones ocurrieron a nivel de la médula espinal torácica18. La médula espinal a nivel de C6 fue elegida como segmento lesionado en este estudio para investigar las características del CCS. Vale la pena prestar atención a que la tasa de supervivencia del modelo CCS también es un factor esencial para garantizar la consistencia experimental. El presente estudio informa que causa lesiones por compresión bilateral en la médula espinal cervical del ratón, mientras que las lesiones traumáticas de la médula espinal de alto nivel, especialmente las lesiones bilaterales, podrían ser fatales para los animales de experimentación si son demasiado graves. Según El-Bohy, es más probable que la médula espinal C4/5 afecte el tracto bulboespinal descendente y las motoneuronas relacionadas con la respiración, lo que lleva a los animales de experimento a la depresión respiratoria y a la muerte 18,19,20,21,22,23., En este estudio, los ratones con diferentes grados de compresión en la médula espinal cervical C6 tienen características de lesión significativamente diferenciadas sugeridas por pruebas histológicas. A pesar de que hubo diferencias significativas de comportamiento e histológicas en el modelo de pinzamiento de la médula espinal cervical de ratón reportado por Forgione, se requirió la interrupción de los pedículos, los procesos articulares, las láminas e incluso las raíces nerviosas para pinzar la médula espinal con las pinzas modificadas, lo que tuvo una influencia significativa en la estabilidad de las estructuras cervicales24. Otro estudio de lesiones cervicales relató el uso de la apófisis transversa como sitio de fijación5. A pesar de que se evitó que se dañaran los procesos articulares, la descomposición excesiva del tejido muscular también podría tener un impacto en la estabilidad de la médula espinal. En el presente estudio, solo se resecó la6ª lámina cervical para mantener la estabilidad de la médula espinal cervical, preservando las articulaciones adyacentes y evitando el daño muscular excesivo. Al mismo tiempo, la compresión desde arriba de la médula espinal evita el daño a las raíces nerviosas.
Los resultados de la EH sugieren que el área de daño a la médula espinal cervical de los ratones de cada grupo fue principalmente en la sustancia gris cerca de la médula central, que caracterizó a la CCS, con diferencias significativas en el alcance de la lesión entre los diferentes grupos. En particular, las secciones patológicas que mostramos pueden haber aliviado la manifestación de la lesión porque las muestras se recolectaron unos días después de la lesión. La inmunofluorescencia (NF-200) mostró menos daño a los tractos neurales en la región de la sustancia blanca de la médula espinal, lo que también confirmó que el daño en CCS se concentraba principalmente alrededor de la médula central. El resultado de la inmunofluorescencia se vio agravado por los resultados histológicos previos de la patología. Estudios previos han demostrado que el CCS conduce a un edema cerca de la médula central, lo que conduce a un hematoma y, en última instancia, a una disfunción en la porción medial del tracto corticoespinal lateral3. La hemorragia ha sido reportada como un componente típico del CCS, pero rara vez se observa en estudios de imagen y autopsia posteriores17. En este estudio, los resultados de la EH a los 7 días después de la lesión sugirieron signos de edema tisular en todos los grupos; sin embargo, no se encontraron glóbulos rojos residuales en el área de la lesión. Por lo tanto, se utilizó azul de Prusia para examinar el área de la lesión en busca de hemorragia, y los resultados se correspondieron con la hemosiderosis observada en el área de la lesión del grupo de lesión grave a los 7 días después de la lesión, mientras que el grupo leve no lo hizo. Las imágenes de RM T2 mostraron que tanto las lesiones leves como las graves tenían áreas de señal baja en el área dañada de la lesión a los 7 días después de la lesión. indicando aquí la deposición de lisado de reticulocitos. Estos resultados proporcionan evidencia circunstancial de que la discrepancia entre los hallazgos previamente reportados probablemente se deba a que la prueba de RM es potencialmente más sensible que la prueba histológica14, además de la gravedad de la lesión, lo que también puede influir en la cantidad de hemorragia en el área de la lesión. La GFAP también se expresó ampliamente en la zona dañada. Al mismo tiempo, también se observó expresión de Iba-1 en áreas intactas, lo que sugiere la persistencia de una respuesta inflamatoria, consistente con los resultados de la resonancia magnética, donde un anillo de señal hiperintensa alrededor del área de señal hipointensa en la lesión sugiere la presencia de una respuesta inflamatoria. Finalmente, con base en los resultados del presente estudio, el área de lesión en el modelo se centró en la sustancia gris alrededor del cordón central, lo que en general es consistente con las descripciones reportadas anteriormente13. Desafortunadamente, no realizamos resonancias magnéticas de forma repetitiva en todos los animales de experimentación para mostrar cómo el sitio de la lesión cambia dinámicamente con el tiempo. Los futuros investigadores pueden incluir esto en su trabajo para una mejor investigación sobre la CAC. Además, se puede incluir en el estudio el inmunomarcaje con marcadores neuronales como NeuN, que definen la materia gris.
En conclusión, las características de los hallazgos sobre patología y resonancia magnética tienen grandes similitudes con las descritas para la CCS en estudios previos4. El presente protocolo que modela de forma factible la CCS permite una mayor investigación y comprensión de la CCS.

