Summary
Идентификация Дофаминовый рецептор D1-альфа в прилежащем имеет решающее значение для прояснения дисфункции рецептор D1 во время болезни центральной нервной системы. Мы исполняли Роман РНК в situ гибридизация пробирного визуализировать одной молекулы РНК в области конкретных мозга.
Abstract
В центральной нервной системе подтип рецепторов D1-альфа (Drd1α) является наиболее распространенных рецептора допамина (DA), которая играет жизненно важную роль в регулировании нейрональных роста и развития. Однако лежащих в основе Drd1α рецептор аномалии посреднической поведенческих реакций и модулирует функции памяти рабочих механизмов по-прежнему неясны. С помощью Роман РНК в situ гибридизация пробирного, текущего исследования определили допамина Drd1α рецептор и тирозина гидроксилазы (TH) РНК выражение от связанных с DA цепь в nucleus accumbens (NAc) области и региона substantia nigra (SNR), соответственно. Drd1α выражение в Североатлантическом совете показывает «дискретные точка» окрашивание шаблон. Четкие половые различия в Drd1α выражении наблюдались. В противоположность этому й показывает шаблон «кластерной» окрашивание. Что касается й выражение самок крыс отображается выражение выше сигнала на ячейку относительно Мыжские животные. Представленные здесь методы предоставляют Роман в situ гибридизация техника для изучения изменений в дисфункции системы допамина при прогрессировании заболевания центральной нервной системы.
Introduction
Дисфункция системы допамина полосатой участвует в прогрессии клинические симптомы, наблюдаемые в нескольких нейрокогнитивный заболеваний. Приемные устройства допамина D1 присутствуют в префронтальной коре (ПФУ) и полосатой регионах мозга и сильно влияние когнитивные процессы1, включая рабочей памяти, временной обработки и тепловоз поведение2,3 , 4 , 5 , 6 , 7. предыдущие исследования раскрыты, что изменения приемные устройства допамина D1 были связаны с прогрессированием внимания гиперактивности дефицита расстройства (СДВГ)8, нейрокогнитивный Симптомы шизофрении9, 10 и стресс восприимчивость11. Конкретно в шизофрении, позитронно-эмиссионная томография (ПЭТ) исследования показали, что способность привязки D1 рецепторы допамина в префронтальной коре высоко была связана с познавательных дефицитов и наличие негативных симптомов11. Дендритных рост возбуждающих нейронов в префронтальной коре, регулируется рецептора допамина D1 снимает стресс восприимчивости. Кроме того сногсшибательно рецептор D1 в медиальной префронтальной коры головного мозга (mPFC) нейронов может повысить социальный поражения стресс индуцированного социальной избежания12.
Здесь мы представляем Роман технику РНК в situ гибридизация визуализировать одной молекулы РНК в клетке с образцами тканей свежемороженые. Настоящий метод имеет несколько преимуществ по сравнению с методами, которые существуют в рамках текущей литературы. Во-первых нынешняя процедура сохраняет контекст пространственных и морфологических ткани и была исполнена на образцы тканей свежемороженые так, что другие процедуры, требующие свежие, невстроенный тканей могут быть объединены с текущими методами. Аналогичные процедуры в формалин исправлена и парафин врезанных тканей показали, что один транскрипции урегулирование может быть достигнуто с помощью РНК в situ гибридизация техника13. Обнаружение на уровне одного транскрипции РНК предоставляет улучшенные чувствительность к низкой копии номер выражения, а также возможность сравнить экспрессии генов на уровне отдельных ячеек, которые не могут быть достигнуты другими методами обнаружения нуклеиновой кислоты, такие методы полимеразной цепной реакции (ПЦР). Кроме того текущий метод поддерживает изображения с высоким соотношением сигнал шум через весьма специфические РНК зонды которые гибридизированных к одной цели РНК стенограммы и последовательно связаны с Каскад молекул усилители сигнала для обнаружения системы. Наконец настоящий технология обеспечивает возможность оценить несколько биологических систем с ее целевой объект специфического несвободных зондов, а не ограничивая наши расследования только один класс маркеров, связанных с системой, например обнаружение белка методы иммуногистохимии.
