Summary
임상 선형 가속기는 암세포에 대한 광범위한 투여량 비율의 생물학적 효과를 결정하는 데 사용될 수 있다. 우리는 세포 기지를 둔 계산서를 위한 선형 가속기를 설치하는 방법 토론하고 암 줄기 같이 세포를 위한 세포 기지를 둔 세포 같이 세포는 부착한 문화로 성장한 현탁액 및 세포주에서 종양구로 성장했습니다.
Abstract
방사선 요법은 암 관리의 초석 중 하나입니다. 대부분의 암에 대 한, 그것은 가장 효과적인, 비 수술 치료 는 종양을 debulk. 여기서, 우리는 선형 가속기로 암세포를 조사하는 방법을 기술한다. 선형 가속기 기술의 발전은 방사선 요법의 정밀도와 효율성을 향상시켰습니다. 방사선 복용량 및 복용량 비율의 넓은 범위의 생물학적 효과 조사의 강렬한 영역을 계속. 선형 가속기의 사용은 임상적으로 관련된 복용량 및 복용량 비율을 사용하여 이러한 연구를 용이하게 할 수 있습니다.
Introduction
방사선 요법은 암 1, 2,3,4의많은 유형에 대한 효과적인 치료입니다. 초고용량 조사는 방사선 요법에서 비교적 새로운 것이며 선형 가속기 5의 최근기술 발전에 의해 가능하게된다. 표준 복용량 비율 조사에 비해 추가 높은 복용량 비율의 임상 이점은 단축된 처리 시간 및 향상한 참을성 있는 경험을 포함합니다. 선형 가속기는 또한 세포 배양 기반 방사선 생물학 연구를 위한 임상 설정을 제공합니다. 방사선 선량 및 용량 비율의 생물학적 및 치료적 의미는 수십 년 동안 방사선종양전문의와 생물학자의 관심의 초점이었다 6,7,8. 그러나, 여분의 높은 복용량 비율 조사 및 플래시 조사의 방사선 생물학 - 방사선의 매우 높은 복용량 속도 - 아직 철저하게 조사되지 않았습니다.
감마선 조사는 세포 배양 기반 방사선생물학 9,10,11에널리 사용된다. 방사선은 부패 방사성 동위원소 소스에서 방출 감마선에 의해 달성된다, 일반적으로 세슘-137. 방사성 소스의 사용은 매우 규제되고 종종 제한됩니다. 소스 기반 조사를 통해 광범위한 용량 비율을 테스트하는 것이 어렵고, 임상 달성 가능한 용량 비율12의생물학적 효과 분석에 그 유용성이 제한됩니다.
복용량 과 복용량 속도 효과 모두 설명 하는 여러 연구 되었습니다12,13, 14,15,16,17. 이러한 연구에서는, 선형 가속기에서 생성된 방사성 동위원소 또는 X선으로부터 생성된 감마-조사가 모두 사용되었다. 폐암, 자궁경부암, 아교모세포종 및 흑색종을 나타내는 다양한 세포주를 사용했습니다. 세포 생존, 세포 주기 체포, 세포 사멸 및 DNA 손상에 대한 방사선 효과는 판독12,13,14,15,16,17로 평가되었다. . 여기서, 우리는 선형 가속기를 사용하여 X선 기반 방사선을 전달함으로써 임상적으로 관련 방사선 선량 및 선량의 생물학적 효과를 정의하는 방법을 기술한다. 이 연구 결과는 생물학자, 방사선 종양전문의 및 의학 물리학자 사이 가까운 협력으로 수행되어야 합니다.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. 현탁액 세포 배양을 위한 세포 준비
- 배양 신경교종 줄기형 세포는 37°C에서 5% CO2, 95% 상대 습도를 가진 세포배양 인큐베이터에서 약 5 x 106 세포/10 cm 플레이트에서 줄기 세포 배양 배지에서 줄기줄기 유사 세포를 배양한다.