En los últimos años se ha observado un aumento constante de la incidencia de lesiones medulares (LME), con más lesiones en personas mayores por tauma1 menos violentas. Estas lesiones afectan con mayor frecuencia a la columna cervical y con mayor frecuencia conducen a una disfunción neurológica incompleta2.
En el siglo XXI, la CCS es el tipo más prevalente de LME incompleta, representando más de la mitad de todas las LME. En comparación con la LME incompleta convencional, la CCS se caracteriza por un deterioro desproporcionadamente mayor de las extremidades superiores que de las inferiores3. Se caracteriza por una debilidad predominante de las extremidades superiores con disfunción sensorial y vesical menos significativa. Se cree que el CCS es causado por una hemorragia y edema postraumáticos de la región central o, como se propuso recientemente, por la degeneración walleriana por compresión de la médula espinal en la estenosis del canal espinal. El manejo del CCS carece de evidencia de alto nivel para orientar, lo que requiere una comprensión integral de su fisiopatología4. Sin embargo, no se han reportado modelos de CCS. Los modelos animales adecuados son esenciales para la comprensión de la fisiopatología, lo que puede proporcionar una base de investigación para estudios clínicos y preclínicos 5,6,7,8,9,10.
En este estudio, se establece un modelo de CCS en ratones con una plataforma coaxial de lesión medular (SCICP) y un plan de operación mínimamente invasivo, lo que permite una mayor investigación y comprensión de la CCS. La validez del modelo se ha demostrado en el curso del proceso de investigación mediante análisis histológico, de resonancia magnética (RM) y de inmunofluorescencia.

