IMPORTANT : En plus de porter l’équipement de protection individuelle approprié, assurez-vous de garder votre visage à l’écart des cultures en suspension et d’éviter d’inhaler des réactifs. Ne touchez pas votre visage pendant l’expérience. Lavez-vous toujours les mains avant et après chaque expérience.
Lorsque vous êtes prêt à commencer en toute sécurité, assurez-vous d’avoir un ou plusieurs tubes de cellules E. coli compétentes dans votre seau à glace.
Ensuite, transférez 50 μL de l’un de ces tubes vers chacun des deux nouveaux tubes de micro-centrifugeuse, l’un étiqueté '-', et l’autre étiqueté '+'.
Ensuite, pipetez 2 μL de plasmide p-GREEN dans le tube plus et effleurez doucement le tube pour incorporer le plasmide dans toute la solution bactérienne. L’hypothèse expérimentale est que sur des plaques ne contenant aucun antibiotique, les bactéries avec ou sans plasmide peuvent survivre, et donc les deux feront pousser des pelouses de bactéries. À l’inverse, sur les plaques contenant l’antibiotique ampicilline, seules les bactéries transformées avec succès avec le plasmide de résistance se développeront, tandis que les plaques plasmides négatives ne contiendront aucune bactérie. L’hypothèse nulle de cette expérience est qu’il n’y aura pas de différence de croissance bactérienne entre les plaques.
Incuber les deux tubes sur de la glace.
Après 30 minutes, immergez les deux tubes aux 3/4 dans l’eau d’un bain-marie à 42 °C pendant 30 secondes.
À la fin de l’incubation au bain-marie, remettez les tubes sur de la glace pendant 5 minutes, puis ajoutez 950 μL de milieu SOC à température ambiante dans chaque tube.
Incuber les tubes dans un agitateur à 37 °C pendant 60 minutes à 250 tr/min.
Pendant que les tubes sont en incubation, étiquetez les fonds d’un LB et d’un LB/ampicilline, ou d’une plaque AMP, « + plasmide », et les fonds d’une plaque LB et d’une plaque LB/AMP « - plasmide ».
À la fin de l’incubation, pipeter 50 μL du tube cellulaire « + plasmide » sur la plaque LB/AMP plus et la plaque LB plus.
Ensuite, avec une nouvelle pointe, ajoutez 50 μL des bactéries qui n’ont pas été exposées au plasmide à chacune des plaques négatives.
Ensuite, étalez chaque plaque à l’aide d’une nouvelle pointe de pipette.
Couvrez les plaques avec leurs couvercles, puis scellez-les avec un film de laboratoire.
Rangez ensuite les plaques à l’envers dans un incubateur à 37 °C pendant 24 heures.
