Name: Abordaje transconjuntival para inyección en el nervio óptico de la rata (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-04T14:30:00.000+00:00
Duration: 2 min 33 s
Description: Aprende el abordaje transconjuntival para inyección en el nervio óptico de la rata, una técnica mínimamente invasiva que mejora la entrega terapéutica en investigación de neurofibromatosis tipo 1.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Korn, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+neuroprotective+effects+of+methylprednisolone+and+surgical+decompression+in+a+rodent+model+of+traumatic+optic+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the neuroprotective effects of methylprednisolone and surgical decompression in a rodent model of traumatic optic neuropathy.</a> Curr Eye Res. 47 (3), 461-467 (2022).</li>
<li>Lim, J. Y., Utzschneider, D. A., Sakatani, K., Kocsis, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+attenuation+of+GABA+sensitivity+in+the+maturing+myelin-deficient+rat+optic+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Dev+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">The attenuation of GABA sensitivity in the maturing myelin-deficient rat optic nerve.</a> Brain Res Dev Brain Res. 72 (1), 15-20 (1993).</li>
<li>Singh, D., Dromel, P. C., Perepelkina, T., Baranov, P., Young, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((C6+cell+injection+into+the+optic+nerve+of+long-evans+rats%3A+A+short-term+model+of+optic+pathway+gliomas%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">C6 cell injection into the optic nerve of long-evans rats: A short-term model of optic pathway gliomas.</a> Cell Transplant. 29, 963689720964383(2020).</li>
<li>Schwaner, S. A., Feola, A. J., Ethier, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+affecting+optic+nerve+head+biomechanics+in+a+rat+model+of+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22J+R+Soc+Interface%22%5BJournal%5D)">Factors affecting optic nerve head biomechanics in a rat model of glaucoma.</a> J R Soc Interface. 17 (165), 20190695(2020).</li>
<li>Ellouze, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+allotopic+expression+of+the+human+mitochondrial+ND4+prevents+blindness+in+a+rat+model+of+mitochondrial+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Hum+Genet%22%5BJournal%5D)">Optimized allotopic expression of the human mitochondrial ND4 prevents blindness in a rat model of mitochondrial dysfunction.</a> Am J Hum Genet. 83 (3), 373-387 (2008).</li>
<li>Kwon, H., Park, M., Nepali, S., Lew, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia-preconditioned+placenta-derived+mesenchymal+stem+cells+rescue+optic+nerve+axons+via+differential+roles+of+vascular+endothelial+growth+factor+in+an+optic+nerve+compression+animal+model%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Hypoxia-preconditioned placenta-derived mesenchymal stem cells rescue optic nerve axons via differential roles of vascular endothelial growth factor in an optic nerve compression animal model.</a> Mol Neurobiol. 57 (8), 3362-3375 (2020).</li>
<li>Pang, I. H., Clark, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+models+for+glaucoma+retinopathy+and+optic+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Glaucoma%22%5BJournal%5D)">Rodent models for glaucoma retinopathy and optic neuropathy.</a> J Glaucoma. 16 (5), 483-505 (2007).</li>
<li>Raykova, K., Jones, M. V., Huang, H., Hoffman, P. F., Levy, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimally-invasive+Technique+for+Injection+into+Rat+Optic+Nerve%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Minimally-invasive Technique for Injection into Rat Optic Nerve.</a> J Vis Exp. (99), e52249(2015).</li>
<li>Hallas, B. H., Wells, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+technique+for+mulitple+injections+into+the+mamallian+optic+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22Kopf+Carrier%22%5BJournal%5D)">A novel technique for mulitple injections into the mamallian optic nerve.</a> Kopf Carrier. 54, 1-10 (2000).</li>
<li>Yan, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Partial+optic+nerve+transection+in+rats%3A+A+model+established+with+a+new+operative+approach+to+assess+secondary+degeneration+of+retinal+ganglion+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Partial optic nerve transection in rats: A model established with a new operative approach to assess secondary degeneration of retinal ganglion cells.</a> J Vis Exp. (128), e56272(2017).</li>
