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Article de méthode

Un modèle murin des dommages rétiniens ischémiques induits par occlusion commune transitoire d’artère carotide

7.4K vues

DOI :

10.3791/61865

12 novembre 2020

* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

Ici, nous décrivons un modèle de souris de l’ischémie rétinienne par occlusion commune transitoire d’artère carotide utilisant des sutures simples et une pince. Ce modèle peut être utile pour comprendre les mécanismes pathologiques de l’ischémie rétinienne provoquées par des anomalies cardio-vasculaires.

Résumé

Diverses maladies vasculaires telles que la rétinopathie diabétique, l’occlusion des veines rétiniennes ou des artères et le syndrome ischémique oculaire peuvent mener à l’ischémie rétinienne. Pour étudier les mécanismes pathologiques de l’ischémie rétinienne, des modèles expérimentaux pertinents doivent être développés. Anatomiquement, un vaisseau principal d’approvisionnement en sang rétinien est l’artère ophtalmique (OpA) et opa provient de l’artère carotide interne de l’artère carotide commune (CCA). Ainsi, la perturbation de la CCA pourrait effectivement causer l’ischémie rétinienne. Ici, nous avons établi un modèle de souris de l’ischémie rétinienne par occlusion commune transitoire d’artère carotide (tBCCAO) pour attacher le CCA droit avec des sutures de soie 6-0 et pour occluser le CCA gauche transitoirement pendant 2 secondes par l’intermédiaire d’une pince, et avons prouvé que tBCCAO pourrait induire l’ischémie rétinienne aiguë menant au dysfonctionnement rétinien. La méthode actuelle réduit la dépendance aux instruments chirurgicaux en utilisant seulement des aiguilles chirurgicales et une pince, raccourcit le temps d’occlusion pour réduire au minimum la mort animale inattendue, qui est souvent vue dans les modèles de souris de l’occlusion cérébrale moyenne d’artère, et maintient la reproductibilité des résultats ischémiques rétiniens communs. Le modèle peut être utilisé pour étudier la pathophysiologie des rétinopathies ischémiques chez la souris et peut être utilisé pour le dépistage des médicaments in vivo.

Introduction

La rétine est un tissu neurosensoriel pour la fonction visuelle. Puisqu’une quantité substantielle d’oxygène est nécessaire pour la fonction visuelle, la rétine est connue comme l’un des tissus exigeants en oxygène les plus élevés dans lecorps 1. La rétine est sensible aux maladies vasculaires car l’oxygène est livré par les vaisseaux sanguins. Divers types de maladies vasculaires, telles que la rétinopathie diabétique et l’occlusion des vaisseaux sanguins rétiniens (veines ou artères), peuvent induire une ischémie rétinienne. Pour étudier les mécanismes pathologiques de l’ischémie rétinienne, des modèles expérimentaux reproductibles et cliniqu....

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Protocole

Toutes les méthodes décrites ici ont été approuvées par le Comité institutionnel de soins et d’utilisation des animaux (IACUC) de la Keio University School of Medicine.

1. Préparation d’instruments chirurgicaux et d’animaux

  1. Autoclavez les instruments chirurgicaux et gardez-les dans 70% d’alcool éthylique. Avant chaque nouvelle intervention chirurgicale, nettoyez soigneusement les instruments chirurgicaux en utilisant 70 % d’alcool éthylique.
  2. Préparer les souris BALB/cAJc1 mâles (6 semaines, 26-28 kg) dans une pièce exempte d’agents pathogènes spécifiques (FPS) afin de maintenir des conditions stériles avant, pendant et a....

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Résultats

Après la circulation systémique du FITC-dextran pendant 2 minutes, des vasculatures rétiniennes des rétines gauche et droite dans les souris sham-operated et les souris tBCCAO-actionnées ont été examinées(figure supplémentaire 1). Fitc-dextran était entièrement visible dans les deux rétines chez les souris opérées par imposture et la rétine gauche chez les souris opérées par tBCCAO, alors qu’elle était partiellement détectable dans la rétine droite chez les souris opérées par tBCCAO.

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Discussion

Dans l’étude, nous avons montré que tBCCAO, utilisant des sutures simples et une pince, pourrait induire l’ischémie rétinienne et le dysfonctionnement rétinien qui l’accompagne. En outre, nous avons démontré notre protocole actuel pour le développement d’un modèle de souris de l’ischémie rétinienne est plus facile et plus rapide par rapport à d’autres protocoles précédents pour le développement de modèles de lésions ischémiquesrétiniennes 2,3,

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Déclarations de divulgation

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Remerciements

Ces travaux ont été soutenus par Grants-in-Aid for Scientific Research (KAKENHI) (18K09424 à Toshihide Kurihara et 20K18393 à Yukihiro Miwa) du ministère de l’Éducation, de la Culture, des Sports, de la Science et de la Technologie (MEXT).

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Chlorhydrate d’atipamézoleZenoaqAntisedanPour l’anti-anesthésie
Applied Biosystems 7500 FastApplied Biosystems-PourqPCR
Butorphanol tartrateMeiji Seika PharmaVetorphalePour l’anesthésie
BZ-II AnalyseurKEYENCE-Pourune fusion d’images
BALB/cAJc1CLEA-Souris strain
&beta ;-Actin (8H10D10) Souris mAbCST3700Pour western blot
Pince Pince WorldPrecision InstrumentsWPI 500451Pour chirurgie
Pince Dumont #5Fine Science Tools11251-10Pour chirurgie
Solution DAPIDojindo340-07971Pour IHC
Envisu Système SD-OCTLeicaR4310Pour les PTOM
FITC-dextranMerkFD2000SPour la perfusion sanguine rétinienne
Microscope à fluorescenceKEYENCEBZ-9000Pour la détection de fluorescence
Gatifloxacine hydrateSenju PharmaceuticalGachifuroPour l’infection antibactérienne
GFAP Anticorps monoclonal (2.2B10)Thermo13-0300Pour IHC
Coussin chauffantMarukanRH-200Pour la chirurgie
HIF-1&alpha ; (D1S7W) XP Rabbit mAbCST36169Pour western blot
ImageQuant LAS 4000 miniGEHealthcare-Pourchimiluminescence
MidazolamSandoz K.KSANDOZPour l’anesthésie
Microtome Tissue-Tek TEC 6Sakura-Pourla section
MedetomidineOrion CorporationDomitorPour l’anesthésie
Aiguille supportHandayaHS-2307Pour la chirurgie
PuRECMAYOCorporation-PourERG
CiseauxOutils scientifiques fins91460-11Pour la chirurgie
Hyaluronate de sodiumSanten PharmaceuticalHyaleinPour la lubrification oculaire
Chlorhydrate de tropicamide/pényléphrineSanten PharmaceuticalMydrin-PPour la mydriase
6-0 suture en soieNatsumeE12-60N2Pour la chirurgie
la

Références

  1. Anderson, B. Ocular effects of changes in oxygen and carbon dioxide tension. Transactions of the American Ophthalmological Society. 66, 423-474 (1968).
  2. Ingberg, E., Dock, H., Theodorsson, E., Theodorsson, A., Ström, J. O.

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