참고: 세포 배양 조건은 모든 절차에 걸쳐 동일합니다. 프로토콜에 사용되는 미디어는 완전한 미디어입니다. - 예정된 조사 이틀 전에, 배양 후드에 멸균 5 mL 피펫을 가진 배양 플레이트로부터 신경교종 줄기 유사 세포를 15 mL 원심분리기 튜브로 수집한다.
- 200 x g에서 3분 동안 싱크대 원심분리기에서 수집된 세포를 원심분리기.
- 상온액을 버리고 섭씨-EDTA에서 단일 세포 현탁액을 만들기 위해 실온에서 1 mL의 트립신-EDTA로 세포 펠릿(약 1 x 107 셀)을 소화한다. 세포가 철저히 소화되도록 소화하는 동안 2 분마다 원심 분리기 튜브의 바닥을 부드럽게 흔들어줍니다.
- 트립신을 담금질하기 위해 3 mL의 줄기 세포 배양 배지 (재료 표참조)를 추가합니다. 200 x g에서 수집된 세포를 카운터 상판 원심분리기에서 3분 동안 원심분리기. 상급을 버리고 세포 펠릿을 저장합니다.
- 5 mL의 세포 배양 배지로 세포를 재중단하고 혈세포계로 세포를 계산합니다.
- 플레이트 5 x 106 세포를 세포 배양 배지의 10 mL을 함유하는 2개의 10 cm 플레이트에 담는다.
- 예정된 조사 직전에, 1.3단계에서 설명한 바와 같이, 세포를 수집하고 원심분리 후 상상액을 버린다. 세포 배양 배지의 5 mL로 세포 펠릿을 다시 중단시켰다. 세포 배양 배지의 2 mL를 포함하는 35 mm 플레이트에 1 mL의 세포 현탁액을 전달한다.
참고 : 용지의 총 부피는 35mm 플레이트에서 3mL로 액체를 플레이트의 높이가 1cm로 만듭니다. - 플라스틱 또는 폼 박스와 같은 보조 용기에 도금 된 세포를 옮겨 오염 위험을 줄이고 용기에 있는 세포를 유틸리티 카트의 조사 시설로 가져옵니다.
- 4단계에서 기재된 바와 같이 세포를 조사한다.
2. 부착 된 세포 배양용 세포 준비
- 조사 1일 전, 세포 배양 후드에서, HEK-293 세포와 같은 부착된 세포주 배양판으로부터 DMEM 배지를 제거한다. 진공에 연결된 파스퇴르 파이펫을 사용하여 미디어를 흡입할 수 있습니다.
- 5 mL의 멸균 PBS로 세포를 배양 접시에 씻어 잔류 배지를 씻어낸다.
- 파이펫 1 mL 의 트립신-EDTA 배양 접시에 넣고 배양 판을 부드럽게 기울여 전체 접시가 트립신-EDTA로 덮여 있는지 확인합니다.
- 실온에서 5분 동안 세포를 트립시니화. 3 mL의 DMEM 배지로 트립신-EDTA 반응을 담금질하고 배양 후드에 5 mL 파이펫을 가진 세포를 15 mL 원심분리튜브로 수집한다.
- 200 x g에서 수집된 세포를 카운터 상판 원심분리기에서 3분 동안 원심분리기. 상급을 버리고 세포 펠릿을 저장합니다.
- DMEM 매체의 5 mL로 세포를 다시 중단하고 혈세포계로 세포를 계산합니다.
- 플레이트 2 x 105 세포를 35 mm 플레이트에서 3 mL의 세포 배양 배지를 사용하여 1 cm의 배지높이로 하였다.
- 37°C에서 인큐베이터에서 24시간 의 세포 배양 후, 이차 용기(즉, 절연된 발포박스)에 도금된 세포를 유틸리티 카트상에 조사 시설로 옮김을 전달한다.
- 4단계에서 기재된 바와 같이 세포를 조사한다.
3. 조사 후 면역 염색을위한 세포 준비
- 밤새 4 °C에서 얼음에 상업적 인 세포 외 단백질 매트릭스를 해동. 밤새 4°C에서 200 μL 파이펫 팁 및 1.5 mL 원심분리튜브를 냉각시..