В нашем исследовании мы использовали этот роман РНК в situ гибридизация для оценки Drd1α экспрессии рецепторов в прилежащем ядре (NAc) и тирозина гидроксилазы (TH) выражение в Substantia (SNR) F344/N крыс обоего пола. Инновационный РНК в situ гибридизация позволило нам изучить механизмы, влияющие на поглощение да и да релиз одновременно, улучшение нашего понимания сложности системы полосатой да. Здесь, мы описать процедуру свежемороженые мозга ломтиками и предоставляют методы анализа данных для различных шаблонов окрашивание: «дискретные точка» или «группы».
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Экспериментальный протокол был одобрен животное уход и использование Комитет (IACUC) в университете Южной Каролины (федеральные гарантии номер: A3049-01).
1. Подготовка секций свежий замороженные мозга
- Используйте F344/N штамм крыса: три крыс каждого пола, 13 месяцев, вес примерно 320 g тела.
- Отрегулируйте севофлюран концентрации до 5% (передозировка севофлюран). После дыхание останавливается за дополнительную минуту продолжение севофлюран экспозиции.
- Обезглавить крыса и удалить мозга.
- Опускайте мозга крысы в жидком азоте для 15 s в течение 5 мин ткани урожая.
- Сбалансировать мозга до-20 ° C в криостат для 1 h.
- Вырезать 30 мкм секций и перенести на слайды (см. Таблицу материалы).
- Выберите разделы из ядра accumbens региона, примерно 2.76 мм до 2,28 мм впереди Bregma14.
- Непрерывно срез мозга крысы от обонятельные луковицы через ядро accumbens региона согласно структуре стереотаксического мозга крысы.
- Установите образцы на слайды. Держите разделы при-20 ° C для 10 мин для просушки.
- Сразу же погружайте слайды в предварительно охлажденные параформальдегида 4% за 1 час при 4 ° C.
- Место слайды в рост этанола градиента при комнатной температуре (RT): 50% EtOH 5 мин; 70% EtOH 5 мин; и 100% EtOH за 5 мин.
- Повторите с свежими 100% EtOH.
- Место слайды на чистую фильтровальную бумагу, а воздух сухой.
- Нарисуйте барьер вокруг каждого раздела с помощью пера барьер (см. Таблицу материалы). Пусть барьер сухой полностью за 1 мин.
2. Предварительная обработка участков мозга
- Включите духовку и установите температуру до 40 ° C.
- Добавить 3 капли (90 мкл) реагента 4 предварительной обработки (см. Таблицу материалы) на каждой секции мозга (один раздел на слайд).
- Инкубировать в разделах 30 мин на RT.
- Опускайте слайды ПБС за 1 мин на RT. Repeat с свежими ПБС.
Примечание: Слайды не должны оставаться в однократном ПБС более чем на 15 мин.
3. РНК в Situ гибридизация флуоресцентные мультиплекс Assay
- Теплый целевой зонд для 10 мин при 40 ° C на водяной бане, а затем охладить до RT.
- Место реагент РНК (например, Amp FL 1-4) на RT.
- Удалите избыток жидкости из слайдов с фильтровальной бумаги и место обратно на слайд стойки (см. Таблицу материалы).
- Добавьте 3 капли (90 мкл) Drd1α зонда (C1) на интервала. Проинкубируйте втечение 2 ч при температуре 40 ° C.
- Опускайте слайды в 1 x мыть буфер для 2 минут с свежий 1 x мыть буфера на RT. Repeat.
- Удалите лишнюю жидкость из слайдов с фильтровальной бумаги и место обратно на стойку слайд (см. Таблицу материалы).
- Добавьте 3 капли (90 мкл) Amp 1-FL на интервала. Инкубируйте 30 мин при 40 ° C.
- Опускайте слайды в буфере 1 умывальник на 2 мин на RT. Repeat с свежими 1wash буфера.
- Удалите лишнюю жидкость из слайдов с фильтровальной бумаги и место обратно на стойку слайд (см. Таблицу материалы).
