Egg Laying Assay: Een methode om het eierleggedrag van C. elegans te kwantificeren

Overview

C. elegans eierleggedrag kan belangrijke informatie bieden in ontwikkelings-, reproductieve en anatomische studies.  Deze video introduceert de belangrijke stappen van een eierlegtest en toont een monsterexperiment waarbij een medicijn wordt getest op reproductietoxiciteit.

Protocol

Lee en Kang, Het meten van het effect van chemicaliën op de groei en reproductie van Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2017).

1.C. elegans Ei leggen Assay

1. Incubeer de leeftijdssynchrone eieren op de NGM-plaat met DMSO of etoposide gedurende 64 uur (vóór de eerste geboorte) tot het jongvolwassen stadium bij 20 °C.
   OPMERKING: Het is optioneel om de wormen uit de groeimetingsexperimenten te gebruiken. Het is handig om de groeimeting en het leggen van eieren samen te doen.
2. Breng 5 volwassen wormen over naar de nieuwe NGM-platen zonder chemicaliën (toestand 1, chemische behandeling binnen een bepaalde periode, van eieren naar jongvolwassen stadium) of nieuwe NGM-plaat met dezelfde chemische voorbehandeling (toestand 2, continue blootstelling van chemicaliën gedurende de totale experimentele periode) en incubeer ze vervolgens gedurende 24 uur.
   OPMERKING: Het wordt aanbevolen om voor elke behandeling replica's te maken met behulp van 3-5 NGM-platen; deze replica's kunnen worden gebruikt voor statistische analyse.
3. Breng over naar de nieuwe NGM-plaat zoals hierboven beschreven en tel elke dag het aantal eieren. Tel de wormen die eraf kropen, stierven en intern werden uitgebroed.
4. Herhaal deze stappen totdat de wormen geen eieren meer leggen, meestal in 5 dagen.
5. Bereken het aantal eieren dat per worm van elk bord wordt gelegd en som deze waarden elke dag gedurende 5 dagen op om het totale aantal gelegde eieren te bepalen.
   OPMERKING: Sluit het aantal wormen uit dat is weggecrawld en intern is uitgebroed uit de berekening.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Caenorhabditis elegans N2	Caenorhabditis Genetics Center (CGC)		Wild type
Dimethyl sulfoxide	Sigma, USA	D2650
Escherichia coli OP50	Caenorhabditis Genetics Center (CGC)
Etoposide	Sigma, USA	E1383
35 × 10 mm Petri dish	SPL Life Sciences, South Korea	10035
Stereo microscope	Nikon, Japan	SMZ800N