- 미리 냉각된 파이펫 팁과 튜브당 200 μL의 1.5 mL 원심분리튜브가 있는 세포외 단백질 매트릭스.
- 세포 배양 배지의 20 mL의 사전 냉각된 20 mL에서 세포외 단백질 매트릭스의 200 μL을 희석하여 1% 세포외 단백질 매트릭스 배지를 만듭니다.
- 멸균된 커버슬립(22mm x 22mm)을 35mm 플레이트에 넣습니다. 커버슬립에 1% 세포외 단백질 매트릭스 매질 400 μL을 놓습니다.
- 세포외 단백질 매트릭스가 커버슬립 상에 중합될 수 있도록 35 mm 플레이트를 37°C에서 1시간 동안 37°C로 세포 배양 인큐베이터에 놓습니다.
- 현탁액 세포 배양을 사용하는 경우, 단계 1.1 에서 1.5단계에 기재된 바와 같이 단일 세포 현탁액을 만든다.
- 플레이트 5 x 104 세포를 35 mm 플레이트에 놓은 세포 외 단백질 매트릭스 코팅 커버슬립. 도금된 세포를 밤새 세포 배양 인큐베이터로 돌려보내 세포가 단백질 매트릭스에 의해 지지되도록 한다. 배양 접시에서 배지의 높이가 1cm에 도달하도록 플레이트 내의 미디어의 총 부피는 3 mL이어야 한다.
- 10배 배율 대물 렌즈로 밝은 필드 현미경으로 세포를 관찰합니다. 세포는 부동 대신 커버 슬립에 펼쳐져야합니다. 도금된 세포로 배양접시를 유틸리티 카트상에 있는 조사 시설로 폼 박스와 같은 보조 용기로 옮기고 4단계에서 설명한 바와 같이 세포를 조사한다.
- 부착된 세포 배양체(예를 들어, HEK-293 세포)를 사용하는 경우, 단계 2.1 에서 2.6단계로 기재된 바와 같이 세포를 다이제스트한다. 5 x 104 세포를 조사 전날 35mm 플레이트에 멸균 커버 슬립에 놓아 3.9 단계에서와 같이 현미경으로 관찰하여 커버슬립 표면에 세포가 완전히 부착되었는지 확인하십시오. 3 mL의 DMEM 용지를 사용하여 플레이트의 높이가 1cm인 액체를 만듭니다.
- 커버슬립에 세포를 성장한 후 하룻밤 또는 최대 1일까지, 배양 접시를 이차 용기에 도금된 세포로 이송하여 조사 시설로 옮김을 한다. 유틸리티 카트를 사용하여 유출 위험을 줄일 수 있습니다. 4단계에서 기재된 바와 같이 세포를 조사한다.
4. 선형 가속기 (LINAC)를 가진 조사
- LINAC의 콘솔 소프트웨어를 사용하여 가속기 갠트리와 콜리메이터를 0°로 설정하고 X 및 Y 턱을 대칭 20 x 20cm2 필드 크기로 열고 다중 리프 콜리메이터(MLC)가 있는 경우 철회합니다.
참고: LINACs는 매우 높은 용량 속도를 허용하는 FFF(fFF) 모드가 없는 평탄화 필터를 가질 수 있습니다. 이름에서 알 수 있듯이,이 방사선은 균일하지 않습니다 (평면), 높은 투여 량 속도는 빔의 중심에서 만 달성된다. 이 경우 7 x 7cm2 필드가 사용됩니다. - 처리 소파에 물 등가 물 5cm 이상을 놓습니다. 세포 접시를 400 MU/min(표준 용량 속도)으로 조사하여 물과 동등한 재료에 놓고 LINAC 십자선에 집중합니다.
- 6 MV X 선 빔에 최대 용량의 깊이로 조사 할 세포를 배치, 약 1.5 cm. 접시의 상단에 물 등가 물 의 추가 1cm를 배치. 세포가 매달려있는 배지의 1cm와 결합하면 세포를 평균 깊이 1.5 cm로 배치합니다.