- Добавьте 3 капли (90 мкл) Amp 2-FL на интервала. Инкубируйте 15 мин при 40 ° C.
- Опускайте слайды в 1 x мыть буфер для 2 минут с свежий 1 x мыть буфера на RT. Repeat.
- Удалите лишнюю жидкость из слайдов с фильтровальной бумаги и место обратно на стойку слайд (см. Таблицу материалы).
- Добавьте 3 капли (90 мкл) Amp 3-FL на интервала. Инкубируйте 30 мин при 40 ° C.
- Опускайте слайды в 1 x мыть буфер для 2 мин на RT. Repeat с свежий 1 x мыть буфера.
- Удалите лишнюю жидкость из слайдов с фильтровальной бумаги и место обратно на стойку слайд (см. Таблицу материалы).
- Добавьте 3 капли (90 мкл) Amp 4-FL-Alt A на интервала. Инкубируйте 15 мин при 40 ° C.
- Опускайте слайды в 1 x мыть буфер для 2 минут с свежий 1 x мыть буфера на RT. Repeat.
- Удалите лишнюю жидкость из слайдов и немедленно место 2 капель реагента монтажа (см. Таблицу материалы) на каждой секции.
- Место coverslip 22 мм 22 мм (см. Таблицу материалы) над каждой секции мозга.
- Хранить слайды в темноте при температуре 2-8 ° C до полного высыхания.
- Включите конфокального микроскопа и переключиться на 60 X цели.
- Получите Z-стек изображений с помощью конфокального микроскопа. Смотрите дополнительные видео подробно процедуры конфокальная томография.
- Получение изображений Drd1α помечены клетки в регионе nucleus accumbens (возбуждения: 488 нм; Эмиссия: 515/30 Нм).
Примечание: Не позволяйте мозга, что разделы высохнуть между шагов инкубации.
4. анализ данных
- Полу-количественно анализировать окрашивание закономерность: «дискретных точек».
- Для идентификации отдельной ячейки из образа, выполняют DAPI окрашивание как ядерной маркер. Однако до сих пор трудно анализировать определенные части мозговой ткани, так как он имеет несколько типов клеток с неправильной формы ядрах или клетки. Здесь два опытных исследователей отдельно назначить каждой ячейки из изображений, чтобы определить область ячейки.
- Визуально оценка каждой ячейки в пределах представитель конфокальный изображений, основанный на количество точек на ячейке с помощью конкретных критериев (рис. 1B).
- Определение числа общей ячейки в каждой категории и разделить на число ячейке x100 для создания относительной частоты графики, отображающие процент частоты ячейки в пределах каждой категории для всех разделов ткани (рисунок 2A) и для мужчин и женщин отдельно (Рисунок 2E).
- Разделите сумму ячеек в рамках всех предыдущих категорий ячейке номер x100, чтобы определить совокупные частоты клеток для всех разделов ткани (рис. 2B) и для мужчин и женщин отдельно (Рисунок 2F).
- Статистически анализируем «дискретные точки «окрашивание шаблон (необязательно).
- Проверьте количество точек на ячейку предоставлять категориальной переменную, порядковый номер в природе (то есть, количество ячеек, которые попадают в каждой категории ранга низкие клеток выражения (1) к высшим выражением клетки (9)) для дальнейшего статистического анализа.
- После изучения описательной статистики, использовать три основных подхода: каминные-Haenszel статистики, тест U Манна-Уитни и Крускала-Уоллиса. Хотя точный статистический подход будет зависеть экспериментальной разработки и исследования вопрос о интерес, дерево статистических решений (рис. 4) может помочь в принятии решений, касающихся аналитический подход.
- Количественную оценку интенсивности сигнала в регионе интереса (ROI) для окрашивания шаблон: «кластеры».
- Расчет интенсивности сигнала каждого изображения, используя следующее уравнение:
Интенсивность сигнала = общая интенсивность ROI изображения - (средняя фоновая интенсивности × всего изображения район) - Подсчитать общее количество клеток в пределах изображения ROI для вычисления выражение приблизительное сигнала в клетку. Группа различия в интенсивности сигнала и изображения, а также количество клеток/изображения могут представлять интерес для рассмотрения механизмов, которые могут способствовать групповых различий в сигнал выражение/ячейку (рис. 3Б-3D).