<table><tbody><tr><td>Solución fijadora al 4%</td><td>Solarbio</td><td>P1110</td><td>4%</td></tr><tr><td>Anticuerpo polipeptídico pesado anti-neurofilamento</td><td>Abcam</td><td>ab8135</td><td>Relación de dilución (1:2000)</td></tr><tr><td>Solución de tinción de eosina (soluble en agua)</td><td>Biosharp</td><td>BL727B</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Fuyu Reactivo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscopio fluorescente</td><td>KEYENCE</td><td>BZ-X800</td><td></td></tr><tr><td>Cortadora congelada</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GFAP (GA5) Ratón mAb&nbsp;</td><td>Señalización celular TECNOLOGÍA#</td><td>3670</td><td>Relación de dilución (1:600)</td></tr><tr><td>IgG anti-ratón de cabra (H+L) Anticuerpo secundario altamente adsorbido cruzado, Alexa Fluor Plus 488</td><td>ThermoFisher SCIENTIFIC</td><td>A32723TR</td><td>Relación de dilución (1:1000)</td></tr><tr><td>IgG anti-conejo de cabra (H+L) Anticuerpo secundario altamente adsorbido cruzado, Alexa Fluor Plus 594</td><td>ThermoFisher SCIENTIFIC</td><td>A32740</td><td>Relación de dilución (1:1000)</td></tr><tr><td>Hematoxilina Solución de tinción</td><td>Biosharp</td><td>BL702A Ratones</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Jinan Pengyue Animal ExperimentalCompany&nbsp;</td><td>C57BL/6J&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Aparatos de microcirugía&nbsp;</td><td>Shandong ULT Biotechnology Co., Ltd</td><td>Todos los instrumentos de cirugía son</td><td>tijeras oftálmicas hechas a medida, micro pinzas para mosquitos, pinzas de microcirugía, micro tijeras</td></tr><tr><td>Suero de oveja normal para bloquear (solución de trabajo)</td><td>Zhong Shan Jin Qiao</td><td>ZLI-9022</td><td>solución de trabajo</td></tr><tr><td>O.C.T. Compuesto</td><td>SAKURA</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>Solución tamponada de fosfato (PBS) &nbsp;</td><td>Solarbio</td><td>P1020</td><td>pH 7.2&ndash; 7.4</td></tr><tr><td>Kit de tinción de hierro azul de Prusia (con eosina)</td><td>Solarbio</td><td>G1424</td><td></td></tr><tr><td>RWD Estación de anestesia inhalatoria de laboratorio</td><td>RWD Life Science Co., Ltd</td><td>R550</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de imagen microCT in vivo para animales pequeños</td><td>PerkinElmer&nbsp;</td><td>Quantum GX2</td><td></td></tr><tr><td>Plataforma coaxial de lesión de la médula espinal</td><td>Shandong ULT Biotechnology Co., Ltd</td><td>Hecho a medida (estándar de Feng)</td> <td>https://shop43957633.m.youzan.com/wscgoods/detail/367x5ovgn69q18g?banner_id=f.81386274~goods.7 ~ 1 ~ b0yRFKOq& alg_id= 0& slg=tagGoodList-default%2COpBottom%2Cuuid% 2CabTraceId& components_ style_layout =1& reft=1659409105184& spm= g.930111970_f.81386274& alias= 367x5ovgn69q18g& from_uuid= 1362cc46-ffe0-6886-2c65-01903 dbacbba& sf=qq_sm& is_share= 1& shopAutoEnter=1& share_cmpt =native_wechat& is_silence_auth=1</td></tr><tr><td>Microscopio quirúrgico&nbsp;</td><td>Zumax&nbsp; Médico Co., Ltd.</td><td>zumax, OMS2355</td><td></td></tr><tr><td>Tris Solución salina tamponada+Tween (TBST)</td><td>Solarbio</td><td>T1082</td><td>Relación de dilución (1:19)</td></tr><tr><td>Reactivo</td><td></td><td></td> <td>de xileno</td> Fuyu</tr></tbody></table>

establecimiento del modelo de síndrome de cordón central en ratón c57bl/6j

Establishment of Central Cord Syndrome Model in C57BL/6J Mouse

Los modelos animales del síndrome de la médula central (CCS, por sus siglas en inglés) podrían beneficiar sustancialmente la investigación preclínica. Las vías anatómicas identificables pueden proporcionar enfoques de exposición mínimamente invasivos y reducir las lesiones adicionales a los animales de experimentación durante la operación, lo que permite mantener una morfología anatómica consistente y estable durante los experimentos para minimizar las diferencias conductuales e histológicas entre los individuos para mejorar la reproducibilidad de los experimentos. En este estudio, la médula espinal a nivel de C6 se expuso utilizando una plataforma coaxial de lesión medular (SCICP) y en combinación con una técnica mínimamente invasiva. Con la ayuda de un estabilizador vertebral, fijamos las vértebras y comprimimos la médula espinal de ratones C57BL/6J con pesas de 5 g/mm2 y 10 g/mm2 con SCICP para inducir diferentes grados de lesión medular C6. De acuerdo con la descripción previa de CCS, los resultados revelan que la lesión en este modelo se concentra en la sustancia gris alrededor del cordón central, lo que permite una mayor investigación sobre CCS. Finalmente, se proporcionan los resultados histológicos como referencia para los lectores.

