Summary
在这里，我们描述了随机microseed矩阵筛选的一般方法。这种技术被示为显著增加的蛋白质结晶筛选实验的成功率，减少需要优化，并提供晶体的数据收集和配体浸泡实验的可靠供应。
Abstract
随机microseed基质筛选（RMMS）是在其中晶种加入到随机屏幕的蛋白质结晶技术。通过增加晶体蛋白质的相图介稳区将增长的可能性，额外的结晶导线通常获得的，所产生的晶体的质量可能会增加，并提供晶体数据收集和浸泡实验的良好供应。这里我们描述了可应用于任一坐滴或悬滴蒸气扩散实验中，通过手或使用液体处理机器人，在96孔或24孔盘格式建立RMMS的一般方法。
Introduction
由佩鲁茨，肯德鲁和同事在确定血红蛋白和肌红蛋白的结构，在结构基因组学财团的现代高通量自动化流水线及其初步应用，大分子X射线晶体学已为我们提供了前所未有的结构性一窥世界的蛋白质。这种技术仍然是最广泛应用的实验方法，允许蛋白质结构的直接可视化在原子，或接近原子分辨率（ 即在1-3的范围内）。一个先决条件被应用到的蛋白质X-射线衍射是，它必须首先被结晶化，这是此阶段中残留的结构确定的一个最大限速步骤由衍射方法1，2的过程。尽管在我们的理解蛋白质结晶的方法，并且在结晶画面的质量和可用性的重大改进显著进步，托盘，以及相关的技术，但它仍然无法可靠地预测结晶成功3的可能性。生物化学和生物物理方法可用于评估是否感兴趣显示器的蛋白质晶体成核和生长良好的特性， 即它是良好的折叠，均匀的，单分散性等，然而，在没有办法这些见解提供结晶的最终的预测倾向。
播种长期以来一直声称是用于改善的数目，大小，和现有的晶体或结晶材料4-7的质量的可行方法。这种方法是基于的前提是，支持晶体成核的条件可能不是最优的用于随后的晶体生长，反之亦然。通过将核物质从一种状态到另一种，人们可能试图有效地分离这些过程，以新的，迄今未开发的结晶太空，使访问，并因此增加在筛选试验的总体成功率。建立的方法已被记录为（ⅰ）macroseeding，其全部的单晶从一个状态转移到另一个8，（ⅱ）条纹播种，核材料的转移，通常由定向的压力，例如，用应用程序得到猫的晶须到现有的晶体，然后通过随后的晶须的通路通过一个新的结晶降9，以及（iii）“经典的”microseeding的表面的晶体“种子”，以收获所产生的传输结晶粉碎物（或结晶性材料），到类似的，产生的种子10的条件。值得注意的是所有这三种方法都是费时和可扩展性很差，当然在比较什么是可以实现的现代化液体处理机器人技术的结晶。这些因素促成，在一定程度上，至少，在人们认为种子ING是一种方法，只访问时，其他方法都未能见效。
随机矩阵microseeding（RMMS）是最近的创新方法，结合了传统microseeding与高通量筛选和可扩展性11-13的好处。这种方法依赖于生成器的种子的库存，从核的结晶材料，其可以在一个标准的96条件结晶屏等分入/到每个sub-well/coverslip生产。此方法适用于两个坐或悬滴蒸气扩散实验中，通过手或使用液体处理机器人，在24孔或96孔盘格式建立。 RMMS已经通过实验证实，以显著提高结晶的成功率，并产生更大的衍射质量和数量11，13，14的晶体，并代表了晶体学家“在邻方法阿森纳一种创新的工具ngoing对结晶成功的努力。在这里，我们描述了用于RMMS的一般方法，并提供采样数据表示该技术的有效性。
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Protocol
1。战略思考
- 的籽晶用于microseeding实验的选择将取决于实验的目的而有所不同。在项目开始的时候是有帮助的找几个结晶命中，可以为水晶优化提供可供选择的出发点。 RMMS大大减少了对晶体优化，因为优质的晶体更容易在相图， 即在该地区，其中在干扰或核系统返回到平衡的稳区种植。因此，我们建议使用RMMS经常只要第一晶体获得（或者更准确的说，只要第一晶体停止生长）。
- 对于首轮RMMS的，种子股票应尽可能多晶材料尽可能进行。如果只有一个孔是可用的包含晶体，或者如果晶粒是小的，也可能是有帮助的设置的多个重复原始命中（没有播种），以增加结晶的供给。但是，如果几个不同的检索结果得到，晶种可以从几个条件可以收获并混合在一起。
- 为了避免相分离，在高盐条件下生长的晶体应分别从高PEG条件下生长的晶体收获。如果从多口井的结晶混合，贮存器的解决方案，是不容易得到的盐的晶体应选择种子悬浮液中。例如，应避免使用高浓度的磷酸盐，硫酸盐，钙和镁。
