Summary
Cytoskeletale ophidselse teknikker give et kraftfuldt værktøj til at undersøge Patofysiologi og Biofysisk ændringer, der går forud for irreversible degenerative begivenheder. Dette manuskript demonstrerer brugen af disse teknikker på nervus ulnaris bedøvede rotter.
Abstract
Elektrofysiologi muliggør en objektiv vurdering af perifere nerve funktion in vivo. Traditionelle nerve varmeledning foranstaltninger såsom amplitude og latenstid opdager kronisk axon tab og demyelinering, henholdsvis. Cytoskeletale ophidselse teknikker "af tærsklen tracking" udvide disse foranstaltninger ved at give oplysninger om aktiviteten af Ionkanaler, pumper og varmevekslere, der vedrører akut funktion og kan gå forud for degenerative begivenheder. Som sådan, kan brug af cytoskeletale ophidselse i dyremodeller for neurologiske lidelser give en nyttig i vivo foranstaltning for at vurdere nye terapeutiske indgreb. Her beskriver vi en eksperimentel opsætning for flere foranstaltninger af motor cytoskeletale ophidselse teknikker i rotte nervus ulnaris.
Dyrene er bedøvede med isofluran og overvåges nøje for at sikre konstant og tilstrækkelig dybde af anæstesi. Kropstemperatur, åndedræt sats, puls og mætning af ilt i blodet overvåges løbende. Cytoskeletale ophidselse undersøgelser udføres ved hjælp af perkutan stimulation af nervus ulnaris og optagelse fra hypothenar musklerne i forelimb pote. Med korrekte elektrode placering registreres en tydelig sammensatte muskel handling potentiale, der øger i amplitude med stigende stimulus intensitet. En automatiseret program er derefter udnyttet til at levere en række af elektriske impulser, der genererer 5 specifikke ophidselse foranstaltninger i følgende rækkefølge: stimulus svar funktionsmåde, styrke varighed tid konstant, tærskel electrotonus, nuværende-tærskel forholdet og opsving cyklus.
Data præsenteres her viser, at disse foranstaltninger er gentagelig og vise lighed mellem venstre og højre nervus nerver når vurderet på samme dag. En begrænsning af disse teknikker i denne indstilling er effekten af dosis og tidspunkt under anæstesi. Omhyggelig overvågning og registrering af disse variabler bør foretages mod vederlag i forbindelse med analysen.
Introduction
Brug af elektrofysiologiske teknikker er et vigtigt redskab for i vivo undersøgelse af perifere nervefunktion i neurologiske lidelser. Konventionelle nerve varmeledning metoder udnytte supramaximal stimuli til at registrere motor aktionspotentialet amplitude og latenstid. Disse teknikker derfor give nyttige oplysninger om antallet af udførelse fibre og varmeledning hastigheden af de hurtigste fibre. En værdifuld supplerende værktøj er cytoskeletale ophidselse test. Denne teknik bruger sofistikeret elektrofysiologiske stimulation mønstre til indirekte vurdere de biofysiske egenskaber af perifere nerver, som aktiviteten af Ionkanaler, energiafhængige pumper, ionbytning processer og membran potentiale 1.
Cytoskeletale ophidselse test er almindeligt udnyttet i de kliniske omgivelser at undersøge patofysiologiske processer og effekter af terapeutiske interventioner på forskellige neurologiske lidelser. Vigtigere, cytoskeletale ophidselse foranstaltninger er følsomme over for terapeutiske indgreb, der påvirker perifere nervefunktion såsom intravenøs immunglobulin (IVIg) terapi2,3 og calcineurin inhibitor (CNI) kemoterapibehandling 4. selv om disse undersøgelser har givet vigtige indsigter, kliniske undersøgelser ofte udelukker undersøgelse af tidlig sygdom træk og nye terapeutiske muligheder5. Derfor har brugen af disse metoder i dyremodeller for neurologiske lidelser for nylig fået trækkraft6,7,8,9. Ja, disse metoder giver en mulighed for at forstå de specifikke nerve ophidselse ændringer forbundet med disse lidelser, dermed fremme Translationel forskning.
Proceduren beskrevet her er en simpel og pålidelig metode til at registrere cytoskeletale ophidselse foranstaltninger på nervus nerverne af intakte rotter.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle eksperimentelle procedurer beskrives her overholdt Animal Care og etiske udvalg i UNSW Sydney og blev udført i overensstemmelse med National Health og Medical Research Rådet (NHMRC) af Australien regler for dyreforsøg.