La sección sagital de HE sugiere que, aunque el área dañada en la sustancia gris era más amplia en el grupo severo, la continuidad sobre la sustancia blanca estaba presente. Además, la diferencia en el área de materia gris dañada entre los grupos severo y leve apoya la razonabilidad de la configuración del grupo en el protocolo (Figura 4).
Los cortes coronales de HE muestran que la lesión existe principalmente en la sustancia gris en ambos grupos. En el grupo severo, la estructura de la sustancia blanca que rodea a la materia gris tenía más probabilidades de verse afectada, pero el contorno de la sustancia blanca aún se mantenía (Figura 5). La inmunofluorescencia NF-200 sugiere que, aunque la sustancia blanca que rodea a la sustancia gris se vio afectada en el grupo grave, la sustancia blanca todavía estaba relativamente intacta. Estos resultados son consistentes con las características descritas para la CCS en el estudio previo4 (Figura 6).
No se encontraron glóbulos rojos en las secciones sagitales de EH a los 7 días después de la lesión, ni en el grupo leve ni en el grave. La tinción con azul de Prusia no reveló hemosiderosis en el grupo leve, pero sí en el grupo grave. Estos resultados indican que la inducción de la hemorragia puede requerir un grado relativamente severo de daño (Figura 7).
La inmunofluorescencia reveló áreas de expresión elevada de GFAP e Iba-1 tanto en lesiones leves como graves, lo que sugiere una respuesta inflamatoria y la formación de una cicatriz glial en la lesión. Además, el grupo severo presentó un área lesional mayor que el grupo leve (Figura 8).
La resonancia magnética es un método relativamente mínimamente invasivo para observar la médula espinal. Los resultados sugieren que, tanto en el grupo leve como en el grave, existe un cambio de señal hipointenso en la lesión con un contorno de señal alto. El grupo severo mostró un área de señal hipointensa significativamente mayor (Figura 9). La señal hipointensa sugiere un precipitado del lisado de reticulocitos en esta área, y la señal hiperintensa circundante sugiere una respuesta inflamatoria. Realizamos varias pruebas de comportamiento en nuestro estudio anterior. Por ejemplo, la prueba de fuerza de agarre en las extremidades anteriores revela una diferencia significativa15.
<img alt="Pesas y manguito para configuración del reómetro; utilizado en experimentos de medición de viscosidad." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65028/65028fig01.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> Figura 1: La manga y los pesos de SCICP. El área superficial de la punta se diseñó para ser de 1,3 mm x 1,6 mm en función del área expuesta de la médula espinal medida después de la laminectomía C6. El peso está recubierto con PTFE, lo que reduce eficazmente la fricción entre la pared interior del manguito y el peso. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65028/65028fig01large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Secuencia del procedimiento quirúrgico, pasos A-H, disección de tejido, incisión, pinzas, configuración experimental." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65028/65028fig02.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 2"> Figura 2: Exposición y compresión de la médula espinal. (A) Incisión longitudinal de la piel; (B) Separar los músculos rostralmente de la apófisis espinosa T2; (C) Separar los músculos por encima de las láminas; (D) laminectomía C6; E) Fijación del cuerpo vertebral; (F) Determinar la ubicación de la compresión; (G) Compresión de la médula espinal; (H) No hay daño significativo a la sustancia blanca por encima de la médula espinal después de la compresión de la médula espinal. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65028/65028fig02large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Diagrama de anatomía del esqueleto que muestra la sexta vértebra cervical y la apófisis espinosa T2." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65028/65028fig03.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 3"> Figura 3: Anatomía del esqueleto cervical del ratón. El sitio indicado por la flecha es la apófisis espinosa T2. