Establecimiento del modelo de síndrome de cordón central en ratón C57BL/6J

Los modelos animales del síndrome de la médula central podrían beneficiarse posteriormente de la investigación preclínica. La estrategia en este estudio es ventajosa porque ha permitido la investigación de los mecanismos de lesión al producir resultados consistentes. El protocolo actual de simulación del síndrome de la médula central en ratones ha mejorado la repetibilidad y minimizado el daño operativo hacia los animales de experimentación.

Evitando la alteración de su estructura anatómica. Comience organizando los instrumentos quirúrgicos y la plataforma coaxial de la lesión de la médula espinal. Una vez que el ratón esté correctamente anestesiado, identifique la pequeña protuberancia a lo largo de la línea media detrás del cuello del animal, que es la apófisis espinosa de la segunda vértebra torácica, o T2. Afeitar el vello que rodea la apófisis espinosa T2 detrás del cuello y desinfectar la piel con tres rondas alternas de solución Iota 4 y etanol al 75%.

A continuación, coloque el ratón en posición prona sobre la mesa de operaciones. Aplique un ungüento para los ojos para protegerlos. Coloque una almohadilla de 3 a 4 milímetros de grosor debajo del pecho del animal para facilitar el arqueo de la curva de la columna cervical, lo que permite la exposición del espacio interlaminar y también un paso de aire sin obstáculos durante la cirugía.

A continuación, mientras trabaja bajo un microscopio, use un bisturí para hacer una incisión longitudinal de 1 a 1,5 centímetros centrada en la apófisis espinosa T2 y exponga la capa fascial. Con la ayuda de unas microtijeras, retire una parte del tejido adiposo por encima de T2 para exponer claramente la apófisis espinosa T2. Con las microtijeras, separe los músculos trapecios bilaterales y romboides de C5 a T2 a lo largo de la línea media.

Luego, separe los músculos de la lámina de las vértebras C5 a T2 y use microrretractores para retraer la capa muscular hacia los lados. Cortar los músculos multífidos y cervicales de la columna vertebral presentes en la superficie de las vértebras. Localiza la vértebra T2 identificando el punto más alto de las apófisis espinosas.

A continuación, continúa sondeando las apófisis espinosas sucesivamente desde T2, moviéndote hacia el extremo rostral, hasta localizar la sexta vértebra cervical o C6. Con fórceps, levante la lámina C6 para exponer la médula espinal antes de cortar la lámina. Sujete las articulaciones facetarias C6 a C7 con el estabilizador vertebral y bloquéelo.

Alinee la punta del peso con la médula espinal expuesta, asegurándose de que la parte inferior de la punta esté paralela a la superficie dorsal de la médula espinal. Ajuste la manga para permitir que el peso comprima la médula espinal. Deje de ajustar cuando el peso mantenga una posición relativa constante con la médula espinal.

Retire el peso y el estabilizador vertebral después de permitir una compresión de cinco minutos. Bajo el microscopio, observe cualquier cambio de color en la médula espinal como resultado de la compresión. Enjuague el sitio de operación con solución salina estéril tamponada con fosfato.

Después de lo cual, use succión para limpiar el área. Suturar los músculos y la piel en capas con una sutura de polipropileno 6-0 no absorbible. Después de desinfectar el área quirúrgica, coloque al ratón sobre una almohadilla tibia hasta que recupere la conciencia completa antes de devolverlo a su jaula.

La tinción de hematoxilina y eosina o H&E de la sección sagital de la médula espinal sugirió que el área dañada en la sustancia gris era más amplia en el grupo de lesión grave que en el grupo de lesión leve. Los cortes coronales de HE mostraron que en ambos grupos, la lesión existía principalmente en la sustancia gris. En el grupo severo, aunque la estructura de la sustancia blanca que rodea a la materia gris se vio más afectada, su contorno aún se mantuvo.

La tinción inmunofluorescente también reveló que, aunque la sustancia blanca que rodeaba a la materia gris se veía afectada en el grupo grave, todavía estaba relativamente intacta. No se encontraron glóbulos rojos en las secciones sagitales de EH a los siete días después de la lesión, ni en el grupo leve ni en el grave. La tinción con azul de Prusia reveló hemosiderosis solo en el grupo grave.

La inmunofluorescencia reveló áreas de expresión elevada de GFAP e Iba1 tanto en lesiones leves como graves, lo que sugiere una respuesta inflamatoria y la formación de una cicatriz glial. Además, el grupo grave presentó un área de lesión más grande que el grupo leve. La resonancia magnética sugirió que en ambos grupos hubo un cambio de señal hipo intenso en la lesión con un contorno de señal alto.

El grupo severo mostró un área de señal hipointensa significativamente mayor. La eliminación de los tejidos blandos por delante y por detrás de la lámina en la medida de lo posible facilita la relajación de la lámina y el daño comprobado en el corte del tramo cuando se corta en paralelo. El presente volumen de fase del protocolo modela el síndrome de la médula central y permite una mayor comprensión y exploración de la señal.