- 后来在一个项目中，寻找具有不同的单元电池的结晶，以改善衍射，避免孪晶的晶体，得到晶体，适合在结合配体，它可能是很重要的。在该阶段只有最适合的晶体（ 如那些衍射最好）应该被用来使种子的库存。有时重复几轮microseeding都是必需的，其中仅“最佳“晶体是用来使种子股票的后续回合。如果可能的话，一个”中性“沉淀剂，如PEG 3000应该被用来在暂停晶种，以鼓励新的晶体接触和结晶复合物，可能是不稳定的高盐的解决方案12。
- 经典microseeding实验中，在一个单一的结晶状态时，常常是有帮助以下的一个有希望的条件，并在随后的优化的鉴定。它往往是必要的稀释种子储备，以获得每一滴水晶体所需的号码。 “组合”microseeding实验（其中一系列的增加摊薄种子储备被添加到一个结晶条件）是一种快速的方法找到种子股票的最佳稀释。下面这种方法进行说明。
2。种子股票的制备
- 做一个圆形玻璃探头使用本生灯火焰玻璃巴斯德吸管。
- 加热靠近中间的吸管，直到它变得柔软，然后迅速从火焰中删除，并把它画出来了拉开两端。旨在拉动玻璃下降到直径小于0.25毫米。
- 打破玻璃的地步，它是在0.25毫米和简要投身破碎端插入火焰。重复该步骤直至玻璃与形成于末直径为〜0.75毫米半球。这个探针是用于破碎晶体材料是有用的，因为它是适当的大小，以0.01-1.0毫米刻度撞击固态物体和它不损坏的结晶托盘子阱或盖玻片的塑料表面上。较大的探针（〜1.0毫米）可以更有效地粉碎小晶体，因为晶体的玻璃和塑料之间被困。
- 将装有冰种珠1.5 ml离心管中。
- 使用双目显微镜或晶体成像系统检查预先建立结晶托盘，然后选择一个或多个APpropriate从托盘井从中收获的种子储备一代的晶体材料。任何材料都可以使用，包括细的针头，球晶，微晶和不规则，形成不良的结晶。该种子库应尽快之后晶体停止生长做，因为旧的材料更可能是部分交联，从而减少其在播种试验适用性。如有疑问形式存在于结晶材料可以收获是否是盐或蛋白质的井可以用前开口的UV荧光显微镜或成像系统的可视化，或者结晶性材料可以原位 X射线衍射分析来进行在托盘。当使用前一种方法的蛋白质晶体将紫外光照射下发出荧光，盐晶体将会出现无色。
- 打开选定的结晶盘好。对于96孔坐在通过上胶密封片切割围绕降盘所选以及USIng的手术刀刀片。对于24孔悬滴盘使用镊子取出盖玻片。反转盖玻片，并将其放置在平稳的表面干净。去除50微升的储库溶液和该液体转移到含有种子珠确保管保持在冰上在整个离心管中。
- 彻底粉碎了晶体中的subwell（96孔盘）或盖玻片（24孔托盘）下降，使用2.1节准备的玻璃探头，观察在显微镜下的结果。小晶体可能需要几分钟才能彻底粉碎。这个步骤允许实验者检查该晶体是易粉碎，因此不交联的，并且还认为它们不是盐晶体。盐晶体产生独特的点击，可以听到和感觉到他们被压碎时。如果晶体是坚韧，不易粉碎试图获得并使用新鲜的材料。
- 删除5微升从种子珠管和t储液转拨到等效子阱（坐滴实验）或盖玻片（悬滴实验）含有结晶材料被收割。吸取该液体向上和向下的5-6倍，以悬浮尽可能多的子井或盖玻片的内容成为可能。返回暂停的种子珠管和重复此步骤两次以上，以确保尽可能多晶材料是收获的可能。
- 涡流种子珠两分钟，停止每30秒冷却冰管。
- 做系列稀释，由4至10在每个阶段的一个因素稀释种子库中贮存溶液。通常情况下，使用未稀释的种子的库存，当太多的结晶便可得到，因此使用稀释种子储备，以控制每孔的晶体的数目。在第一轮RMMS的，它不以稀释种子储备溶液是很重要的，因为更大的种子的浓度越结晶命中将获得的。
- 如果它不被使用immediately，种子股票停牌，并稀释种子储备转移至-20℃，或-80℃冰箱保存。为了避免反复冻融周期，这可能会降低种子库的功效，这种材料存放在体积小等份， 即 10〜20微升。一旦冻结，种子储备可以保持下去，直到需要。
3。建立结晶盘的
- 根据不同的结晶设施和实验者的喜好的可用性，RMMS结晶检查可以使用任一24孔托盘采用悬滴气相扩散法，或96孔托盘采用坐滴气相扩散法进行。既可以建立手工结晶盘为RMMS，使用液体处理机器人的分配器，或者是两者的组合。
- 一个典型的RMMS实验设置由专人将包括，1.0μL蛋白溶液，1.0微升结晶状态，0.5微升种子储备。一个典型的实验设置使用结晶机器人将包括，0.3μL蛋白溶液，0.2微升结晶条件，以及0.1微升种子储备。