<li>Han, I. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biocompatibility+of+human+induced+pluripotent+stem+cell-derived+retinal+progenitor+cell+grafts+in+immunocompromised+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Biocompatibility of human induced pluripotent stem cell-derived retinal progenitor cell grafts in immunocompromised rats.</a> Cell Transplantation. 31, 1-25 (2022).</li>
<li>Tang, Y., Gutmann, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurofibromatosis+Type+1-associated+optic+pathway+gliomas%3A+Current+challenges+and+future+prospects%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Manag+Res%22%5BJournal%5D)">Neurofibromatosis Type 1-associated optic pathway gliomas: Current challenges and future prospects.</a> Cancer Manag Res. 15, 667-681 (2023).</li>
<li>Pan, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implantation+of+biomimetic+polydopamine+nanocomposite+scaffold+promotes+optic+nerve+regeneration+through+modulating+inhibitory+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nanobiotechnol%22%5BJournal%5D)">Implantation of biomimetic polydopamine nanocomposite scaffold promotes optic nerve regeneration through modulating inhibitory microenvironment.</a> J Nanobiotechnol. 22 (1), 683(2024).</li>
<li>Gokoffski, K. K., Peng, M., Alas, B., Lam, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuro-protection+and+neuro-regeneration+of+the+optic+nerve%3A+recent+advances+and+future+directions%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurol%22%5BJournal%5D)">Neuro-protection and neuro-regeneration of the optic nerve: recent advances and future directions.</a> Curr Opin Neurol. 33 (1), 93-105 (2020).</li>
<li>Negishi, H., Dezawa, M., Oshitari, T., Adachi-Usami, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optic+nerve+regeneration+within+artificial+Schwann+cell+graft+in+the+adult+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Bull%22%5BJournal%5D)">Optic nerve regeneration within artificial Schwann cell graft in the adult rat.</a> Brain Res Bull. 55 (3), 409-419 (2001).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Diclorhidrato de 4',6-Diamidino-2-fenilindol (DAPI)</td><td>MilliporeSigma</td><td>D9542</td><td>Dilución 1:10,000, utilizada para teñir criosecciones</td></tr><tr><td>Partículas virales AAV</td><td>Vectorbuilder</td><td>N/A</td><td>Vector utilizado para inyección de nervio óptico</td></tr><tr><td>Medio de montaje Aqua-Mount</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>14-390-5</td><td>Utilizado para montar criosecciones teñidas</td></tr><tr><td>Suero bovino albúmina&nbsp;</td><td>Research Products International Corp</td><td>9048-46-8</td><td>Utilizado en el proceso para teñir criosecciones</td></tr><tr><td>Anti-rata de cabra Alexa Fluor 488&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-11006</td><td>1:1000 dilución, utilizada para teñir criosecciones</td></tr><tr><td>Gas isoflorano</td><td>Primal Healthcare</td><td>66794-017-10</td><td>Gas para anestesia</td></tr><tr><td>Sistema de microscopio confocal vertical Leica TCS SPE&nbsp;</td><td>Leica Microsystems</td><td>N/A</td><td>Microscopio confocal</td></tr><tr><td>Jeringa Luer lock</td><td>BD</td><td>309628</td><td>para inyección</td></tr><tr><td>Microm HM505E criostato&nbsp;</td><td>Microm</td><td>M-HM360 de Marshall Scientific</td><td>Se utiliza para el corte de muestras</td></tr><tr><td>de ratas anti-GFP&nbsp;</td><td>BioLegend</td><td>338002</td><td>dilución 1:500, utilizada para teñir criosecciones</td></tr><tr><td>Gancho para la médula espinal</td><td>F.S.T</td><td>10162-12</td><td>Gancho utilizado para aislar el nervio óptico</td></tr><tr><td>Jeringa de diez microlitros</td><td>Hamilton</td><td>CAL 803901</td><td>Jeringa inyectable</td></tr><tr><td>Aguja de calibre treinta y tres</td><td>JBP</td><td>JBP3308B</td><td>Aguja inyectable</td></tr><tr><td>Compuesto Tissue-Tek OCT</td><td>VWR International</td><td>25608-930</td><td>Utilizado para el procesamiento de criopoldos</td></tr><tr><td>Pinzas dentadas</td><td>Bausch and Lomb</td><td>E1809</td><td>Pinzas para agarrar la conjuntiva</td></tr><tr><td>Tijeras de tenotomía curvas Westcott Tijeras</td><td>Bausch and Lomb</td><td>E3323-R</td><td>para crear peritomía</td></tr></tbody></table>