- 앞면 포인터를 LINAC의 머리에 부착합니다. 맨 앞 포인터가 축적 재질의 표면에 닿을 때까지 확장하고 거리를 기록합니다. 소스에서 축적 표면까지의 거리가 100cm가 될 때까지 테이블 높이를 조정합니다.
참고: 광 거리 표시기를 통해 거리를 확인할 수 있습니다. 대안적으로, 광학 거리 표시기는 100 cm로 표면을 축적하기 위해 소스를 설정하는 전면 포인터 대신에 사용될 수있다. - 적절한 수의 모니터 유닛(MU)을 계산하여 원하는 양의 방사선을 세포에 전달하고 가속기를 400 MU/min으로 전달하도록 프로그래밍합니다.
참고: 최대 용량의 깊이에서 1cGy/MU를 제공하기 위해 보정된 LINAC의 소스 대 표면 거리(SSD) 설정의 경우, 필요한 수의 모니터 유닛은 MU = 투여량(cGy) / (1 cGy/MU) / OF(20x20)를 사용하여 계산되며, 여기서 OF는 출력 계수를 나타냅니다. 이 계산은 대체 교정 설정을 사용하여 LINACs에 대해 변경해야 합니다. - 치료 금고를 두고 다른 모든 개인이 종료되었는지 확인합니다. 방에 다른 세포가 없거나 방사선이 적어질 것이라는 점을 제거하십시오. 볼트 문을 닫습니다.
- 콘솔에서 필드 크기, MU 및 MU/min을 확인한 다음 빔을 사용하도록 설정합니다.
- 4.3-4.8 단계를 반복하여 세포가 더 높거나 낮은 용량 속도로 조사될 수 있도록 한다.
- 가속기로 더 높은 투여량 비율(예를 들어, 2100 MU/min 이상)을 달성하기 위해, 역제곱 법에 따라 세포에 대한 유효 투여율을 증가시키기 위해 SSD를 감소시다: 용량유효 =투여량 * (100 cm/SSD_New) 2.
- 낮은 투여량 비율(예를 들어, 20 MU/min)의 경우, 소스에서 표면 거리(SSD_New)를 증가시키고 투여율을 감소시다. 예를 들어, 세포 배양 접시는 치료실의 바닥에 놓일 수 있다.
- 이 설정이 필요한 경우 가속기의 모니터 장치 설정을 다시 계산하여 MU = 도량 (cGy) / (1 cGy / MU) / OF (20x20)/ (100cm / SSD_New)2를사용합니다. MU 계산에 대한 자세한 내용은 McDermott 및 Orton18참조를참조하십시오.
- 복용량 비율 (Gy/Min) = 복용량 (Gy)*(MU/min)/MU에 의해 Gy/분에서 복용량 비율을 결정합니다. 예를 들어, 400 MU/min에서 전달된 4Gy는 380 MU가 필요하므로 4*400/380 = 4.2 Gy/min. 표1을 참조하십시오.
그림 1 : 선형 가속기에 세포 배양 접시를 설치합니다. (A) 임상 선형 가속기가 도시된다. (B) 5cm의 물 등가 재료는 트리트먼트 소파에 놓습니다. (C) 세포 배양 접시가 재료의 표면에 놓입니다. (D) 요리는 정사각형 라이트 필드에 표시된 처리 장에서 가속기 십자선을 사용하여 중앙에 있습니다. (E) 1cm 물 등가 재료는 세포 배양 접시 위에 놓습니다. 소스대 표면 거리(SSD)는 광학 거리 표시기(F,G)또는 전면 포인터(H, I)를 사용하여 확인된다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
5. 조사 후 생물학적 암세
- 조사 후, 상기와 동일한 방식으로 세포를 세포 배양 인큐베이터로 되돌려 보인다(단계 1.9, 2.8 및 3.10).
- 필요에 따라 연구 프로젝트에 맞게 다양한 생물학적 검정을 맞춤화하십시오.