- 到在24孔悬滴盘执行RMMS筛选中，首先，使用手动移液管，转移300μl的每个条件的从在10ml单管格式的96孔结晶状态屏幕分成4×24孔pregreased结晶每个孔托盘。
- 转让1微升来自各300微升储各结晶状态到相应塑料盖玻片从正面和背面保护背衬条被去除的表面上。
- 到1微升的每个结晶条件加1微升的蛋白质溶液，然后用0.5微升的晶种股票。反转每个盖玻片，使得液体的下降是朝下的和上面的适当的井的位置。
- 按下向下的盖玻片，压缩seali纳克油脂，形成一个安全的密封。一旦所有96滴的建立，托盘应转移到孵化器或恒温室，其范围通常为4-18℃下储存。
- 在96孔坐滴盘首先传输20-50微升的每个条件的从在深井块格式的96孔结晶状态屏幕到结晶托盘的每个相应的井进行RMMS筛选。这个转印步骤可使用一个机器人结晶，或通过手动传输使用8道移液器进行。
- 转移储层，蛋白质和种子储备溶液至滴用手或用在3.1中详述的体积的机器人。一些市售的结晶机器人不接触的分配，以及使用这样的系统中进行种子库存转移可能会导致分注器或相关联的管道的阻塞。分配的顺序是可变的：一些机器人同时免除所有的解决方案。如果这是不可能的，首先免除的蛋白质，那么水库，然后种子储备。
- 如果一个接触点胶机器人不可转让使用配有钝针的低容积的玻璃注射器的种子。通过传递它通过储液再分发种子股票进入每一滴冲洗针头。
- 使用透明密封片密封托盘并转移到孵化器或恒温室进行存储。
4。结晶盘的检查
- 想象使用一个双目显微镜或晶体成像系统中的所有结晶实验。前者通常能提供使用者更好地控制深度图和放大的程度大于后者，但更耗费时间。
- 检查每个sub-well/coverslip顺序和记录晶体形成的任何证据。实验应检查一次，每24小时5天以下，并成立了Ñ随后连用7天为4周。
- 经常需要RMMS的多次循环优化衍射级晶体产生之前。
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Representative Results
一个RMMS实验（A）示例
以证明RMMS筛查的有效性，我们应用此方法到的鸡蛋白溶菌酶（HEWL）和牛肝脏过氧化氢酶（BLC）的结晶。这两个酶是突出的结晶和结构上良好表征的目标15，16。这样既提供出色的考试科目，用以说明增强结晶成功率可达到与RMMS。结晶实验是建立于96孔用液体处理机器人坐滴盘的格式。 HEWL和BLC的溶液通过分别在20mM的Tris-HCl，150mM的氯化钠，pH值7.5，加入将冻干粉末至终浓度为100毫克/毫升和20毫克/毫升制备。对于每个蛋白质三个96条件结晶筛选被使用; JCSG，PACT和睡眠。用50微升的水库容积，以及2微升进行无microseeding结晶检查坐滴含有1微升的蛋白质溶液和1μl的贮存溶液。这六个托盘被存放在一个恒温室在18℃，用双目显微镜日常检查。被记录了晶体生长的任何证据。五天后，从每个托盘的单个条件被发现支持晶材料的生长被选择并用于种子储备一代。 RMMS筛选中进行，作为非RMMS筛选，所不同的是2.5微升坐滴含有1微升的蛋白质溶液，1微升的储库溶液和0.5μl的种子储备被使用。所有六个RMMS盘被转移到一个恒温室在18℃，用双目显微镜的日常检查。五天后，这两种蛋白的RMMS托盘进行了检查，并记录滴用晶体的数目。 图1总结了该实验的结果，并提供了定量分析。为HEWL一个4〜10倍增加结晶的成功率，相比于非种子托盘，观察到当RMMS施加到这种蛋白质。值得注意的是背光补偿的睡眠屏只有一个条件时，可以得到晶体相比，确定以下使用RMMS 55的条件。进一步，有一个3和7倍的增加分别使用JCSG和PACT屏幕的成功率在BLC结晶。在所有情况下，与不考虑结晶屏幕的使用RMMS筛分，得到结晶的显著更大的总数比非RMMS筛选。描述的RMMS筛选实验重复使用1:100稀释的种子产生了显著较少访问时相比，未稀释的种子库被使用，进行首轮RMMS实验时，加强使用未稀释的股票的规定。对于这两种蛋白质有在晶体质量没有明显的变化，作为判断的大小，形态和双折射。在DIF的比较评估使用RMMS相对于常规的筛选方法所产生的晶体的分数质量超出了本研究的范围，但是，使用这两种蛋白质从RMMS和非RMMS屏幕分离的晶体的一个子集的同步加速器辐射初始初步衍射分析表明，存在于在衍射质量几乎没有变化，作为判断的基础上分辨率的限制和点轮廓。