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65028/65028fig03large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Panel de diapositivas de histología, tejidos en diferentes etapas de infección, leve a grave, barras de escala de 1 mm." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65028/65028fig04.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 4"> Figura 4: Las secciones teñidas de HE sagital. (A) Sección sagital de la médula espinal cervical. (B,C) El grupo severo tuvo un daño más severo que el grupo leve, pero ambos se centraron en la materia gris alrededor del cordón central. Las imágenes de 7, 28 y 70 ppp sugieren que no hay diferencias significativas en la expresión de la lesión en el mismo grupo de lesión en diferentes períodos y que se mantiene la continuidad de la sustancia blanca en la médula espinal superior e inferior. Barra de escala: 1 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65028/65028fig04large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Comparación de histología tisular, 28 dpi; control, leve, degeneración nerviosa severa; Imagen de microscopio." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65028/65028fig05.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 5"> Figura 5: Lesión de la médula espinal cervical, secciones coronales teñidas de HE. (A-C) La lesión afecta principalmente a la materia gris que rodea el cordón central, como se ve en los paneles B y C. El grupo de lesiones graves sufre una gama más amplia de daños que el grupo de lesiones leves, que es más probable que afecte a la sustancia blanca. Barra de escala: 400 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65028/65028fig05large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Microscopía de la médula espinal, tinción NF-200; Secciones transversales: control, leve, grave; Análisis de 28 DPI." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65028/65028fig06.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 6"> Figura 6: Inmunofluorescencia coronal NF-200 después de una lesión. Respuesta de NF-200 sin diferencias significativas en el contorno de la sustancia blanca. Barra de escala: 400 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65028/65028fig06large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Comparación de histología; control, daño tisular leve y grave a 7 ppp; imágenes de diapositivas; Escala de 400 μm." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65028/65028fig07.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 7"> Figura 7: Tinción con azul de Prusia. (A-C) Se observó hemosiderosis en el grupo grave, pero no en el grupo leve. Barra de escala: 400 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65028/65028fig07large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Microscopía de inmunofluorescencia que muestra expresiones de marcadores Iba1 y GFAP con imágenes combinadas." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65028/65028fig08.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 8"> Figura 8: Inmunofluorescencia sagital GFAP e Iba-1 después de la lesión. (A-C) A medida que aumenta el grado de lesión, aumenta el área de respuesta GFAP e Iba-1. Barra de escala: 1 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65028/65028fig08large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Análisis por resonancia magnética de la curvatura de la columna que compara casos control, leves y graves a 7 dpi." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65028/65028fig09.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 9"> Figura 9: Resonancia magnética sagital después de una lesión medular cervical (imágenes ponderadas en T2). La región de lesión se observó como una señal hipointensa en los grupos de lesión leve y grave, con un área significativamente más amplia de señal hipointensa en el grupo de lesión grave. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65028/65028fig09large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>