참고: 여기서, 우리는 조사 후 생물학적 분석의 예로 대표적인 세포 주기 분석(16)을 나타낸다.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
선형 가속기에 의한 표준 투여량 율 및 엑스트라 고용량 레이트 조사의 세포 주기 효과를 조사하기 위해, 신경교종 줄기 유사 세포의 3개의 샘플을 이 프로토콜을 사용하여 제조하고 조사 후 24시간 수집한 1개의 대조군 샘플17:1개의 대조군 샘플 조사되지 않은(그림2A), 400 MU/min(모니터 유닛, 4.2 Gy/min 표준 투여량, 도 2B)으로 조사된 샘플 1개, 2100 MU/min(21.2 Gy/min 엑스트라 고용량 레이트) 으로 조사된 다른 샘플, 그림 2 C)4 Gy. 세포 주기 프로파일은 세포 주기의 상이한 단계에서 세포의 백분율로 표시됩니다.
그림 2 : 선형 가속기의 4Gy 조사 후 세포 주기 분석의 예. G2 세포주기 검거는 비조사 대조군 세포(A)와 비교하여 표준 투여량(400 MU/min) (B) 또는 초고용량 비율(2100 MU/min)(C)으로 신경교종 줄기 세포를 조사한 후 관찰되었다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
| 용량 속도 (MU / MIN) | SSD (CM) | 에너지 | 뮤 |
| 20개 | 250개 | 6배 | 2380* |
| 400개 | 100개 | 6배 | 390* |
| 2100년 | 80 | 6FFF | 260* |
표 1: 실험에 사용되는 용량 비율에 대한 설정, 가정 4 Gy 복용량. MU는 다른 필요한 복용량에 대 한 선형으로 확장 될 수 있다. *이 예제는 우리가 사용 하는 LINAC에 대 한 MU. MU는 위의 방정식을 사용하여 사용자의 특정 LINAC에 대해 계산되어야 합니다.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
방사선 요법은 암 관리의 필수적인 부분입니다. 지속적인 노력은 방사선 치료의 효능과 효율성을 개선하기 위해 노력한다. 선형 가속기 기술의 발전은 전례없는 정확성과 안전성으로 환자를 치료할 수 있는 기회를 제공했습니다. 대부분의 환자는 선형 가속기에서 고에너지 엑스레이로 취급되기 때문에, 선형 가속기에 수행된 복용량 비율의 큰 범위의 생물학 효력을 검토하는 연구 결과는 환자에게 쉽게 적용될 수 있습니다. 방사선 생물학 연구에 선형 가속기를 적용하는 여러 보고서가 있었지만 결과가 혼합되어 추가 연구가 필요합니다13,14,15,16,19.
선형 가속기는 소정의 용량이 전달된 후 X선이 생성되지 않는다는 점에서 비교적 안전합니다. 이것은 방사선이 끊임없이 방출되는 방사성 동위원소와 는 대조적입니다. 또한, 방사선을 전달하기 위해 선형 가속기를 사용하면 다양한 용량과 용량 비율로 대상 부피의 모양을 제어하는 정교한 빔 배열을 사용할 수 있습니다. 이 방법의 단점은 선형 가속기의 가용성이 환자 사용으로 인해 제한 될 수 있으므로 임상의 및 의료 물리학자와의 고급 계획이 필요하다는 것입니다.
우리의 프로토콜에서 우리는 세포의 조사에 대한 기본 절차를 설명합니다. 이 방법은 다른 연구 요구를 충족하도록 맞춤화 될 수있다. 예를 들어, 약물 치료와 결합된 화학요법 및 방사선 요법의 효과를 조사할 수 있다. 이 방법을 방사선 다음의 특정 세포주 또는 분석법에 적용할 때 일부 수정이 예상되어야 합니다. 예를 들어, 조사 후 바이오마커의 초기 변화를 조사하기 위해, 세포는 조사 후 곧 수집될 수 있다.