- Расчет интенсивности сигнала каждого изображения, используя следующее уравнение:
- Статистически анализируем «кластеры» окрашивание шаблон (необязательно).
- Просмотрите выражение/сотовый сигнал для обеспечения непрерывной переменной для дальнейшего анализа. Использование двух подходов, включая независимые t тест и дисперсионный анализ (ANOVA), основанный на количество факторов между предметы включены в дизайн. Статистическое решение дерево (Рисунок 4) могут помочь в принятии решений относительно наиболее подходящего статистического подхода.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Настоящее исследование наблюдается «дискретных точек» окрашивание шаблон для выражения РНК в дофаминовых рецепторов D1-альфа (Drd1α) САС в F344/N крыс (рис. 1A). Флуоресценции отдельных сигналов были легко идентифицированы и может рассматриваться как единый «точек», каждый из которых представляет один Стенограмма РНК в ячейке. Для изображений с НАК, отображающие «дискретные точки «окрашивание шаблон мы оценивали динамический диапазон выражения с помощью полуколичественного анализа (рис. 1A, рисунок 2A& 2B). Каждая ячейка забил из «0-9», основанный на количество точек на ячейку. Этот «гибридизированные сигнал»-Оценка (H-Оценка) метод таким образом можно оценить масштабы и изменчивости для выражения Drd1α отдельных ячейках.
Полуколичественного подход для окрашивания шаблон «дискретные точка» обеспечивает категориальной переменную, порядковый номер в природе (то есть, количество точек на ячейку занимает от низкой (1) высокий (9)), для дальнейшего анализа. В настоящем исследовании мы были заинтересованы в изучении эффект одного фактора между предметов (т.е. секса) на Drd1α выражение в Североатлантическом Совете. С учетом структуры вложенных данных (то есть, для каждого животного были получены два Z-стек изображений Drd1α помечены клетки в NAc), среднее количество значений были рассчитаны для каждой категории и использоваться для статистического анализа (мужчины: n= 3, девушки: n = 3). Учитывая наш интерес к изучению различий в один между темы фактор (т.е. секса) с двумя группами (т.е., мужчины, женщины) U Манна-Уитни тест был проведен для оценки различий в средний клеток count (Рисунок 2D). U Манна-Уитни тест показал значительный основной эффект секса [z= 5,8, p≤0.001], с женской животных показано снижение средней ячейки оценка относительно Мыжские животные. Рисунок 2E и 2F иллюстрируют частота клеток в каждой категории, с помощью двух методов: относительная частота и кумулятивного частоты. Женские животных отображается значительный сдвиг в распределении, с большей частотой клеток в нижнем упорядоченные категории относительно Мыжские животные. Камин-Haenszel тест ассоциации проводился статистически изучить распределение, показывая значительный эффект секса [χ2MH(1) = 67,3, p≤0.001]. Таким образом в целом, результаты предложить четкие половые различия в Drd1α выражении в Североатлантическом Совете.
В тех случаях, когда количество копию стенограммы очень высокими сигналов может отображаться как кластеры. Здесь тирозин гидроксилазы выражение (TH) в регионе SNR показал «кластеры» окрашивание шаблон (рис. 3A). Для количественной оценки этой высокой выражая маркер, мы сначала среднем интенсивность фона из восьми различных фоновых районах. После установки порога минимальной интенсивности выше интенсивность средняя фоновая, была проанализирована интенсивность настроенное изображение как сигнал в ячейке TH.
