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Les tumeurs cérébrales sont typiquement constitués de cellules morphologiquement différents qui expriment une variété de marqueurs de lignage neural. Seule une fraction relativement faible de cellules dans la tumeur avec des propriétés de cellules souches, appelées cellules tumorales du cerveau d'amorçage (BTICs), possèdent une capacité à différencier selon plusieurs lignées, auto-renouvellement, et d'initier des tumeurs in vivo. Nous avons appliqué les conditions de culture utilisés à l'origine pour les normales des cellules souches neurales (NSC) à une variété de tumeurs cérébrales humaines et a constaté que cette méthode de culture sélectionne spécifiquement pour les souches de type populations. Un milieu sans sérum (NSC) permet le maintien d'un état de cellules souches non différenciées, et l'addition de bFGF et EGF permet la prolifération des multi-puissant, auto-renouvellement, et tumorspheres expansibles.
Pour caractériser davantage la population BTIC chaque tumeur, nous évaluons marqueurs de surface cellulaire par cytométrie en flux. Nous pouvons également trier les populations d'intérêt pour characteriz plus spécifiquestion. L'auto-renouvellement des essais sont réalisés sur BTICs simples triés dans des plaques à 96 puits, la formation d'tumorspheres après incubation à 37 ° C indique la présence d'une tige ou d'une cellule progénitrice. Le nombre de cellules multiples d'une population donnée peut également être triées dans différents puits pour limiter l'analyse de dilution, d'analyser la capacité d'auto-renouvellement. Nous pouvons également étudier expression différentielle des gènes dans une population cellulaire particulière en utilisant seule cellule RT-PCR.
Les protocoles suivants décrivent les procédures pour la dissociation et de culture primaire d'échantillons humains pour enrichir des populations BTIC, ainsi que la dissociation de tumorspheres. Sont également inclus les protocoles de coloration pour l'analyse de cytométrie de flux ou tri, l'auto-renouvellement des essais, et seule cellule RT-PCR.