전달된 투여량은 빔 에너지에 의존하기 때문에 증착된 투여량은 침투 깊이의 함수로서 변화하기 때문에, 원하는 용량을 달성하는 데 필요한 매체 및 물 등가 볼러스의 양은 매우 중요하다. 위에서 설명한 방법에서, 우리는 단일 전방 후방 빔에 6 개의 MV 광자를 사용하고 세포 매체가 배양 접시에서 높이가 1cm인지 확인합니다. 우리는 세포에 복용량을 구축하기 위해 세포 배양 접시 위에 물 등가 물 물질의 추가 1cm를 사용합니다. 매우 높은 용량 비율을 달성하기 위해, 우리는 세포가 배치되는 소파를 올립니다. 소파가 들어오면 필드 크기가 작아지기 때문에 35mm 배양 접시를 사용하고 조명장에 의해 구분된 대로 전체 접시가 조사 필드 내에 있는지 확인합니다. 낮은 투여 속도를 달성하기 위해, 우리는 처리 소파를 낮추거나 표면 거리로 소스를 증가시키기 위해 방바닥에 세포 배양 접시를 놓습니다. 더 복잡한 동물치료분야의 설계는 이 문서의 범위를 벗어납니다. 여기에 기술된 기술은 현탁액에서 성장하거나 접시에 붙어 있는 세포주를 가진 생물학 적인 세포해석을 위한 선형 가속기를 사용하는 방법을 이해하는 연구원을 도울 것입니다. 생물학자, 임상의 및 의학 물리학자 간의 긴밀한 협력은 방사선 연구의 성공적인 실행을 보장합니다.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
저자는 공개 할 것이 없다.
Acknowledgments
우리는 선형 가속기의 사용을 위한 방사선 종양학의 클리블랜드 진료소 부에 감사합니다. 우리는 신경교종 줄기 와 같은 세포의 그의 관대 한 선물에 대한 박사 제레미 리치 감사합니다. 이 연구는 클리블랜드 클리닉에 의해 지원되었다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Material | |||
| glioma stem-like cell 387 | gift from Dr. Jeremy Rich | ||
| 293 cells | ATCC | CRL-1573 | |
| neuron stem cell culture media | Thermo Fisher Scientific | 21103049 | NeurobasalTM media |
| DMEM | Thermo Fisher Scientific | 10569044 | |
| Fetal Bovine Serum | Thermo Fisher Scientific | 16000044 | |
| Penicillin/Streptomycin | Thermo Fisher Scientific | 15140-122 | |
| Recombinant Human EGF Protein | R&D Systems | 236-EG-01M | |
| Recombinant Human FGF basic | R&D Systems | 4114-TC-01M | |
| B-27™ Supplement | Thermo Fisher Scientific | 17504044 | |
| Sodium Pyruvate | Thermo Fisher Scientific | 11360070 | |
| L-Glutamine | Thermo Fisher Scientific | 25030164 | |
| Tripsin-EDTA | Thermo Fisher | 25200056 | |
| extracellular proten matrix | Corning | 354277 | MatrigelTM |
| Ethanol | Fisher chemical | A4094 | |
| Equipment | |||
| 10 cm cell culture dish | Denville | T1110 | |
| 3.5 cm cell culture dish | USA Scientific Inc. | CC7682-3340 | |
| 22x22mm glass cover slip | electron microscopy sciences | 72210-10 | |
| 15 ml centrifuge tube | Thomas Scientific | 1159M36 | |
| 50 ml centrifuge tube | Thomas Scientific | 1158R10 | |
| 5 ml Pipette | Fisher Scientific | 14-955-233 | |
| pipet aid | Fisher Scientific | 13-681-06 | |
| Vortex mixer | Fisher Scientific | 02-215-414 | |
| Centrifuge | Eppendorf | 5810R | |
| Linear Accelerator | Varian | n/a | |
| water equivalent material | Sun Nuclear corporation | 557 | Solid waterTM |
| Reagent preparation | |||
| DMEM media | 10% fetal bovine serum (FBS), 2 mM L-glutamine, 100 units/mL penicillin G, 100 µg/mL streptomycin in 500 ml DMEM media | ||
| stem cell culture media | 10 ml B27 supplement, 20 µg hFGF, 20 µg hEGF, 2 mM L-glutamine, 100 units/mL penicillin G, 100 µg/mL streptomycin in 500 ml Neurobasal media |
References
- Stupp, R., et al. Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma. The New England Journal of Medicine. 352 (10), 987-996 (2005).