Учитывая нашу заинтересованность в изучении один фактор между предметов (т.е. секса), независимых выборок t тест является соответствующий статистический подход. Для анализа данные были преобразованы журнала. С учетом структуры вложенных данных (то есть, для каждого животного были получены два Z-стек изображений й помечены клетки в ОСШ), средние значения были рассчитаны и использоваться для статистического анализа (мужчины: n= 2, девушки: n= 3). Женские животных отображается значительное увеличение интенсивности Средний сигнал (рис. 3B), указывающие на более высокий уровень общего й выражения, относительно Мыжские животные (t(3) = 3,3, p≤0.05). Однако, без существенных различий были замечены в либо количество ячеек на изображение (t(3) = 2.0, p> 0.05; Рисунок 3 c) или Средний сигнал выражение в ячейку (t(3) = 2.0, p> 0.05; 3D рисунок). Смешанные дизайн ANOVA, учитывая три меры как фактор в рамках темы, также показали значительное основной эффект секса [F (1,3) = 10,6, p≤0.05].
Рисунок 1: критерии полуколичественного анализа на среднее количество точек на ячейку для окрашивания шаблон: «дискретные точки». А. представитель конфокальный изображений (60 X) Drd1α выражения на различные оценки (усиленный 250% шкалы относительно Оригинальный размер изображения) б. Конкретные «забить» категории для каждого критерия. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 2: уровень допамина D1-альфа-рецепторов (Drd1α) РНК в прилежащем районе F344/N крысы. А. % относительной частоты каждой категории «оценка». B. кривой сигмоид доза ответ представила хорошо описано fit (r2= 0,99) с 95% доверительными интервалами (ди; обозначаются пунктирными линиями) было подогнать % совокупного частоты каждой категории «оценка». C. представитель конфокальный изображений (60 X) выражения Drd1α в самцов и самок крыс, которые имеют «дискретные точки «окрашивание шаблон. D. Представитель график показателя средней ячейки в самцов и самок крыс. Планки погрешностей стенд для стандартной ошибки означают (SEM). E. % относительной частоты каждой категории «оценка», сравнивая выражение в тканях от самцов и самок крыс. F. сигмоид доза реакция кривых представила хорошо описано fit (r2s = 0,99) с 95% доверительными интервалами для % совокупного частоты каждой категории «Оценка» между самцов и самок крыс. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 3: тирозин гидроксилазы РНК уровень (TH) в регионе Substantia Nigra (SNR) в F344/N крысы. А представитель конфокальный изображений (60 X; Возбуждение: 543 Нм; Эмиссия: 590/50 Нм) й выражения в самцов и самок крыс, которые имеют «кластеры» окрашивание шаблон. B-D. Представитель анализ интенсивности сигнала на ячейку. Сигнал выражение / клетки могут быть получены от количественной оценки интенсивности сигнала изображения (с набором порога интенсивности выше фона) и деления на количество клеток в пределах изображения. Планки погрешностей представляют Среднеквадратичная ошибка среднего значения (SEM). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 4: дерево принятия решений для статистического анализа рекомендуется. Дерево принятия решений обеспечивает руководящие принципы для определения, какие статистический анализ является наиболее подходящим для исследования вопроса о интерес. Дерево принятия решений не является исчерпывающим, и в некоторых случаях, возможно, другие анализы. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
В этом протоколе мы описываем Роман технику в situ гибридизация свежемороженые мозга фрагментов для оценки Drd1α экспрессии рецепторов в прилежащем ядре (NAc) и тирозина гидроксилазы (TH) выражение в регионе nigra substantia (SNR). Мы также предоставляем методы анализа данных для различных шаблонов окрашивание: «дискретные точка» или «группы».
Важнейшие шаги для успешной мультиплекс флуоресценции РНК в situ гибридизация assay включены в стоимость номера. После того, как обезглавливание крыса и удаление мозга, заморозить мозг в жидком азоте в течение 5 минут Держите мозг секций при-20 ° C до фиксации параформальдегида 4%. После 30 минут инкубации предварительной 4 слайдов не должны оставаться в ПБС более чем на 15 мин. Не позволяйте мозга, что разделы высохнуть между шагами амплификации. Конфокальная томография является очень полезным для обеспечения высокого качества изображения показаны четкие сигналы окрашивание в образец ткани. С помощью печь гибридизации будет быстро и эффективно довести образцов до 40 ° C.