1. eksperimentel sæt op
Bemærk: 12 uger gamle, kvindelige Long-Evans rotter blev anvendt i denne procedure.
- Bedøver rotte i en induktion kammer ved hjælp af 4% isofluran og 1 L pr. min O2 strømningshastighed. Bekræfte tilstrækkelig anæstesi ved at teste for den oprettende refleks og sikre dens fravær før at fjerne dyret fra induktion kammer. Bemærk at forskellige bedøvelsesmiddel agenter har differentieret indvirkning på nerve ophidselse10.
- Sikkert placere dyrets snude i næsen kegle vedhæftet fil og levere en vedligeholdelsesdosis af 2,5% isofluran og 1 L pr. min O2 strømningshastighed.
- Bekræfte passende anæstesi ved at kontrollere for både pedal tilbagetrækning og cornea reflekser ved at knibe dyrets tæer og forsigtigt røre sit øje.
Bemærk: Anvendelse af vet salve på øjne, til at forhindre tørhed under bedøvelse, er anbefalede men ikke afgørende, da proceduren, der tager typisk 30 min pr. dyr. - Opretholde kropstemperaturen af rotte ved 37 ° C ved brug af en feedback kontrolleret opvarmning mat og en rektal termometer sonde. Sæt varme mat og integreret krop temperatursensor til 40 ° C til at forhindre eventuelle skader i huden, der opstår med højere temperaturer.
Bemærk: Det anbefales at overvåge og registrere fysiologiske foranstaltninger (puls, iltmætning, kroppens temperatur og respirationsfrekvens) hver 10s med brug af et dyrs fysiologiske overvågningssystem. Optimal optagelse procedurer bør omfatte lokale måling af lemmer temperatur som perifere temperaturen kan være koldere end kerne temperatur11 (figur 1). - Antiseptisk handsker og altid bruge instrumenter, der er blevet rengjort med 70% ethanol, for at opretholde en patogen-frit miljø under hele proceduren.
2. elektrofysiologiske sæt op
- Brug lav impedans platin elektroencefalografi (EEG) nål elektroder til denne procedure.
- Forberede optagelse nål elektroder ved at indsætte optagelse nål elektrode (fig. 1, angivne i lilla) gennem hypothenar muskel og referenceelektrode gennem den dorsale aspekt af 4 ciffer (figur 1, angivet i orange) til at registrere sammensatte muskel handling potentialer (CMAPs).
- Placer jorden elektrode gennem huden på den overlegne aspekt af underarmen mellem at stimulere og optagelse elektroder (figur 1, anført i grøn). Vær forsigtig ved indsættelse af elektroder for at undgå muskelvæv.
- Forberede de perkutan stimulerende nål elektroder ved at indsætte katoden (figur 1, mærket i blå) ca 4 mm distalt for den kubiske tunnel ved albuen. Indsæt anoden (figur 1, mærket i rød) ca. 1 cm proksimalt gennem huden af axillar regionen.
Figur 1: et skematisk diagram over de nål elektrode placeringer i rotte forelimb. Katode (blå) indsættes ca 4 mm distalt for den kubiske tunnel ved albuen og anoden (rød) er ca 1 cm proksimalt gennem huden af axillar regionen. Jorden nål elektrode (grøn) indsættes gennem huden på den overlegne aspekt af underarmen mellem at stimulere og optagelse elektroder. Optagelse (lilla) og reference (orange) nål elektroder er indsat gennem hypothenar muskel og den dorsale aspekt af 4th ciffer. Temperatursonden (grey) er placeret på den overlegne aspekt af thenar musklen. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
3. cytoskeletale ophidselse procedurer
- Udføre den gnavere motoriske nerve TRONDNF protokol ved hjælp af en semi-automatiske, kontrolleret cytoskeletale ophidselse computerprogram (se tabel materialer) knyttet til en konstant nuværende stimulator og en forstærker. Fjern overskydende 50 Hz elektrisk støj ved hjælp af en 50/60 Hz støj eliminator.
- Optage CMAP fra hypothenar muskel ved samtidig visualisere CMAP morfologi og anvende en 1 ms square-bølge puls på nervus nerve med katode nål elektrode.
- Opnå optimal optagelser, nøje justere vinkel og/eller placering af katoden indtil en optimal bifasisk responskurve med konstant amplitude er nået (figur 2A.). Når den optimale position er blevet fastlagt, stabilisere katode med en flytbar elektrode indehaveren.