El protocolo actual, que simula el síndrome del cordón central (CCS) en ratones, ha mejorado la repetibilidad y minimizado el daño operativo a los animales de experimentación, evitando alterar excesivamente la estructura anatómica. La estrategia de este estudio es ventajosa porque permite investigar los mecanismos de lesión al producir resultados consistentes.

Establecimiento del modelo de síndrome de cordón central en ratón C57BL/6J

Animal models of central cord syndrome (CCS) could substantially benefit preclinical research. Identifiable anatomical pathways can give minimally ...

Los modelos animales del síndrome de la médula central podrían beneficiarse posteriormente de la investigación preclínica. La estrategia en este estudio es ventajosa porque ha permitido la investigación de los mecanismos de lesión al producir resultados consistentes. El protocolo actual de simulación del síndrome de la médula central en ratones ha mejorado la repetibilidad y minimizado el daño operativo hacia los animales de experimentación.Evitando la alteración de su estructura anatómica. Comience organizando los instrumentos quirúrgicos y la plataforma coaxial de la lesión de la médula espinal. Una vez que el ratón esté correctamente anestesiado, identifique la pequeña protuberancia a lo largo de la línea media detrás del cuello del animal, que es la apófisis espinosa de la segunda vértebra torácica, o T2. Afeitar el vello que rodea la apófisis espinosa T2 detrás del cuello y desinfectar la piel con tres rondas alternas de solución Iota 4 y etanol al 75%.A continuación, coloque el ratón en posición prona sobre la mesa de operaciones. Aplique un ungüento para los ojos para protegerlos. Coloque una almohadilla de 3 a 4 milímetros de grosor debajo del pecho del animal para facilitar el arqueo de la curva de la columna cervical, lo que permite la exposición del espacio interlaminar y también un paso de aire sin obstáculos durante la cirugía.A continuación, mientras trabaja bajo un microscopio, use un bisturí para hacer una incisión longitudinal de 1 a 1,5 centímetros centrada en la apófisis espinosa T2 y exponga la capa fascial. Con la ayuda de unas microtijeras, retire una parte del tejido adiposo por encima de T2 para exponer claramente la apófisis espinosa T2. Con las microtijeras, separe los músculos trapecios bilaterales y romboides de C5 a T2 a lo largo de la línea media.Luego, separe los músculos de la lámina de las vértebras C5 a T2 y use microrretractores para retraer la capa muscular hacia los lados. Cortar los músculos multífidos y cervicales de la columna vertebral presentes en la superficie de las vértebras. Localiza la vértebra T2 identificando el punto más alto de las apófisis espinosas.A continuación, continúa sondeando las apófisis espinosas sucesivamente desde T2, moviéndote hacia el extremo rostral, hasta localizar la sexta vértebra cervical o C6. Con fórceps, levante la lámina C6 para exponer la médula espinal antes de cortar la lámina. Sujete las articulaciones facetarias C6 a C7 con el estabilizador vertebral y bloquéelo.Alinee la punta del peso con la médula espinal expuesta, asegurándose de que la parte inferior de la punta esté paralela a la superficie dorsal de la médula espinal. Ajuste la manga para permitir que el peso comprima la médula espinal. Deje de ajustar cuando el peso mantenga una posición relativa constante con la médula espinal.Retire el peso y el estabilizador vertebral después de permitir una compresión de cinco minutos. Bajo el microscopio, observe cualquier cambio de color en la médula espinal como resultado de la compresión. Enjuague el sitio de operación con solución salina estéril tamponada con fosfato.Después de lo cual, use succión para limpiar el área. Suturar los músculos y la piel en capas con una sutura de polipropileno 6-0 no absorbible. Después de desinfectar el área quirúrgica, coloque al ratón sobre una almohadilla tibia hasta que recupere la conciencia completa antes de devolverlo a su jaula.La tinción de hematoxilina y eosina o H&E de la sección sagital de la médula espinal sugirió que el área dañada en la sustancia gris era más amplia en el grupo de lesión grave que en el grupo de lesión leve. Los cortes coronales de HE mostraron que en ambos grupos, la lesión existía principalmente en la sustancia gris. En el grupo severo, aunque la estructura de la sustancia blanca que rodea a la materia gris se vio más afectada, su contorno aún se mantuvo.La tinción inmunofluorescente también reveló que, aunque la sustancia blanca que rodeaba a la materia gris se veía afectada en el grupo grave, todavía estaba relativamente intacta. No se encontraron glóbulos rojos en las secciones sagitales de EH a los siete días después de la lesión, ni en el grupo leve ni en el grave. La tinción con azul de Prusia reveló hemosiderosis solo en el grupo grave.La inmunofluorescencia reveló áreas de expresión elevada de GFAP e Iba1 tanto en lesiones leves como graves, lo que sugiere una respuesta inflamatoria y la formación de una cicatriz glial. Además, el grupo grave presentó un área de lesión más grande que el grupo leve. La resonancia magnética sugirió que en ambos grupos hubo un cambio de señal hipo intenso en la lesión con un contorno de señal alto.El grupo severo mostró un área de señal hipointensa significativamente mayor. La eliminación de los tejidos blandos por delante y por detrás de la lámina en la medida de lo posible facilita la relajación de la lámina y el daño comprobado en el corte del tramo cuando se corta en paralelo. El presente volumen de fase del protocolo modela el síndrome de la médula central y permite una mayor comprensión y exploración de la señal.

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Research

Investigación

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Neuroscience

Neurociencia

Debido a la simplicidad de la cirugía y el resultado del comportamiento robusto, constricción crónica del nervio ciático es uno de los modelos animales de pre-eminentes de dolor neuropático. Dentro de las 24 horas siguientes a la cirugía, la hipersensibilidad del dolor se establece y se puede medir cuantitativamente utilizando una de von Frey aesthesiometer (ensayos mecánicos) y el medidor de la analgesia plantar (ensayo térmico).

