Murine Модель метастатических опухолей печени в настройке Ишемия Реперфузия Травмы
Summary
Мы подробно описываем клинически рестазовы колоректального рака печени (CRLM) и влияние реперфузии ишемии печени (I/R) на рост опухоли и метастазы. Эта модель может помочь лучше понять механизмы, лежащие в основе хирургии индуцированной поощрения метастатического роста печени.
Abstract
Ишемия печени и реперфузии (I / R) травмы, общая клиническая проблема, остается неизбежным патофизиологический процесс, который, как было показано, вызывают множественные ткани и повреждения органов. Несмотря на последние достижения и терапевтические подходы, общая заболеваемость остается неудовлетворительной, особенно у пациентов с основными паранхимальными аномалиями. В контексте агрессивного роста рака и метастазирования, хирургический I / R подозревается в промоутер регулирует рецидив опухоли. Эта статья направлена на описание клинически реинную модель печени I / R и колоректального метастаза печени. При этом, мы стремимся помочь другим следователям в создании и совершенствовании этой модели для их обычной исследовательской практики, чтобы лучше понять влияние печени I / R на содействие метастазам печени.
Introduction
Печень является одним из наиболее распространенных мест для развития метастатического заболевания1. Смертность почти всегда объясняется осложнениями, связанными с ростом опухоли в печени. У пациентов с метастатическими твердыми опухолями в печени, хирургия остается одним из важнейших вмешательства для борьбы с болезнью и возможного лечебного подхода. Тем не менее, подавляющее большинство пациентов в конечном итоге присутствует с рецидивирующимзаболевание заболеванием, преимущественно в печени2,3. Во время печеночной хирургии распространено внутриоперационное кровотечение, что часто требует переливания крови и различных технических подходов к борьбе с кровотечениями, включая сосудистые методы зажима. Однако такие меры вызывают печеночную ишемию/реперфузию (I/R) в ткани печени. Неблагоприятное воздействие I/R на гепатоцеллюлярную функцию хорошо задокументировано. Печень I / R оскорбление зажигает воспалительные каскады во время восстановления кровотока через воспалительные пути4. Мало того, что повреждение печени I/R способствует печеночной недостаточности, но текущие данные также показывают, что Травма I/R стимулирует адгезиюопухолевых клеток, а также способствует заболеваемости образованием метастазаций и росту существующих микрометастатических заболеваний 5. Ранее мы сообщали, что хирургический стресс вызывает активацию иммунных клеток, которая не только помогает в росте первичной опухоли, но и облегчает метастазирование путем захвата раковых клеток в циркуляции6.
Здесь мы подробно описываем технику для создания модели опухоли опухоли метации печени. В этой модели, мы также представляем метод, чтобы вызвать печеночной ишемии реперфузии травмы, которая действует как суррогатной хирургического стресса присутствует клинически во время гепатэктомии. Комбинированные методы инъекции рака и печеночной I/R могут успешно интерпретировать развитие CRLM у пациентов, перенесших первичную резекцию опухоли.
Protocol
Representative Results
Discussion
Модель животных, описанная в этой рукописи, основана на двух основных подходах. Во-первых, признать способность раковых клеток к локализации и размножаться в доле печени. Во-вторых, для изучения влияния печеночной ишемии реперфузии травмы, влияющие на рост опухоли и метастазов. Данная м…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Авторы благодарят Сару Минемайер и Александра Комерчи за лингвистическую ревизию.