abordaje transconjuntival para inyección en el nervio óptico de la rata

Transconjunctival Approach for Injection into the Rat Optic Nerve

En la Figura 2 se muestran los resultados experimentales representativos utilizando esta técnica para la inyección del nervio óptico en ratas. En este ejemplo, se inyectó el virus adenoasociado eGFP (AAV-eGFP) en el nervio óptico de rata utilizando la técnica transconjuntival descrita anteriormente con una aguja de 33 G conectada a una jeringa de 10 μL. Estos resultados formaron parte de un experimento en el que se utilizó esta técnica para estudiar la inyección del nervio óptico como parte de un objetivo final de utilizar el AAV para proporcionar corrección CRISPR a los nervios ópticos en un modelo de rata de neurofibromatosis 1 (NF1). Se utilizó una combinación de colorante y vector AAV para desarrollar la técnica de inyección. Los animales fueron sacrificados siete días después de la inyección en el nervio óptico. A continuación, se diseccionaron los nervios y se marcaron con anticuerpos anti-GFP para permitir la obtención de imágenes del nervio óptico con microscopía confocal para confirmar que el material había penetrado con éxito en la vaina del nervio óptico y había entrado en el nervio óptico. La introducción exitosa de material en el nervio óptico se confirmó mediante tinción de anticuerpos, y apareció verde en la microscopía confocal, como se ve en la Figura 2A. En los casos en que la penetración a través de la vaina del nervio óptico no fue completa, o hubo eflujo de material desde la pista de la aguja, se observaron tinciones a lo largo del borde de la vaina del nervio óptico en lugar de dentro del tejido nervioso, como se ve en la Figura 2C.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68048/68048fig01.jpg"> 
Figura 1: Secuencia de los pasos quirúrgicos. (A) La conjuntiva se agarra con pinzas dentadas y se utilizan tijeras Westcott para crear una peritomía limbal. (B) Después de que la fascia de la espiga se abre y se disecciona sin rodeos, la órbita se expone con la ayuda de tijeras Westcott. (C) Se inserta un gancho de médula espinal y se utiliza para aislar el nervio óptico. (D) Después de la disección roma del tejido orbitario suprayacente, el nervio óptico se expone utilizando el gancho de la médula espinal. (E) Se utiliza una aguja de 33 G para perforar la vaina del nervio óptico e inyectar adenovirus o tinte en el nervio óptico. (F) El globo se deposita en la órbita y la conjuntiva se reposiciona sobre el sitio de la peritomía. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68048/68048fig01large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68048/68048fig02.jpg"> 
Figura 2: Imagen panorámica confocal fluorescente representativa del nervio óptico de rata 7 días después de la inyección exitosa con AAV-eGFP (verde) en la que las neuronas transducidas vectoriales cerca del quiasma óptico. (A) Los núcleos del nervio óptico están marcados con DAPI (azul). La ONH con flecha denota la cabeza del nervio óptico o el extremo orbital del nervio, mientras que el extremo del quiasma óptico se etiqueta como "quiasma". (B) Fotografía de un nervio óptico de rata desde la órbita hasta el quiasma incrustado en un bloque de criosección congelado. El nervio se inyecta con tinta china inmediatamente después de la órbita (el sitio de inyección se indica con una flecha negra) para orientar el nervio óptico. (C) Imagen fluorescente panorámica del nervio óptico de rata 7 días después de una inyección fallida con AAV-eGFP (verde) en la que la mayor parte de la suspensión vectorial probablemente se efusivó fuera del tracto nervioso, transduciendo la vaina óptica. Los núcleos del nervio óptico están marcados con DAPI (azul). ONH denota la cabeza del nervio óptico inmediatamente posterior a la retina neural y el sitio de inyección indicado por una flecha blanca. El quiasma y la flecha blanca se demarcan hacia el quiasma óptico. Barras de escala = 400 μm en (A) y 200 μm en (C). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68048/68048fig02large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Variable</td>
			<td colspan="3">Acercarse</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Transconjuntival</td>
			<td>Superior</td>
			<td>Lateral</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incisión en la piel</td>
			<td>No</td>
			<td>Sí</td>
			<td>Sí</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incisión conjuntival</td>
			<td>Sí</td>
			<td>No</td>
			<td>No</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscopio</td>
			<td>Sí</td>
			<td>Sí</td>
			<td>Sí</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transección del músculo orbitario superior</td>
			<td>No</td>
			<td>Sí</td>
			<td>No</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutura de tracción</td>
			<td>No</td>
			<td>Sí</td>
			<td>Sí</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gancho de la médula espinal</td>
			<td>Sí</td>
			<td>No</td>
			<td>No</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutura cutánea</td>
			<td>No</td>
			<td>Sí</td>
			<td>Sí</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabla 1: Comparación con técnicas previamente publicadas para aislar el nervio óptico de rata para estudio experimental. Las variables, como la necesidad de incisión en la piel, la incisión conjuntival, el microscopio quirúrgico, la transección del músculo orbitario superior, la sutura de tracción, el gancho de la médula espinal y la sutura de la piel, se comparan mediante los abordajes transconjuntival, superior y lateral.

