Article de méthode

Split-ubiquitine membrane à base de levure double hybride (MYTH) Système: Un outil puissant pour identifier les interactions entre protéines

DOI :

10.3791/1698

⸱

1 février 2010

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1Department of Biochemistry, University of Toronto, 2Department of Molecular Genetics, University of Toronto, 3Terrence Donnelly Centre for Cellular and Biomolecular Research (CCBR), University of Toronto

Dans cet article

Résumé

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MYTHE permet la détection sensible des interactions transitoires et stables entre les protéines qui sont exprimées dans l'organisme modèle Saccharomyces cerevisiae. Elle a été appliquée avec succès pour étudier exogènes et de la levure des protéines membranaires intégrales en vue d'identifier leurs partenaires d'interaction de façon à haut débit.

Résumé

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L'importance biologique fondamentale et clinique de protéines membranaires intégrales conduit au développement d'un système à base de levure pour l'identification à haut débit des interactions protéine-protéine (PPI) pour les protéines transmembranaires pleine longueur. À cette fin, notre laboratoire a développé le split-ubiquitine levure membrane à base de double-hybride (MYTH) du système. Cette technologie permet la détection sensible des interactions protéiques transitoires et stables à l'aide

Protocole

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1. Renseignements généraux

Interactions protéine-protéine (IPP) sont les éléments constitutifs fondamentaux impliqués dans régissant tous les processus cellulaires. Par conséquent, il est essentiel que toutes les interactions sont strictement réglementées afin de maintenir l'homéostasie cellulaire, comme un changement dans cet équilibre biologique joue souvent un rôle dans la maladie et la transformation des cellules cancéreuses. Membrane protéines associées sont parmi la classe la plus importante de protéines biologiquement comme ils peuvent initier des cascades de signalisation complexes, et la médiation à la fois l'importation et....

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Discussion

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Le mythe est le système de premier haut débit qui permet l'identification des interactions entre protéines membranaires pleine longueur et cytosoliques ou membranaires partenaires. Il a été utilisé pour étudier des protéines membranaires à partir d'un éventail d'organismes [3-7]. Il ya, cependant, les détails spécifiques qui peuvent avoir besoin d'être examinées attentivement pour s'assurer la protéine d'intérêt est susceptible d'étudier avec le mythe.

Beaucoup de.......

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Déclarations de divulgation

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Igor Stagljar est une co-fondateur de Dualsystems Biotech, en Suisse.

Remerciements

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Nous tenons à remercier Edmonds Dawn pour une lecture critique de ce manuscrit. Le laboratoire est soutenu par Stagljar fonds de la Fondation canadienne pour l'innovation (FCI), l'Institut canadien de recherche en santé du Canada (IRSC), la Fondation des maladies du cœur, la Société canadienne du cancer, et Novartis.

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Polyéthylène glycol (PEG3350)BioShop CanadaPEG335
Acétate de lithium dihydratéBioShop CanadaLIA001
X-Gal (5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside)BioShop CanadaXGA001
N,N-diméthylformamideBioShop CanadaDMF 451
3-amino-1,2,4-triazole (3-AT)BioShop CanadaATT124
Phosphate disodiqueBioShop CanadaSPD307
Phosphate monosodiqueFisher ScientificBP329-500
ADN de sperme de saumonVWR internationalCA80601-120
D-GlucoseBioShop CanadaGLU501
Bouillon LB LENOXBioShop CanadaLBL405
Base d'azote pour levureBioShop CanadaYNB406
Extrait de levureBioShop CanadaYEX401
PeptoneBD Biosciences211677
Bio-tryptoneBioShop CanadaTRP402
Sulfate d'adénineBioShop CanadaADS201
L-UracileBioShop CanadaURA241
L-ThréonineBioShop CanadaTHR002
L-HistidineBioShop CanadaHIS200
L-MéthionineBioShop CanadaMET222
L-ValineBioShop CanadaVAL201
L-phénylalanineBioShop CanadaPHA302
L-isoleucineBioShop CanadaISO910
L-tyrosineBioShop CanadaTYR333
L-leucineBioShop CanadaLEU222
L-arginineBioShop CanadaARG006
L-tryptophaneFisher ScientificBP395-100
L-lysineBioShop CanadaLYS101
L-alanineFisher ScientificBP369-100
AgarBioShop CanadaAGR001
Perles de verre à chaux sodéeBiospec Products11079105
Chlorure de sodiumBioShop CanadaSLD002

Références

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  1. Stagljar, I., Fields, S. Analysis of membrane protein interactions using yeast-based technologies. Trends Biochem Sci. 27 (11), 559-563 (2002).
  2. Iyer, K. Utilizing the split-ubiquitin membrane yeast two-hybrid s....

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Mots-clés

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