La constricción crónica del nervio ciático y pruebas de hipersensibilidad dolor en ratas

Fuente: Lakshman, N., et al. Un ensayo de neurosfera para evaluar la activación de células madre neurales endógenas en un modelo de ratón de lesión mínima de la médula espinal. J. Vis. Exp. (2018). Este video muestra la activación y migración de células madre neurales (NSC) en un modelo de lesión de la médula espinal en ratones. Para exponer la médula espinal, se extrae una vértebra de la región torácica de la columna vertebral de un ratón anestesiado. A continuación, se crea una lesión...

 Un modelo de lesión mínima de la médula espinal para estudiar la activación y migración de las células madre neurales

Controlado lesiones laceración cervical en ratones

Las enfermedades desmielinizantes se pueden modelar en animales mediante la aplicación focal de lisolecitina en el SNC. Una sola inyección de lisolecitina en la médula espinal del ratón produce una lesión que se repara espontáneamente con el tiempo. El objetivo es estudiar los factores implicados en la desmielinización y la remielinización, y probar agentes para mejorar la reparación.

Experimental La desmielinización y remielinización de la Médula Espinal murino por inyección Focal de lisolecitina

La fototrombosis es un procedimiento mínimamente invasivo y altamente reproducible para inducir isquemia focal en la médula espinal y sirve como modelo de lesión de la médula espinal en ratones.

Photothrombosis inducida por isquemia focal como un modelo de lesión de médula espinal en ratones

Este artículo describe un método para generar una lesión por compresión de la médula espinal (LME) reproducible en el ratón neonatal. El modelo proporciona una plataforma ventajosa para estudiar los mecanismos de plasticidad adaptativa que subyacen a la recuperación funcional espontánea.

Un ratón neonatal lesión de médula espinal de compresión Modelo

Este protocolo describe cómo crear una laminectomía precisa para la inducción de lesiones medulares estables de tipo transección en el modelo de ratón, con un daño colateral mínimo para la investigación de lesiones de la médula espinal.

Inducción de lesiones completas de la médula espinal de tipo transección en ratones

Las técnicas mínimamente invasivas y un dispositivo de laboratorio simple mejoran la reproducibilidad del modelo de lesión de la médula espinal al reducir el daño operatorio a los animales de experimentación y permitir el mantenimiento de la morfología anatómica. El método vale la pena porque los resultados confiables y el procedimiento reproducible facilitan las investigaciones de los mecanismos de reparación de enfermedades.

Establecimiento de un modelo de lesión de la médula espinal por contusión en ratones basado en una técnica mínimamente invasiva

Este protocolo demuestra un modelo único de brazada de ratón con un infarto de tamaño medio y una excelente tasa de supervivencia. Este modelo permite a los investigadores preclínicos de accidentes cerebrovasculares extender la duración de la isquemia, utilizar ratones de edad avanzada y evaluar los resultados funcionales a largo plazo.

Un modelo de oclusión transcraneal modificado de la arteria cerebral media para estudiar los resultados del accidente cerebrovascular en ratones ancianos

Se propone el método de aguja para la estenosis bilateral asimétrica de la arteria carótida común para crear un modelo de ratón para el deterioro cognitivo vascular y la demencia. Da lugar a resultados a largo plazo en comparación con los modelos establecidos anteriormente y es compatible con la resonancia magnética en vivo. La representación visual que demuestra el procedimiento proporciona orientación para dominar la cirugía.

Un modelo murino para el deterioro cognitivo vascular y la demencia basado en la estenosis bilateral asimétrica de la arteria carótida común guiada por aguja

Aprende a establecer un modelo de síndrome de cordón central en ratón C57BL/6J mediante compresión quirúrgica en T2. Este protocolo mejora la reproducibilidad y minimiza el daño operativo para investigar mecanismos de lesión medular.

Establecimiento del modelo de síndrome de cordón central en ratón C57BL/6J

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