Abordaje transconjuntival para inyección en el nervio óptico de la rata

The rat serves as an important model for studying disorders of the optic nerve, including heritable, traumatic, neoplastic, and autoimmune conditions. ...

transconjunctival-approach-for-injection-into-the-rat-optic-nerve

Research

Investigación

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Inyección intravítrea es una técnica ampliamente utilizada en la investigación de las ciencias visuales de enfermedades oculares o en la aplicación directa del tratamiento local. Este vídeo demuestra un protocolo de inyección intravítrea con una jeringa de 1 ml con una pipeta de vidrio. Consejos útiles acerca de cómo evitar una hemorragia masiva y daños en el objetivo se les da.

Inyección intravítrea para el establecimiento de modelos Enfermedades Oculares

Transección del nervio óptico es un modelo ampliamente utilizado de la lesión en el SNC adulto. Este modelo es ideal para llevar a cabo una serie de manipulaciones experimentales que se dirigen a la retina a nivel mundial o directamente dirigidos a la población heridos neuronal de las células ganglionares de la retina.

Los métodos para la manipulación experimental después de la transección del nervio óptico en el SNC de los mamíferos

Este video muestra la inducción de glaucoma en una rata anestesiada mediante la inyección de solución salina hipertónica en la vena epiescleral. La solución salina entra en la malla trabecular a través del canal de Schlemm, causando cicatrices en el tejido, lo que bloquea la salida del humor acuoso y aumenta la presión intraocular. La presión elevada daña las células ganglionares de la retina, lo que provoca glaucoma.

Una técnica de inyección de solución salina hipertónica para inducir glaucoma en ratas

La inyección directa en el nervio óptico de la rata es útil para la investigación regenerativa. Demostramos una técnica mínimamente invasiva para la inyección directa en el nervio óptico de una rata que no implica abrir el cráneo. Con este método, las complicaciones quirúrgicas se minimizan y la recuperación es más rápida.

Técnica mínimamente invasiva para la inyección en nervio óptico de la rata

El siguiente informe describe cómo replicar el modelo de roedores de la neuropatía óptica isquémica anterior no arterítica (rNAION), utilizando los parámetros apropiados de tinte, lente de contacto y láser. También revelamos los pasos apropiados para evaluar la lesión rNAION in vivo.

El modelo de roedor de la anterior no arterítica neuropatía óptica isquémica (rNAION)

Las inyecciones subretinianas son la técnica más común para administrar grandes agentes terapéuticos, como proteínas y vectores virales, a los fotorreceptores y al epitelio pigmentario de la retina. Aquí se describe un método alternativo en ratones que se dirige con éxito al espacio subretiniano con un daño colateral mínimo y tiempos de recuperación rápidos.

Un método alternativo de inyección y validado para acceder al espacio subretiniano<i&gt; vía</i&gt; Un enfoque posterior transescleral

Este protocolo tiene como objetivo demostrar una vía de administración venosa reproducible que pueda ser utilizada en ratas y ratones durante todo el período neonatal. Este procedimiento es importante para los estudios preclínicos en roedores que desean reflejar la administración de fármacos en las unidades de cuidados neonatales, principalmente mediante la administración intravenosa.

Un modelo neonatal de inyección venosa retroorbitaria en roedores

Este protocolo describe una técnica para la inyección intracameral en ratas utilizando una incisión corneal central y un túnel largo hacia la cámara anterior. Este método de inyección minimiza el riesgo de inducir daño tisular involuntario y, por lo tanto, mejora la precisión y la reproducibilidad.

Inyección intracameral en ratas con bajo riesgo de efectos adversos

Este artículo describe los métodos para la inyección subretiniana en ratas, utilizando la visualización intraoperatoria para controlar tanto el sitio de la inyección como el área de desprendimiento de retina.

Visualización intraoperatoria de la inyección subretiniana y el desprendimiento de retina en ratas

Este estudio presenta una metodología para la administración de terapias en la retina y los nervios ópticos de la rata adulta. Además, se introduce un método único de recuperación de tejido para una colección en bloque de arriba hacia abajo del nervio óptico y la retina en una rata adulta.

Administración Terapéutica Ocular y Recuperación Avanzada de Tejido en Ratas Adultas

Aprende el abordaje transconjuntival para inyección en el nervio óptico de la rata, una técnica mínimamente invasiva que mejora la entrega terapéutica en investigación de neurofibromatosis tipo 1.

Abordaje transconjuntival para inyección en el nervio óptico de la rata

Explorar más videos