Bemærk: Softwaren anvendes automatisk leverer test stimuli, beskrevet nedenfor, og forøger eller formindsker den aktuelle nødvendige for at opnå tærsklen.
- Opnå optimal optagelser, nøje justere vinkel og/eller placering af katoden indtil en optimal bifasisk responskurve med konstant amplitude er nået (figur 2A.). Når den optimale position er blevet fastlagt, stabilisere katode med en flytbar elektrode indehaveren.
- Optage en stimulus-respons kurve ved trinvist stigende stimulus intensitet af en 1 ms impuls ved 1 mA indtil en maksimal svar opnås.
Bemærk: Den lilla og grønne linje i figur 2B og 2C udgør den trinvise stigning på stimulus intensitet og automatiseret system henholdsvis. Target amplitude for tærskel tracking angives automatisk til 40% af maksimal amplitude svarende til området af den stejleste skråning på stimulus-respons-kurve. Ændringen i 'threshold' (dvs. stimulus kræves for at fremkalde 40% CMAP) fremkaldt af forskellige test stimuli er variabel af fremstillet i resten af protokollen. - Optage flere cytoskeletale ophidselse parametre, herunder tærskel electrotonus (TE), nuværende-tærskel (jeg / V) forhold og nyttiggørelse cyklus (RC) som beskrevet i henvisning12.
Bemærk: Kontrolleret cytoskeletale ophidselse computerprogram vurderer tærskel (TE) med en 100 ms subthreshold depolariserende og hyperpolarizing strømninger, angives på ±20% og ±40% af kontrol tærskel aktuelle. Ændringen af tærsklen efter både depolariserende og hyperpolarizing strømninger registreres automatisk ved 14 tid-point under 100 ms polariserende aktuelle og 12 point efter den polariserende aktuelle. Tærskel electrotonus indirekte vurderer de internodal conductances og er en markør af membran potentiale. I / V forhold vurderes med 200 ms subthreshold conditioning strømninger, der veksler i intensitet fra + 50% til -100% af kontrol tærskel i intervaller på 10%. I / V forhold adskiller sig til TE, strømforhold er længere varighed, intensitet af polarisering er gradvist ændret fra + 50% til -100% og tærskel ændringen vurderes ved hver intensitet 1 ms efter den polariserende nuværende er ophørt. I / V forhold giver indsigt i de berigtigende egenskaber af axon1. RC vurderes med en parret puls paradigme, hvor en indledende supramaximal conditioning stimulus anvendes efterfulgt af en række test stimuli med bestemte intervaller fra 2,5 ms til 200 ms. denne parameter tester en veldefineret serie af begivenheder, der sker i den nodal region af axon efter supramaximal stimulation. Disse arrangementer omfatter, inaktivering af spænding-gated Na+ kanaler, hvilket gør det vanskeligere at fremkalde en efterfølgende reaktion og er kvantificeret ved refraktion og den relative refraktær periode 1. Dette efterfølges af en opladning af internodium og en periode med øget ophidselse ved hurtig kalium kanaler, kvantificeres ved superexcitability mellemkomst. Endelig, langsomt aktiverende kalium kanaler mægle en sene periode af reduceret ophidselse, kvantificeres som subexcitability.
- Optage CMAP fra hypothenar muskel ved samtidig visualisere CMAP morfologi og anvende en 1 ms square-bølge puls på nervus nerve med katode nål elektrode.
Figur 2: rå data fra en cytoskeletale ophidselse test. Panel A viser abiphasic CMAP respons kurven efter trinvise stigning af stimulation af nervus nerve. Paneler B og C repræsenterer stimulus intensitet (mA) og amplitude af CMAP (mV), henholdsvis. Den grønne komponent af B og C skildrer den automatiserede gradvise fald i stimulus intensitet og tilknyttede sigmoid formet faldet i CMAP kræves for tærskel sporing.
4. indlæg Elektrofysiologi procedurer
- Overføre rotten til en separat bur, indtil den har genvundet tilstrækkelig bevidsthed for at opretholde brystbenet recumbency. Efterlad ikke et dyr, uden opsyn og i selskab med andre dyr indtil den er fuldt tilbagebetalt fra anæstesi. Når rotten er fuldt genoprettet efter anæstesi, overføre det tilbage til dets oprindelige bur.
