Overview
C. elegans eggleggingsadferd kan gi viktig informasjon i utviklingsmessige, reproduktive og anatomiske studier. Denne videoen introduserer de viktige trinnene i en eggleggingsanalyse og viser et prøveeksperiment der et stoff testes for reproduksjonstoksisitet.
Protocol
Lee og Kang, Måle effekten av kjemikalier på vekst og reproduksjon av Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2017).
1.C. elegans egg legging analyse
- Inkuber de alderssynkroniserte eggene på NGM-platen som inneholder DMSO eller etoposide i 64 timer (før første fødsel) til den unge voksenstadiet ved 20 °C.
MERK: Det er valgfritt å bruke ormene fra vekstmålingseksperimentene. Det er praktisk å gjøre vekstmålingen og eggleggingsanalysen sammen. - Overfør 5 voksne ormer til de nye NGM-platene uten kjemikalier (tilstand 1, kjemisk behandling innen en viss tidsperiode, fra egg til ung voksenstadium) eller ny NGM-plate som inneholder samme kjemiske forbehandling (tilstand 2, kontinuerlig eksponering av kjemikalier gjennom den totale eksperimentelle perioden), og inkuber dem deretter i 24 timer.
MERK: Det anbefales å lage replikeringer ved hjelp av 3-5 NGM-plater for hver behandling; Disse replikeringene kan brukes til statistisk analyse. - Overfør til den nye NGM-platen som beskrevet ovenfor og tell antall egg hver dag. Tell ormene som krøp av, døde og ble internt klekket ut.
- Gjenta disse trinnene til ormene ikke legger flere egg, vanligvis om 5 dager.
- Beregn antall egg lagt per orm fra hver tallerken, og summer disse verdiene hver dag i 5 dager for å bestemme totalt antall egg lagt.
MERK: Utelat antall ormer som kravlesøkte av og internt skravert fra beregningen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Caenorhabditis elegans N2 | Caenorhabditis Genetics Center (CGC) | Wild type | |
| Dimethyl sulfoxide | Sigma, USA | D2650 | |
| Escherichia coli OP50 | Caenorhabditis Genetics Center (CGC) | ||
| Etoposide | Sigma, USA | E1383 | |
| 35 × 10 mm Petri dish | SPL Life Sciences, South Korea | 10035 | |
| Stereo microscope | Nikon, Japan | SMZ800N |