Флуоресценции отдельных сигналов Drd1α экспрессии рецепторов в Североатлантическом Совете были определены как единого «точек,» каждый из которых представляет один Стенограмма РНК в ячейке. Важно отметить, что «точка» размер отражает различия в условиях пробирного, пробоподготовку и других факторов, а не уровни выражения Drd1α-РНК. Аналогично интенсивность сигнала отдельных «точек» не имеет отношение к Drd1α-РНК выражение уровня. Мы оценили динамический диапазон этого выражения как полуколичественного анализа забил с «0-9», основанный на количество точек на клетки, которые могут оценить масштабы и изменчивости для выражения Drd1α. Кроме того изучение количество точек на ячейку обеспечивает категориальной переменной для дальнейшего статистического анализа.
После изучения описательной статистики наш протокол рекомендует три основных подхода к статистически анализировать сигналы, которые представляют «дискретные точка» окрашивание шаблон, который предоставляет переменную порядковый номер для дальнейшего анализа. В частности рекомендуется непараметрический тест U Манна-Уитни, непараметрический тест Крускала-Уоллиса и каминные-Haenszel тест ассоциации. Наиболее подходят тест U Манна-Уитни и Крускала-Уоллиса, при изучении только один между темы фактор (например, пол). Кроме того камин-Haenszel тест ассоциации может быть подходящим для изучения изменений в распределении. Более сложные статистические анализы, включая обобщенные оценки уравнение или общей линейной смешанная модель может быть целесообразным при включенных дополнительных факторов. Рекомендации не являются исчерпывающими, и точный статистический подход будет зависеть экспериментальной разработки и исследования вопрос о заинтересованности.
Однако в тех случаях, когда количество копию стенограммы очень высокими, сигналов может отображаться как кластеры. Здесь й выражение в регионе SNR показал «кластеры» окрашивание шаблон. Для количественного определения высокой выражая й маркер, мы скорректировали интенсивности изображения на основе установления минимальной интенсивности порог выше интенсивность средняя фоновая и проанализированы как сигнал в ячейке TH. Сигналы, которые представляют «кластер» окрашивание шаблон, такие, как TH в SNR, может быть статистически проанализированы с помощью независимого образцы t тесты или дисперсионного анализа для сравнения групп.
Существуют ограничения этот роман РНК в situ гибридизация assay. Для «дискретные точки» окрашивание шаблон к ним относятся как к более точно определить отдельную ячейку. В нашем исследовании для идентификации отдельной ячейки из изображения, мы провели DAPI окрашивание как ядерной маркер. Однако до сих пор трудно анализировать определенные части ткани мозга, так как он имеет несколько типов клеток с неправильной формы ядрах или клетки. Здесь два опытных исследователей отдельно назначить каждой ячейки из изображений, чтобы определить область ячейки. Для окрашивания шаблон «кластеров» конкретное программное обеспечение должны быть выбраны для установки порога или автоматический клетки распознавание.
Таким образом инновационные РНК в situ гибридизация пробирного позволило нам изучить механизмы, влияющие на поглощение да и да релиз одновременно, улучшение понимания сложности системы полосатой да. В целом исследователи выиграют от романа РНК в situ гибридизация технику при расследовании неблагополучных изменения дофаминергической маркеры во время появления и прогрессирования заболевания мозга.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Существует без конфликта интересов объявить.