- Ved afslutningen af undersøgelsen, aflive rotten uden smerte for dyr, fx dødbringende intraperitoneal injektion af en barbiturat (f.eks. lethabarb).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Elektrofysiologiske foranstaltninger af rotte nervus ulnaris blev opnået med denne protokol. Figur 3 viser en repræsentant optagelse fra en 12 uger gamle kvindelige lang Evans rotte venstre nervus ulnaris. Sammensatte muskel aktionspotentialet vedrører antallet af udførelse fibre, der samtidig er aktiveret. Supramaximal top respons (mV) (figur 3A) viser top respons opnås, når trinvist stigende stimulus, indtil der er ingen ændring i reaktion (figur 2B).
Figur 3B repræsenterer den aktuelle spænding (jeg / V) forholdet produceret af strøm længere varighed (200 ms) og deres intensiteter ændres i intervaller på 10% fra + 50% til -100% af tærskelværdien. I / V forhold vurderer indad og udad berigtigelse ved at undersøge forskelle i tærskel aktuelle svar på depolariserende og hyperpolarizing strømninger. Den nederste venstre kvadrant afspejler indad berigtigelse imødekommende over hyperpolarisering og aktivering af indadtil rektifikation conductances1. Den øverste højre kvadrant afspejler hurtige og langsomme K+ kanal aktivering og passiv berigtigelse imødekommende over den depolariserende aktuelle.
Internodal conductances kan undersøges ved hjælp af tærskel electrotonus bølgeform (figur 3 c) som svar på længe subthreshold depolariserende og hyperpolarizing strømninger. Både hyperpolarizing og depolariserende TE har variabler, der kan beregnes ved at tage gennemsnittet tærskel Skift mellem specifikke tidspunkter 10-20 ms, 20-40 ms og 90-100 ms.
Ændringer over tid på grund af skade eller anvendelsen af terapeutiske indgreb kan forårsage specifikke ændringer til nerve ophidselse parametre. Dette kan give nyttige i vivo oplysninger om patofysiologiske forandringer, tidlig sygdom træk og terapeutiske virkning i dyremodeller for neurologiske lidelser.
Figur 3: en repræsentativ cytoskeletale ophidselse plot. (A) stimulus-respons kurve skildrer supermaximal top respons (mV). (B) den aktuelle spænding (jeg / V) forholdet produceret af en 200ms polariserende stimulus spænder fra 50% til -100% af den nuværende tærskel. (C) tærskel electrotonus illustrerer bølgeformer som reaktion på langvarig subthreshold polariserende nuværende fremkaldes ved en 20% og 40% depolariserende (over 0 på y-aksen) og hyperpolarizing (under 0 på y-aksen) strøm. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Sekventiel cytoskeletale ophidselse test blev gennemført på den venstre og derefter højre forelimb af n = 4 rotter (12 uger gamle). Både venstre og højre optagelser blev afsluttet inden for 35 min efter tabet af pedal tilbagetrækning refleks. Analysen blev udført ved hjælp af parret ikke-parametrisk Wilcoxon underskrevet rank test. Disse analyser viste ingen væsentlige forskelle mellem venstre og højre nervus nerver for nogen af variablerne, cytoskeletale ophidselse. Blev påvist sammenhæng i standard nerve varmeledning parametre, CMAP amplitude og latenstid (fig. 4A og B) samt nerve ophidselse variabler, herunder superexcitability og tærskel electrotonus hyperpolarizing (TEh) 90-100 (figur 4 c og D). Men tidligere undersøgelser10 har angivet væsentlig ændring over tid i parametre opstår under isofluran anæstesi (Se diskussion).
Figur 4: betyde optagelser (n = 4) opnået for a peak svar b latency (C) superexcitability og (D) hyperpolarizing tærskel electrotonus (90-100ms) i både venstre (rød) og højre (blå) nervus nerver. Fejllinjer angiver standardafvigelsen på middelværdien (SEM). Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Den beskrevne fremgangsmà ¥ de viser en enkel og pålidelig, minimalt invasive teknik, der tillader vurdering af egenskaberne biofysiske og membran potentiale af axon i en kort periode. Sammenlignet med andre mere invasive teknikker, hvilket medfører eksponering af nerven, den nuværende metode til cytoskeletale ophidselse test inducerer minimal vævsskader, herigennem muliggører i vivo vurdering, der bevarer de fysiologiske forhold af den Nerven af interesse og giver mulighed for gentagne målinger.