Materials
| Dulbecco's Modified Eagle Medium | Lonza | 12-614F | |
| Fetal Bovine Serum | Lonza | 900-108 | |
| L-Glutamin | Gibco | 25030-081 | |
| Penicilin | Fisher scientific | 15-140-122 | |
| Stretomysin | Fisher scientific | 15-140-122 | |
| HEPES | Fisher Scientific | SH3023701 | |
| Trypsin | Hyclone | sh30042.02 | |
| Cell culture Flask 75cm | 5 Cells Star | 658170 | |
| 15ml PP Conical Tubes | BioExcell | 41021037 | |
| Trypan Blue Stain | Giibco | 15250-061 | |
| Gauze | Fisherbrand | 1376152 | |
| Cautry | Bovie | AA01 | |
| Microvascular clamp | Finescience tools | 18055-03 | |
| Micro-Serrefine clamp applicator with lock | Fine science toosl | FST-18056-14 | |
| Spring scissor | Fine science toosl | FST-15021-15 | |
| Vessel Dilator | Fine science toosl | FST-00276-13 | |
| Magnetic fixator Retraction system | Fine science toosl | FST-18200020 | |
| Micro-Adson Forceps | Fine science toosl | FST-11019-12 | |
| Micro-Adson Forceps | Fine science toosl | FST-11018-12 | |
| 4-0 polypropylene suture | Ethicon | K881H | |
| Needle holder | Harvard Apparatus | 72-8826 | |
| Heating Pad | Fisher scientific | 1443915 | |
| Clipper | Oster | 559A | |
| Povidone-Iodine solution | Medline | MDS093945 | |
| Syringe 1ml 25G | BD safety Glide | 305903 | |
| Insulin syringe 0.5 ml | BD insulin Syringes | 32946 | |
| Cotton -Tipped Applicator | Fisher Scientific | 23-400-101 | |
| Surgical Microscope | Leica | LR92240 | |
| Mycoplasma Elisa Kit | Roche | 11663925910 | |
| Ketamine | Putney | #056344 | |
| Xylazine | NADA | #139-236 | |
| ALT strip | Heska | 15809554 | |
| AST strip | Heska | 15809542 | |
| LDH strip | Heska | 15809607 |
References
- Riihimäki, M., Hemminki, A., Sundquist, J., Hemminki, K. Patterns of metastasis in colon and rectal cancer. Scientific Reports. 6 (1), 29765 (2016).
- Oki, E., et al. Recent advances in treatment for colorectal liver metastasis. Annals of gastroenterological surgery. 2 (3), 167-175 (2018).
- Wolpin, B. M., Mayer, R. J. Systemic treatment of colorectal cancer. Gastroenterology. 134 (5), 1296-1310 (2008).
- van Golen, R. F., Reiniers, M. J., Olthof, P. B., van Gulik, T. M., Heger, M. Sterile inflammation in hepatic ischemia/reperfusion injury: present concepts and potential therapeutics. Journal of Gastroenterology and Hepatology. 28 (3), 394-400 (2013).
- Demicheli, R., Retsky, M. W., Hrushesky, W. J. M., Baum, M., Gukas, I. D. The effects of surgery on tumor growth: a century of investigations. Annals of Oncology. 19 (11), 1821-1828 (2008).
- Tohme, S., et al. Neutrophil Extracellular Traps Promote the Development and Progression of Liver Metastases after Surgical Stress. Recherche en cancérologie. 76 (6), 1367-1380 (2016).
- Tseng, W., Leong, X., Engleman, E. Orthotopic mouse model of colorectal cancer. Journal of Visualized Experiments. (10), 484 (2007).
- Elkin, M., Vlodavsky, I. Tail vein assay of cancer metastasis. Current Protocols in Cell Biology. 19 (19.2), (2001).
- Thalheimer, A., et al. The intraportal injection model: A practical animal model for hepatic metastases and tumor cell dissemination in human colon cancer. BMC Cancer. 9 (1), 29 (2009).
- Frampas, E., Maurel, C., Thedrez, P., Le Saëc, P. R. e. m. a. u. d. -., Faivre-Chauvet, A., Barbet, J. The intraportal injection model for liver metastasis: Advantages of associated bioluminescence to assess tumor growth and influences on tumor uptake of radiolabeled anti-carcinoembryonic antigen antibody. Nuclear Medicine Communications. 32 (2), 147-154 (2011).
- Goddard, E. T., Fischer, J., Schedin, P. A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer. Journal of Visualized Experiments. (118), (2016).
- Limani, P., et al. Selective portal vein injection for the design of syngeneic models of liver malignancy. American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 310 (9), G682-G688 (2016).