优化每滴晶粒的数目（B）的实施例
Microseeding技术定期甘霖小晶体。因此，常常需要以稀释的种子的库存，以减少晶核的水平。此外，有时可能无法在由RMMS被发现，当播种不使用5命中条件下生长的晶体。这这种情况下，往往是有帮助使用“经典”microseeding，其中滴入几滴被设置为使用与种子股票不同稀释同一油箱的解决方案。这个C一个被系统用于使用“组合”的方式（保罗赖克特，默克研究实验室，个人通讯）上的单个板几个铅条件下进行，如示于图2。这里的一个或多个解决方案的命中（H1 - H6）被分配到结晶板的列 ，而不同的稀释的种子的库存（S1 - S9）被添加到每行的下降。因此命中溶液溶解并稀释种子储备每个组合在一个单一的板进行测试，并稀释和存在的任何趋势的适当水平可以很容易地被识别。
我们应用这个组合microseeding方法三个模型的蛋白质，木聚糖酶，索马甜和嗜热菌。每个蛋白与此前被证明不作晶体在没有播种的结晶条件测试，但始终给晶体时使用播种。用于木聚糖酶，奇异果甜蛋白和t的结晶条件hermolysin列于表2中 。建立了每个蛋白四到六个条件与每个蛋白/条件/种子股票组合的两个或三个重复，如图所示。滴由0.3微升的蛋白质，0.29微升水库的解决方案，和10 NL种子储备。使用液体处理机器人的结晶，建立所有托盘。整齐的种子库和六个稀释物分别设置每个蛋白质。其他实验细节此前已报道12。每一滴水得到的晶体的平均数量绘制在种子库在图3的稀释。这些数据表明，晶体的数目如下一个添加了种子的数量大致呈线性关系。对于这三个蛋白质测试，须1时10分-3〜1:10 -6稀释，以获得每下降1-10晶体。
表1中。材料清单 。
| 结晶鸡尾酒 | 每个托盘成立滴数 | |
| 木聚糖酶（36毫克/毫升） | 2 1M硫酸铵，0.1M的Tris-HCl pH 8.5的 | 3 |
| 木聚糖酶（36毫克/毫升） | 30％（重量/体积）聚乙二醇4000，0.2M醋酸钠，0.1M的Tris-HCl pH 8.5的 | 3 |
| 木聚糖酶（36毫克/毫升） | 4米甲酸钠 | 3 |
| 木聚糖酶（36毫克/毫升） | 3.5 1M硫酸铵，250mM的氯化钠，50mM的磷酸钠/钾pH为7.5 | 3 |
| 木聚糖酶（36毫克/毫升） | 1.5磷酸钾pH值7.0 | 3 |
| 甜蛋白（30毫克/毫升） | 30％（重量/体积）聚乙二醇4000，0.2M乙酸铵，0.1M柠檬酸钠pH 5.6 | 2 |
| 20％（重量/体积）的PEG 4000，20％（V / V）2 - 丙醇，0.1M柠檬酸钠pH 5.6 | 2 | |
| 甜蛋白（30毫克/毫升） | 30（％重量/体积）聚乙二醇8000，0.2M硫酸铵，0.1M二甲胂酸钠pH 6.5的 | 2 |
| 甜蛋白（30毫克/毫升） | 20（％重量/体积）聚乙二醇8000，0.2M乙酸镁，0.1M二甲胂酸钠pH 6.5的 | 2 |
| 甜蛋白（30毫克/毫升） | 2 1M硫酸铵，0.1M的Tris-HCl pH 8.5的 | 2 |
| 甜蛋白（30毫克/毫升） | 1.5M的硫酸锂，100毫米的HEPES pH值7.5 | 2 |
| 嗜热菌蛋白酶（15毫克/毫升） | 20.0％（重量/体积）的PEG 6000，100 mM柠檬酸pH 5.0的 | 3 |
| 嗜热菌蛋白酶（15毫克/毫升） | 1.26 1M硫酸铵，200mM的硫酸锂，100mM的Tris-盐酸pH8.5的 | 3 |
| 嗜热菌蛋白酶（15毫克/毫升） | 10％（V / V）MPD，100毫米BICINE pH值9.0 | 3 |
| 嗜热菌蛋白酶（15毫克/毫升） | 800毫米琥珀酸pH值7.0 | 3 |
表2。在组合microseeding实验中所用蛋白质溶液和结晶条件 。