For at sikre er ensartede resultater der et par metodiske overvejelser, der skal løses. En sådan faktor er koncentrationen og type af anæstesi. Det har været tidligere påvist, at isofluran har en effekt på hyperpolarisering-aktiveret cyklisk nukleotid-gated kanaler10. Alternativt, en injicerbar bedøvelsesmiddel blanding af medetomidine, midazolam og butorphanol blev undersøgt og også påvist effekter på nerve ophidselse over tid10. Medetomidine/midazolam/fentanyl (MMF) synes at have lille effekt på nerve ophidselse og er blevet brugt i mange nerve ophidselse undersøgelser7,13,14, selv om dens virkninger over tid på nerve ophidselse er ikke blevet systematisk undersøgt. Bemærk er denne bedøvelse vanskeligt at opnå i USA og Australien, som fentanyl er et kontrolleret stof med strenge import forordninger. Uanset valgte anæstesi, bør dosering og tid under anæstesi overvåges nøje for overvejelse på analyse.
En anden faktor til at overveje er elektrode kvalitet. På grund af kraftig og langvarig hyperpolarizing og depolariserende strøm anvendes i cytoskeletale ophidselse er undersøgelser høj kvalitet elektroder påkrævet. I denne undersøgelse, blev lav impedans platin elektroencefalografi (EEG) nål elektroder brugt. Lav impedans elektroder er typisk inden for området kilo-ohms og platin EEG elektroderne konventionelt opererer inden for 0,5 - 5 kilo-ohm sortiment, som kan betragtes som lav impedans elektroder. Programmet cytoskeletale ophidselse kan optage den nuværende produktion og beregne impedans kontra mål ud af spænding og det tidligere er fastslået, at nuværende var stabile i 30 min, hvilket er den typiske længde af denne protokol15. Derudover disse elektroder har været for nylig indført i mus16 og fandtes ikke at være omfattet af polariserende effekter14,15. Derfor, polarisering ville ikke være et problem i løbet af forsøgsmetoden.
I modsætning til protokoller, at udsætte nerven af interesse, udnytte disse undersøgelser en intakt model, hvilket gør placering af stimulerende elektroder omtrentlige. Således kan nøjagtige replikering af elektrode placering i longitudinelle studier være svært. På trods af dette viste en tidligere undersøgelse med forskellige anæstesi god repeterbarhed af 30/34 albuenerven ophidselse parametre på tværs af 3 separate undersøgelser svarende til den, set i tibial og caudale nerver13. Desuden i denne undersøgelse viste sammenligning af højre og venstre CMAPs sammenhæng (figur 4), tyder på, præcis og korrekt elektrode placering er tilstrækkelige til at opveje denne mulige begrænsning.
Der er flere vigtige skridt i processen med at erhverve CMAP svar. Korrekt og ensartet placering af den stimulerende nål-elektrode er afgørende for reproducerbare målinger af amplitude. Desuden er det vigtigt at sikre korrekt placering af optagelse nål elektroder for at minimere baggrundsstøj. Derfor visualisere samtidig responskurve mens placere den stimulerende nål-elektrode er afgørende at bekræfte konsekvent placering.
Denne minimalt invasiv teknik på dyremodeller for neurologiske lidelser kan være et værdifuldt redskab til at undersøge patofysiologiske forandringer og tidlig sygdom træk. Disse kan fungere som biomarkører og lette undersøgelsen af nye terapeutiske interventioner i forbindelse med adfærdsmæssige foranstaltninger af håndfunktion. Desuden, kan validering af disse teknikker i gnavere aktiverer undersøgelse af farmakokinetiske og farmakodynamiske relationer af nye forbindelser. Dette kan give bedre oversættelse af terapeutiske forbindelser forud for fase 1 og 2 kliniske forsøg
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ikke noget at oplyse.
Acknowledgments
Projektet blev støttet af Lundbeckfonden, Novo Nordisk Fonden, statens medicinske Forskningsråd, af Ludvig og Sara Elsass Foundation, Institut for forskning i Neurologi og Jytte og Kaj Dahlboms fond. Gert er understøttet af en tidlig karriere Post-Doctoral Fellowship of National sundhed og Medical Research Rådet for Australien (#1091006)
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| QTracS Program | Digitimer Ltd. | Axonal excitability program | |
| AM-Systems 2200, Analog Stimulus Isolator, 2200V/50Hz | SDR Scientific | 850005 | Stimulator |
| High Performance AC Amplifier Model LP511 | Grass Technologies | Amplifier | |
| Humbug 50/60Hz Noise eliminator | Quest Scientific Instruments | 726310 | Noise eliminator |
| Low Impedance Platinum Monopolar Subdermal Needle Electrodes | Grass Technologies | F-E2-24 | Recording electrodes, 10 mm length, 30 gauge |
| Low Impedance Platinum Electroencephalography Needle Electrodes | Cephalon | 9013L0702 | Stimulating electrodes, 10 mm length, 30 gauge |
| Multifunction I/O Device Model USB-6341 | National Instruments | Multifunction input/output device | |
| Iron Base Plate IP | Narishige Scientific Instrument Laboratory | Used for holding stimulating needle electrode in place | |
| Rotating X-block X-4 | Narishige Scientific Instrument Laboratory | Used for holding stimulating needle electrode in place | |
| Magnetic Stand GJ-8 | Narishige Scientific Instrument Laboratory | Used for holding stimulating needle electrode in place | |
| Micromanipulator M-3333 | Narishige Scientific Instrument Laboratory | Used for holding stimulating needle electrode in place |
References
- Krishnan, A. V., Lin, C. S. -Y., Park, S. B., Kiernan, M. C. Axonal ion channels from bench to bedside: a translational neuroscience perspective. Prog neurobiol. 89 (3), 288-313 (2009).
