Aislamiento de cardiomiocitos ventriculares a partir de un modelo murino de cardiotoxicidad por doxorrubicina

Yanyan Cheng; Tingting Jiang; Lei Xiao; Nanping Wang

doi:10.3791/70411

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Artículo de método

Aislamiento de cardiomiocitos ventriculares a partir de un modelo murino de cardiotoxicidad por doxorrubicina

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DOI:

10.3791/70411

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27 de febrero de 2026

Yanyan Cheng¹^,² , Tingting Jiang¹^,² , Lei Xiao² , Nanping Wang¹^,³

¹Advanced Institute for Medical Sciences, Dalian Medical University, ²School of Basic Medical Sciences, Xi'an Jiaotong University, ³East China Normal University Health Science Center

En este artículo

Resumen

Este protocolo describe un método reproducible y libre de Langendorff para aislar cardiomiocitos ventriculares adultos de ratón viables a partir de un modelo de cardiotoxicidad inducido por doxorubicina. Emplea perfusión antecígrada directa del ventrículo izquierdo seguida de una digestión enzimática controlada para obtener miocitos en forma de bastone, tolerantes al calcio, adecuados para análisis estructurales, moleculares y funcionales.

Resumen

La doxorubicina (DOX) es un fármaco quimioterapéutico eficaz cuya aplicación clínica está limitada por una cardiotoxicidad progresiva y dependiente de la dosis que afecta predominantemente al miocardio ventricular. Estudiar los mecanismos de lesión celular en este contexto requiere un aislamiento fiable de los cardiomiocitos adultos, un proceso que es técnicamente complicado en corazones enfermos o estructuralmente frágiles. Aquí describimos un protocolo simplificado y reproducible libre de Langendorff para aislar cardiomiocitos ventriculares funcionales de ratones con cardiotoxicidad inducida por DOX. Tras establecer el modelo DOX en ratones C57BL/6, el corazón se extirpa rápidamente y la aorta se pinza ex vivo. La perfusión antepágrada no recirculante se realiza directamente a través del ventrículo izquierdo utilizando amortiguadores libres de calcio y que contienen enzimas. La disociación mecánica suave del tejido ventricular digerido produce cardiomiocitos individuales, seguida de una reintroducción controlada del calcio para restaurar la tolerancia al calcio. Este método proporciona cardiomiocitos viables y de alta calidad en forma de bastón compatibles con ensayos posteriores, incluyendo inmunofluorescencia, análisis de organización de sarcómeros, detección de apoptosis y estudios de señalización molecular. Al eliminar la necesidad de equipos especializados de perfusión Langendorff, este protocolo ofrece una solución accesible y de alto rendimiento para laboratorios que investigan los mecanismos de la lesión cardíaca inducida por DOX.

Introducción

La doxorubicina (DOX) es un potente agente quimioterapéutico de antraciclina, pero su utilidad clínica está limitada por una cardiotoxicidad acumulada que puede progresar hacia miocardiopatía dilatada e insuficiencia^cardíaca ^1,2. La apoptosis cardiomiocytaria es un proceso patogénico clave en esta^toxicidad ^3,4,5, y estudiar estos eventos celulares requiere acceso fiable a cardiomiocitos funcionales en adultos derivados de corazones lesionados por DOX. Sin embargo, la exposición a DOX ....