Évaluation de la viabilité neuronale à l&#39;aide de diacétate de fluorescéine-iodure de propidium Double coloration dans la culture du neurone de granulé céréalier

Lin Jiajia; Mak Shinghung; Zheng Jiacheng; Wang Jialing; Xu Dilin; Hu Shengquan; Zhang Zaijun; Wang Qinwen; Han Yifan; Cui Wei

doi:10.3791/55442

Article de méthode

Évaluation de la viabilité neuronale à l'aide de diacétate de fluorescéine-iodure de propidium Double coloration dans la culture du neurone de granulé céréalier

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DOI :

10.3791/55442

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10 mai 2017

Lin Jiajia^*¹ , Mak Shinghung^*² , Zheng Jiacheng¹ , Wang Jialing¹ , Xu Dilin¹ , Hu Shengquan² , Zhang Zaijun³ , Wang Qinwen¹ , Han Yifan²^,⁴ , Cui Wei¹^,²

¹Ningbo Key Laboratory of Behavioral Neuroscience, Zhejiang Provincial Key Laboratory of Pathophysiology, School of Medicine, Ningbo University, ²Department of Applied Biology and Chemistry Technology, Institute of Modern Chinese Medicine, The Hong Kong Polytechnic University, ³Institute of New Drug Research, Guangdong Provincial Key Laboratory of Pharmacodynamic, Constituents of Traditional Chinese Medicine & New Drug Research, College of Pharmacy, Jinan University, ⁴International Joint Laboratory (SYSU-PolyU HK) of Novel Anti-Dementia Drugs of Guangdong

^* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

Ce protocole décrit comment mesurer avec précision la viabilité neuronale à l'aide de la diurétate de fluorescéine (FDA) et de la double coloration à l'iodure de propidium (PI) dans des neurones de granules cérébelleux cultivés, une culture neuronale primaire utilisée comme modèle in vitro dans les recherches en neuroscience et neuropharmacologie.

Résumé

Les neurones de granules céréaliers cultivés primaires (CGN) ont été largement utilisés comme modèle in vitro dans les recherches en neurosciences et neuropharmacologie. Cependant, la coexistence de cellules gliales et de neurones dans la culture CGN pourrait entraîner des biais dans l'évaluation précise de la viabilité neuronale. Le diacétate de fluorescéine (FDA) et la double coloration à l'iodure de propidium (PI) ont été utilisés pour mesurer la viabilité cellulaire en évaluant simultanément les cellules viables et mortes. Nous avons utilisé la double coloration FDA-PI pour améliorer les sensibilités des tests colorimétriques et pour évaluer la viabilité neuronale dans les CGN. En outre, nous avons ajouté des taches d'ADN fluorescentes bleues ( p. Ex. Hoechst) pour améliorer la précision. Ce protocole décrit comment améliorer la précision de l'évaluation de la viabilité neuronale en utilisant ces méthodes dans la culture CGN. En utilisant ce protocole, le nombre de cellules gliales peut être exclu en utilisant une microscopie à fluorescence. Une stratégie similaire peut être appliquée pour distinguer le gli indésirableAl-cellules de neurones dans diverses cultures de cellules mixtes, telles que la culture corticale primaire et la culture de l'hippocampe.

Introduction

Les tests de cytotoxicité colorimétrique, tels que le dosage du bromure de 3- (4, 5-diméthyl-2-thiazolyl) -2, 5-diphényl-2-H-tétrazolium (MTT), sont couramment utilisés pour mesurer la viabilité cellulaire in vitro . Les neurones de granules céréaliers cultivés primaires (CGN) provenant de rats sont sensibles à diverses neurotoxines, y compris l'ion 1-méthyl-4-phénylpyridinium, le peroxyde d'hydrogène et le glutamate ¹ ^, ² . Par conséquent, les cultures CGN peuvent être utilisées comme un modèle in vitro dans le domaine des neurosciences. Les cultures de CGN peuvent contenir une vari....