Cet article illustre deux méthodes très différentes d'injection: 1) dans le cerveau (intracérébroventriculaire) et 2) systémique (intraveineuse) d'introduire des agents thérapeutiques dans le système nerveux central de souris néonatales.
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Article de méthode
Délivrance d'agents thérapeutiques à travers intracérébroventriculaire (ICV) et intraveineuse (IV) par injection chez la souris
Dans cet article
Résumé
Résumé
Malgré le rôle protecteur que barrière hémato-encéphalique joue dans le blindage du cerveau, il limite l'accès au système nerveux central (SNC) qui résulte le plus souvent par un échec des thérapeutiques potentiels conçu pour 1,2 des troubles neurodégénératifs. Les maladies neurodégénératives comme l'atrophie musculaire spinale (SMA), dans lequel les neurones moteurs inférieurs sont touchés, peuvent grandement bénéficier de l'introduction des agents thérapeutiques dans le SNC. Le but de cette vidéo est de démontrer deux paradigmes d'injection différents pour livrer le matériel thérapeutiques dans des souris néonatales tôt après la naissance. Une de ces méthodes consiste à injecter directement dans cérébrale ventricules latéraux (intracérébroventriculaire) qui se traduit par la livraison des matériaux dans le SNC à travers le liquide céphalo-rachidien 3,4. La deuxième méthode est une injection dans la veine temporale (intraveineuse) qui peuvent introduire des produits thérapeutiques différentes dans le système circulatoire, conduisant à une administration systémique, y compris les 5 SNC. Transduction généralisée du SNC est réalisable si un vecteur approprié virale et le sérotype viral est utilisé. Visualisation et utilisation de la veine temporale pour injection est faisable à jour postnatal 6. Toutefois, si le matériel livré est destiné à atteindre le SNC, ces injections devraient avoir lieu pendant que la barrière hémato-encéphalique est plus perméable à cause de son statut immatures, de préférence avant le jour après la naissance 2. La barrière hémato pleinement développé du cerveau limite grandement l'efficacité de l'administration par voie intraveineuse. Les deux systèmes de livraison sont simples et efficaces une fois que les aptitudes chirurgicale est réalisée. Ils ne nécessitent pas de dispositifs de grande chirurgie et peut être réalisée par une seule personne. Toutefois, ces techniques ne sont pas sans défis. La petite taille du postnatale jour 2 chiots et les domaines ultérieurs petite cible peut faire les injections difficiles à réaliser et d'abord difficile à reproduire.
Protocole
1. Injection intracérébroventriculaire
- La première étape est la préparation des solutions mères d'injection; ces solutions sont un vecteur viral, l'ADN plasmidique, la drogue, et doit être injecté dans des conditions stériles.
- Mélangez un titre désiré de vecteurs viraux (5-7 au total ul) avec 0,05% p / v bleu trypan dans du PBS pour la visualisation du site d'injection.
- Solution de l'ADN plasmidique (5 au total l uL) contient du D-(+)-glucose à 20% (p / v) (1 pl), le bleu trypan (0,05%) PBS (1 pl), un plasmide (~ 5 ~ g / ~ L ) (2 ~ L), et 2,5 kDa linéaires PEI homopolymère (150 mm) (1 ~ L).
- Immobiliser le PND 2 nouveau-nés par....
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Discussion
Les recherches utilisant des modèles murins de la maladie nécessite souvent l'administration de drogues ou autres substances aux nouveau-nés. Dans cette vidéo, nous démontrons l'étape par étape des procédures impliquant deux types de stratégies d'injection qui peut être utilisé pour cibler le système nerveux central: 1) l'injection directe dans le SNC en utilisant intracérébroventriculaire (ICV) d'injection, ou 2) par injection IV ciblant temporel / veine faciale. Le calendrier de ces injections est .......
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Déclarations de divulgation
Aucun conflit d'intérêt déclaré.
Remerciements
Les auteurs tiennent à remercier John Marston pour l'expert de l'élevage et le Dr Marco A. Passini de l'assistance technique dans les premiers stades de ce projet. Ce travail a été financé par la subvention de la National Institutes of Health à CLL (R01NS41584; R01HD054413).
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Nom du réactif | Société | Numéro de catalogue | Commentaires (optionnel) |
| Colorant alimentaire vert | McCormick | n / a | Doit être filtrée |
| Hamilton verre seringue (100 pi) | Sigma Aldrick | 20702 | |
| Discussion LuerMxF White Style Nylon | Petites pièces, Inc | VPLF-LC78-1-25 | |
| Beaux aiguilles hypodermiques de calibre | Popper | 7111 | Taille: 33 (GTS) x ¼ "(6,35 mm) |
| Transilluminateur Sight Wee | Respironics | 1017920 | |
| 2.25x Bandeau Loupe | MagEyes | Modèle n ° 5 | Sélectionnez un grossissement d'ajustement des préférences individuelles |
Références
- Blanchette, M., Fortin, D. Blood-brain barrier disruption in the treatment of brain tumors. Methods Mol. Biol. 686, 447-463 (2011).
- Foust, K. D., Kaspar, B. K. Over the barrier and through the blood: to CNS delivery we go. Cell Cycle. 24, 4017-4018 (2009).
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Réimpressions et autorisations