- Stupp, R., et al. Effects of radiotherapy with concomitant and adjuvant temozolomide versus radiotherapy alone on survival in glioblastoma in a randomised phase III study: 5-year analysis of the EORTC-NCIC trial. The Lancet Oncology. 10 (5), 459-466 (2009).
- Tao, R., et al. Hypoxia imaging in upper gastrointestinal tumors and application to radiation therapy. Journal of Gastrointestinal Oncology. 9 (6), 1044-1053 (2018).
- Gajiwala, S., Torgeson, A., Garrido-Laguna, I., Kinsey, C., Lloyd, S. Combination immunotherapy and radiation therapy strategies for pancreatic cancer-targeting multiple steps in the cancer immunity cycle. Journal of Gastrointestinal Oncology. 9 (6), 1014-1026 (2018).
- Liney, G. P., Whelan, B., Oborn, B., Barton, M., Keall, P.
- Hall, E. J. Radiation dose-rate: a factor of importance in radiobiology and radiotherapy. The British Journal of Radiology. 45 (530), 81-97 (1972).
- Steel, G. G., et al. The dose-rate effect in human tumour cells. Radiotherapy & Oncology. 9 (4), 299-310 (1987).
- Ling, C. C., Gerweck, L. E., Zaider, M., Yorke, E. Dose-rate effects in external beam radiotherapy redux. Radiotherapy & Oncology. 95 (3), 261-268 (2010).
- Castro, G., et al. Amotosalen/UVA treatment inactivates T cells more effectively than the recommended gammadose for prevention of transfusion-associated graft-versus-host disease. Transfusion. 58 (6), 1506-1515 (2018).
- Gaddini, L., et al. Exposing primary rat retina cell cultures to γ-rays: An in vitro model for evaluating radiation responses. Experimental Eye Research. 166, 21-28 (2018).
- Simara, P., et al. DNA double-strand breaks in human induced pluripotent stem cell reprogramming and long-term in vitro culturing. Stem Cell Research & Therapy. 8 (1), 73 (2017).
- Wang, Z., et al. A comparison of the biological effects of 125I seeds continuous low-dose-rate radiation and 60Co high-dose-rate gamma radiation on non-small cell lung cancer cells. PLoS One. 10 (8), 0133728 (2015).
- Lasio, G., Guerrero, M., Goetz, W., Lima, F., Baulch, J. E. Effect of varying dose-per-pulse and average dose rate in X-ray beam irradiation on cultured cell survival. Radiation and Environmental Biophysics. 53 (4), 671-676 (2014).
- Karan, T., et al. Radiobiological effects of altering dose rate in filter-free photon beams. Physics in Medicine and Biology. 58 (4), 1075-1082 (2013).
- Sarojini, S., et al. A combination of high dose rate (10X FFF/2400 MU/min/10 MV X-rays) and total low dose (0.5 Gy) induces a higher rate of apoptosis in melanoma cells in vitro and superior preservation of normal melanocytes. Melanoma Research. 25 (5), 376-389 (2015).
- Hao, J., et al. The effects of extra high on glioma stem-like cells. PLoS One. 13 (8), 0202533 (2018).
- Liu, J., et al. Radiation-induced G2/M arrest rarely occurred in glioblastoma stem-like cells. International Journal of Radiation Biology. 94 (4), 394-402 (2018).
- Mcdermott, P., et al. The Physics and Technology of Radiation Therapy. , Medical Physics Pub Corp. Madison WI. (2010).
- Lohse, I., et al. Effect of high dose per pulse flattening filter-free beams on cancer cell survival. Radiotherapy & Oncology. 101 (1), 226-232 (2011).