图1。 （一）RMMS和非RMMS结晶筛选实验的比较 。支持条件晶体生长的绿色，条件不支持晶体生长是灰色的。在种子储备一代选用的条件是粉红色。结晶筛选标记如下（ⅰ）鸡蛋白溶菌酶，JCSG，非RMMS，（ⅱ）鸡蛋白溶菌酶，JCSG，RMMS，（ⅲ）鸡蛋白溶菌酶，PACT，非RMMS，（ⅳ）母鸡例如：克清溶菌酶，PACT，RMMS，（五）鸡蛋清溶菌酶，睡眠，非RMMS，（六）鸡蛋清溶菌酶，睡眠，RMMS，（七）牛肝过氧化氢酶，JCSG，非RMMS，（八）牛肝过氧化氢酶，JCSG，RMMS，（九）牛肝过氧化氢酶，PACT，非RMMS，（x）的牛肝过氧化氢酶，PACT，RMMS，（十一）牛肝过氧化氢酶，睡眠，非RMMS，（十二）牛肝过氧化氢 酶，睡眠，RMMS（B）的比较中使用RMMS和非RMMS结晶筛选结晶成功率分析。对于非RMMS筛选确定为支持任何HEWL或背光补偿晶体生长结晶条件的数以蓝色显示，对于RMMS筛选确定为支持任何HEWL或背光补偿晶体生长结晶条件的人数会以红色显示。数据是基于对结晶料盘5天后设立检查。
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图2。的结晶条件及摊薄种子储备悬浮在一个例子组合microseeding实验的单一蛋白的分布 。高亮列H1-H6包含不同的结晶条件支持的靶蛋白晶体生长。高亮行S1-S7包含的靶蛋白种子股票停牌不同的稀释液。
图3。种子储备和稀释每下降一个组合microseeding实验获得的晶体平均数之间的相关性 。所用的三种蛋白质是木聚糖酶，奇异果甜蛋白和嗜热菌蛋白酶。滴设立于96孔平板的MRC使用液体处理机器人，并包括0.3微升的蛋白质，0.29微升贮存溶液，和10 NL新鲜本身的编股票。给出的数据是基于结晶料盘5天后设立检查。
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Discussion
在本文中，我们描述了RMMS蛋白质结晶筛选的一般方法。使用两个测试蛋白质一个显著增强的结晶成功率用这种方法我们已经证明。使用使用RMMS和非RMMS方法产生的结晶的一个子集的同步加速器辐射衍射分析表明使用任一方法生长，虽然以前的作者已报道，良好品质的晶体更容易在RMMS实验11生长晶体间偏差小衍射质量， 13。 HEWL和背光补偿可能给非典型的结果，因为他们特别容易结晶。我们还示出了最优化的RMMS实验中使用的晶体种子储备浓度的重要性，并展示如何，这可以通过稀释来调节，以确保衍射晶体质量的最优数量的生产。
RMMS是一种简单，高通量，高可用于补充传统的筛选方法可伸缩的方法。实验中可以设置手动或机器人，在96孔或24孔托盘，并在悬挂或坐滴格式。 RMMS的主要限制是，它是依赖于为了产生种子储备在第一时间获得某种形式的靶蛋白（或它的同源蛋白）的晶体材料。应当指出然而，并不需要高品质的结晶性物质，事实上，作者已经成功地使用微晶和无定形的沉淀物，以使种子储备。使用RMMS筛选不限于天然蛋白晶体的生长。例如，RMMS是非常适合的selenomethione或硒代半胱氨酸取代的变体生长晶体。在这种情况下，天然蛋白质的晶体可用于使种子的库存。虽然替代晶体的成核协议已被记录在案1,4，没有一个像适用于宽AR安格蛋白质作为RMMS的。
后RMMS一个组合microseeding方法可以用于优化播种的水平，以产生晶体的数据收集。这是为配体浸泡实验中经常需要大量的晶体特别有用。使用这种方法的整个结晶屏幕可以快速建立在用稀释的种子股票组合使用microseeding，以每孔产生相对少量的结晶。
总之，我们鼓励任何人从事大分子结晶，使RMMS在衍射晶体直接从它们的初始屏幕没有取得任何情况下他们的日常工作流程的一部分。
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Disclosures
我们什么都没有透露。
Acknowledgments
这项工作是由BBSRC（BB/1006478/1）的部分资助。 PRR是英国皇家学会大学研究奖学金的获得者。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| MRC 96 well crystallization trays | Molecular Dimensions Ltd | MD11-00-100 | Non-UV compatible, for screens established by robot |
| ClearView sealing sheets | Molecular Dimensions Ltd | MD6-01S | |
| Hen egg white lyzozyme | Sigma-Aldrich | L6876 | ~95% purity |