- Lin, C. S. -Y., Krishnan, A. V., Park, S. B., Kiernan, M. C. Modulatory effects on axonal function after intravenous immunoglobulin therapy in chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy. Arch neurol. 68 (7), 862-869 (2011).
- Park, S. B., Goldstein, D., Lin, C. S. -Y., Krishnan, A. V., Friedlander, M. L., Kiernan, M. C. Acute abnormalities of sensory nerve function associated with oxaliplatin-induced neurotoxicity. J. Clin. Oncol. 27 (8), 1243-1249 (2009).
- Arnold, R., Pussell, B. A., Pianta, T. J., Lin, C. S. -Y., Kiernan, M. C., Krishnan, A. V. Association between calcineurin inhibitor treatment and peripheral nerve dysfunction in renal transplant recipients. Am. J. Transplant. 13 (9), 2426-2432 (2013).
- Boërio, D., Greensmith, L., Bostock, H. Excitability properties of motor axons in the maturing mouse. J. Peripher. Nerv. Syst. 14 (1), 45-53 (2009).
- Boërio, D., Kalmar, B., Greensmith, L., Bostock, H. Excitability properties of mouse motor axons in the mutant SOD1(G93A) model of amyotrophic lateral sclerosis. Muscle & Nerve. 41 (6), 774-784 (2010).
- Alvarez, S., Calin, A., Graffmo, K. S., Moldovan, M., Krarup, C. Peripheral motor axons of SOD1(G127X) mutant mice are susceptible to activity-dependent degeneration. Neurosci. 241, 239-249 (2013).
- Fledrich, R., et al. Soluble neuregulin-1 modulates disease pathogenesis in rodent models of Charcot-Marie-Tooth disease 1A. Nat. Med. 20 (9), 1055-1061 (2014).
- Vianello, S., et al. Low doses of arginine butyrate derivatives improve dystrophic phenotype and restore membrane integrity in DMD models. FASEB J. 28 (6), 2603-2619 (2014).
- Osaki, Y., et al. Effects of anesthetic agents on in vivo axonal HCN current in normal mice. Clin Neurophysiol. 126 (10), 2033-2039 (2015).
- Biessels, G. J., et al. Phenotyping animal models of diabetic neuropathy: a consensus statement of the diabetic neuropathy study group of the EASD (Neurodiab). J. Peripher. Nerv. Syst. 19 (2), 77-87 (2014).
- Boërio, D., Greensmith, L., Bostock, H. A model of mouse motor nerve excitability and the effects of polarizing currents. J. Peripher. Nerv. Syst. 16 (4), 322-333 (2011).
- Arnold, R., Moldovan, M., Rosberg, M. R., Krishnan, A. V., Morris, R., Krarup, C. Nerve excitability in the rat forelimb: a technique to improve translational utility. J. Neurosci. Methods. 275, 19-24 (2017).
- Moldovan, M., Alvarez, S., Krarup, C. Motor axon excitability during Wallerian degeneration. Brain. 132 (Pt 2), 511-523 (2009).
- Madison, R. D., Robinson, G. A., Krarup, C., Moldovan, M., Li, Q., Wilson, W. A. In vitro electrophoresis and in vivo electrophysiology of peripheral nerve using DC field stimulation. J. Neurosci. Methods. 225, 90-96 (2014).
- Moldovan, M., Krarup, C. Evaluation of Na+/K+ pump function following repetitive activity in mouse peripheral nerve. J. Neurosci. Methods. 155 (2), 161-171 (2006).
