Trasplante ortotópico de pulmón izquierdo en ratas

Mi investigación se centró en el desarrollo de un modelo estandarizado y reproducible de trasplante de pulmón izquierdo para investigar las complicaciones posteriores al trasplante, en particular el rechazo crónico, y para comprender mejor el mecanismo que impulsa el fracaso del injerto a largo plazo. Nuestro protocolo ofrece una curva de aprendizaje más corta, una capacidad operativa única y una mayor reproducibilidad en comparación con las técnicas existentes. Nuestro modelo estandarizado de trasplante pulmonar directo proporciona una plataforma confiable para estudiar las complicaciones después del trasplante de pulmón y puede acelerar la investigación traslacional para mejorar la supervivencia del injerto.

En el futuro, nuestro laboratorio se centrará en el estudio del rechazo crónico después del trasplante pulmonar con el fin de mejorar la tasa de supervivencia a largo plazo de los receptores de trasplante pulmonar. Para comenzar, obtenga catéteres y cuchillas intravenosas de calibre 14 y 16. Recorte los catéteres en un manguito con cola con una cuchilla.

Luego divida cada brazalete en un cuerpo y una cola, cada uno de aproximadamente dos a tres milímetros de largo. Con un bisturí, cree rasguños superficiales en el cuerpo del manguito para aumentar la fricción para la fijación de la sutura. Para extraer el pulmón del donante, retraiga la lengua de una rata anestesiada hacia afuera y hacia arriba con fórceps.

Coloque una lámpara quirúrgica anterior al cuello para iluminar claramente la abertura glotal. Ahora, inserte una cánula intravenosa de calibre 14 en las vías respiratorias a través de la glotis. Configure el ventilador en modo de presión controlada.

Luego, ingrese los parámetros de peso, ajuste la presión a 15 centímetros de agua y conecte el ventilador. Observe la subida y bajada del tórax para asegurar la sincronización con la frecuencia del ventilador. A continuación, arregle las extremidades y la cabeza con cinta adhesiva o ataduras.

Haga una incisión en la línea media a lo largo de la pared abdominal. Inyecte heparina a través de la vena peritoneal expuesta, luego permita la circulación sistémica durante tres minutos para asegurar una heparinización completa. Corta el diafragma y abre la cavidad torácica desde la línea media del esternón.

Luego, fije la pared torácica en ambos lados con hemostáticos. Extirpar el timo para exponer los órganos de la cavidad torácica. Secuencialmente, corte la vena cava superior, la vena cava inferior y las aurículas izquierda y derecha.

Ahora, inyecte solución salina fría en la raíz de la arteria pulmonar con una jeringa de 20 mililitros durante un minuto para una perfusión a baja presión hasta que el pulmón del donante se vuelva completamente blanco. Corte los tejidos que conectan el pulmón del donante y extraiga el corazón y el pulmón del donante en bloque. Remoje el bloque corazón-pulmón del donante en solución salina preenfriada.

Coloque el bloque corazón-pulmón sobre hielo bajo un microscopio. Sujete la tráquea con un hemostático y asegúrela en plastilina. Cubra los pulmones con papel para lentes estéril húmedo.

Ahora, use fórceps para separar la arteria pulmonar, el bronquio y la vena pulmonar bajo el microscopio. Ligue el bronquio cerca del pulmón con suturas quirúrgicas 6-0. Use tijeras de resorte para cortar la arteria pulmonar, el bronquio y la vena pulmonar.

Extraiga la arteria pulmonar, el bronquio y la vena pulmonar de los manguitos respectivos hechos de catéteres de hendidura de calibre 16, 14 y calibre 16. Fije las paredes del tubo al manguito con 8-0 suturas quirúrgicas. Conserve los pulmones del donante en solución salina y vuelva a colocarlos en hielo hasta la implantación.

Depilación de la región toracodorsal izquierda del animal receptor. Coloque al animal en la postura de decúbito lateral derecho en una mesa de operaciones termostática. Ahora, haga una incisión a través de la piel y la pared torácica en el punto del impulso apical en el cuarto espacio intercostal para acceder a la cavidad torácica.

Use un retractor de párpados para abrir la cavidad torácica. Luego, empuje suavemente el pulmón izquierdo hacia un lado con un hisopo de algodón húmedo para exponer y cortar bruscamente el ligamento pulmonar inferior. A continuación, agarre el pulmón izquierdo con fórceps y retírelo fuera de la cavidad torácica.

Asegure el hilio con un hemostático, luego estabilícelo con plastilina. Ahora, disecciona el hilio pulmonar para separar la arteria pulmonar, la vena pulmonar y el bronquio. Pinza los extremos proximales de la arteria pulmonar, la vena pulmonar y el bronquio con pinzas vasculares.

Ate previamente la arteria pulmonar, el bronquio y la vena pulmonar del receptor con 8-0 suturas quirúrgicas para la anastomosis rápida. Recorte una plataforma en el pulmón izquierdo pinzado del receptor para facilitar la colocación del pulmón del donante. Hacer pequeñas incisiones en los extremos distales de la arteria pulmonar, la vena pulmonar y el bronquio.

Enjuague la arteria pulmonar y la vena pulmonar con solución salina heparinizada para evitar la formación de coágulos. Luego, tome el pulmón del donante del hielo y colóquelo en la plataforma preparada del pulmón izquierdo del receptor. Use fórceps para levantar un lado de la abertura cortada, luego implante y ligue secuencialmente los manguitos de la arteria pulmonar, la vena pulmonar y el bronquio en el receptor.

Abra el clip microhemostático y observe cómo el pulmón del donante cambia de blanco a rojo. Inspeccione los sitios anastomóticos para detectar signos de sangrado. Ahora, extraiga el pulmón izquierdo del receptor y devuelva el pulmón del donante a la cavidad torácica.

Seque la cavidad torácica con algodón estéril. Luego, cierre la cavidad torácica capa por capa. Espere la recuperación espontánea de la respiración antes de retirar el ventilador.

Después de una hora, los destinatarios eran libres de comer. Seis meses después del trasplante, las imágenes de TC mostraron que la ventilación de los pulmones trasplantados era comparable a la del grupo simulado, lo que indica una función pulmonar preservada. La apariencia macroscópica de los pulmones no difirió visiblemente entre los grupos simulados y trasplantados, sin mostrar signos de deterioro o anomalía.

La tinción con hematoxilina y eosina de los tejidos pulmonares no reveló cambios patológicos significativos en los pulmones trasplantados en comparación con el grupo simulado, con estructuras alveolares conservadas y ausencia de infiltración inflamatoria.