Acknowledgments
Настоящей работы были поддержаны национальные институты здравоохранения (NIH) грантов, HD043680, MH106392, DA013137 и NS100624. Частичные фонд оказали NIH T32 обучения Грант в биомедицинских и поведенческих наук.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| HybEZ Oven system | Advanced Cell Diagnostics | 310010 | |
| RNAscope Probe - Rn-Drd1a | Advanced Cell Diagnostics | 317031 | Color channel 1, Green |
| RNAscope Probe - Rn-Th-C2 | Advanced Cell Diagnostics | 314651-C2 | Color channel 2, Orange |
| RNAscope Fluorescent Multiplex Reagent Kit | Advanced Cell Diagnostics | 320850 | |
| ImmEdge Hydrophobic Barrier Pen | Vector Laboratory | H-4000 | |
| SuperFrost Plus Slides | Fisher Scientific | 12-550-154% | |
| 4% paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | 158127-500G | |
| Sevoflurane | Merritt Veterinary Supply | 347075 | |
| Tissue-Tek vertical 24 slide rack | Fisher Scientific | NC9837976 | |
| Tissue-Tek staining dish | Fisher Scientific | NC0731403 | |
| Precision General Purpose Baths | ThermoFisher Scientific | TSGP28 | |
| Pretreatment 4 | Advanced Cell Diagnostics | 320850 | parts of kits |
| ProLong Gold anti-fade reagent | Life Technologies | P36930 | |
| Amp 1-FL | Advanced Cell Diagnostics | 320850 | parts of kits |
| Amp 2-FL | Advanced Cell Diagnostics | 320850 | parts of kits |
| Amp 3-FL | Advanced Cell Diagnostics | 320850 | parts of kits |
| Amp 4-FL-Alt A | Advanced Cell Diagnostics | 320850 | parts of kits |
| EZ-C1 software package | Nikon Instruments | version 3.81b | |
| SAS/STAT Software | SAS Institute, Inc., | version 9.4 |
References
- Goldman-Rakic, P. S., Castner, S. A., Svensson, T. H., Siever, L. J., Williams, G. V. Targeting the dopamine D1 receptor in schizophrenia: insights for cognitive dysfunction. Psychopharmacology (Berl). 174 (1), 3-16 (2004).
- Beaulieu, J. M., Gainetdinov, R. R. The physiology, signaling, and pharmacology of dopamine receptors. Pharmacol Rev. 63, 182-217 (2011).
- Zahrt, J., Taylor, J. R., Mathew, R. G., Arnsten, A. F. Supranormal stimulation of D1 dopamine receptors in the rodent prefrontal cortex impairs spatial working memory performance. J Neurosci. 17, 8528-8535 (1997).
- Floresco, S. B., Magyar, O., Ghods-Sharifi, S., Vexelman, C., Tse, M. T. Multiple dopamine receptor subtypes in the medial prefrontal cortex of the rat regulate set-shifting. Neuropsychopharmacology. 31, 297-309 (2006).
- Arnsten, A. F., Girgis, R. R., Gray, D. L., Mailman, R. B. Novel dopamine therapeutics for cognitive deficits in schizophrenia. Biol Psychiatry. 81, 67-77 (2017).
- Ellenbroek, B. A., Budde, S., Cools, A. R. Prepulse inhibition and latent inhibition: the role of dopamine in the medial prefrontal cortex. Neuroscience. 75 (2), 535-542 (1996).
- Parker, K. L., Alberico, S. L., Miller, A. D., Narayanan, N. S. Prefrontal D1 dopamine signaling is necessary for temporal expectation during reaction time performance. Neuroscience. 255, 246-254 (2013).
- Manduca, A., Servadio, M., Damsteegt, R., Campolongo, P., Vanderschuren, L. J., Trezza, V. Dopaminergic Neurotransmission in the Nucleus Accumbens Modulates Social Play Behavior in Rats. Neuropsychopharmacology. 41 (9), 2215-2223 (2016).
- Okubo, Y., et al. Decreased prefrontal dopamine D1 receptors in schizophrenia revealed by PET. Nature. 385 (6617), 634-636 (1997).
- Abi-Dargham, A., et al. Prefrontal dopamine D1 receptors and working memory in schizophrenia. J Neurosci. 22 (9), 3708-3719 (2002).
- Shinohara, R., et al. Dopamine D1 receptor subtype mediates acute stress-induced dendritic growth in excitatory neurons of the medial prefrontal cortex and contributes to suppression of stress susceptibility in mice. Mol Psychiatry. 19, (2017).
- Okubo, Y., et al. Decreased prefrontal dopamine D1 receptors in schizophrenia revealed by PET. Nature. 385, 634-636 (1997).
- Wang, F., et al. RNAscope: a novel in situ RNA analysis platform for formalin-fixed, paraffin-embedded tissues. J Mol Diagn. 14 (1), 22-29 (2012).
- Paxinos, G., Watson, C. The rat brain in stereotaxic coordinates. , 7th ed, Elsevier Academic Press. Burlington. (2014).