| Bovine liver catylase | Sigma-Aldrich | C9322 | >95% purity |
| Xylanase | Hampton Research | HR7-104 | |
| Thaumatin from Thaumatococcus daniellii | Sigma-Aldrich | T7630 | |
| Thermolysin from Bacillus thermoproteolyticus rokko | Sigma-Aldrich | P1512 | |
| JCSG-plus HT-96 screen | Molecular Dimensions Ltd | MD1-40 | For screens established by robot |
| PACT premier HT-96 screen | Molecular Dimensions Ltd | MD1-36 | For screens established by robot |
| Morpheus HT-96 screen | Molecular Dimensions Ltd | MD1-47 | For screens established by robot |
| Crystal Ph–nix liquid handling system | Art Robbins Instruments | 602-0001-10 | |
| Seed bead kit | Hampton Research | HR2-320 | |
| Binocular stereo microscope | Leica | M165C | |
| Scalpel blades | Sigma-Aldrich | S2646-100EA | |
| ErgoOne 0.1-2.5 μl pipette | Starlab | S7100-0125 | |
| ErgoOne 2-20 μl pipette | Starlab | S7100-0221 | |
| ErgoOne 100-1000 μl pipette | Starlab | S7100-1000 | |
| JCSG-plus screen | Molecular Dimensions Ltd | MD1-37 | For screens established by hand |
| PACT premier screen | Molecular Dimensions Ltd | MD1-29 | For screens established by hand |
| Morpheus screen | Molecular Dimensions Ltd | MD1-46 | For screens established by hand |
| Tweezers | Sigma-Aldrich | T5415-1EA | |
| CrystalClene coverslips 18 mm | Molecular Dimensions Ltd | MD4-17 | |
| 2 ml glass Pasteur pipettes | Sigma-Aldrich | Z722669 | |
| Vortex mixer | Fisher Scientific | 02-215-360 | |
| 24 well XRL crystallization tray | Molecular Dimensions Limited | MD3-11 | For screens established by hand |
| 30% (w/v) PEG 8000, 0.2 M ammonium sulfate, 0.1 M sodium cacodylate pH 6.5 | |||
| 20% (w/v) PEG 8000, 0.2 M magnesium acetate, 0.1 M sodium cacodylate pH 6.5 | |||
| 20% (w/v) PEG 6000, 100 mM citric acid pH 5.0 |
References
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