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Techniques d'identification des rongeurs II

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Rodent Identification II

5.3: Fundamentals of Breeding and Weaning

5.14: Diagnostic Necropsy and Tissue Harvest

25,278 Views

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13:46 min

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April 30, 2023

Overview

Source : Kay Stewart, RVT, RLATG, CMAR ; Valerie A. Schroeder, RVT, RLATG. Université de Notre Dame, Indiana

Dossiers animaux doivent être maintenues avec précision pour s’assurer que la collecte de données est correcte. Gamme de dossiers de maintenir des informations sur les cartes de la cage pour avoir une base de données détaillée avec tous les renseignements pertinents sur chaque animal. Le composant principal de la tenue des dossiers est l’identification individuelle des animaux. Il y a une variété de méthodes appropriées pour identifier les souris et les rats. Cette vidéo décrit les techniques procédurales pour le tatouage, placement de puce et méthodes d’identification temporaire et se penche également sur les avantages de chacun.

Principles

L’utilisation du tatouage de queue est bénéfique dans de nombreux protocoles de recherche. Tatouages de queue sont idéales pour un animal qui consiste à être photographiée sur un appareil d’IRM, ou celui qui est génétiquement prédisposé à la dermatite ulcérative. Pour une identification rapide d’un animal dans une cage, sans avoir à retenir, le tatouage de queue est facilement visualisé. Cependant, cette technique exige des compétences, pratique et une main ferme ; Il faut également un équipement spécialisé. ¹

Protocoles expérimentaux peuvent nécessiter le génotypage des nouveaux-nés dès le premier jour. En conséquence, il est essentiel que ces chiots soient identifiés en permanence. À cet âge, les pennes d’oreille ne sont pas développées suffit d’insérer une étiquette d’oreille et une perforation d’oreille encore ne peut être utilisée que sur eux. Dans le passé, il était courant pour un chercheur d’un code de retrait TEP permet d’identifier les nouveau-nés. Cependant, c’était stressant à la fois pour le jeune animal et le barrage et donc a été considéré comme inhumain. ² l’utilisation du tatouage orteil permet aux animaux d’être identifié en permanence jusqu’à ce qu’ils sont assez grands pour oreille marquage ou perforation d’oreille. ³

Bien que le processus d’implantation d’une puce électronique est relativement facile, il y a plusieurs facteurs qui limitent son utilité pour l’identification chez les souris. Les puces stériles ont la taille d’un gros grain de riz et nécessitent un 10 à 12 jauge aiguille pour la livraison. Ainsi, ils sont très importants pour une souris. Le coût des puces et le dispositif de lecture peut également être prohibitif, comme la durée de vie de la souris est courte et le nombre d’animaux est généralement importante. Les animaux qui sont destinés à être photographiée sur un appareil d’IRM ne peut pas avoir des implants en eux. Toutefois, s’il y a un groupe d’animaux qui doivent être identifiés de façon permanente, puces peuvent être utilisés. ⁴

Études de toxicité aiguë nécessitant des animaux à être identifiée à des heures ou quelques jours, ne nécessitent pas l’utilisation de l’identification permanente. Marqueurs non toxiques sont fabriqués spécialement pour la coloration de la fourrure des animaux et sont disponibles en plusieurs couleurs. Ces colorants marqueur peuvent rester visibles pendant plusieurs semaines. Les marqueurs permet également de concert avec d’autres méthodes pour repérer les animaux spécifiques dans un groupe.

Procedure

1. tatouage de queue

Tatouages de queue sont facile à lire sans la nécessité de traiter l’animal.

La figure 1. Le tatouage sur des souris adultes de queue

Préparer le matériel de tatouage selon les instructions du fabricant. Il faut une petite quantité d’encre. Teinture noire devrait servir de colorant vert pour les rats ou les souris pigmentées ou rats et des souris albinos.
Préparer les animaux pour l’identification.
Remarque : Afin de minimiser la crainte ou détresse, queue tatouage doit être effectué dans une pièce de procédure plutôt que dans une zone de logement des animaux.
1. Bien retenir l’animal pour le tatouage de sorte que le mouvement est minime.
2. Rats sevrés sont retenus à l’aide d’une tasse portant une encoche en plastique, avec la lèvre de la coupe fixée sous les boulons sur la plate-forme de tatouage et la queue qui s’étend dans l’encoche.
3. Chez la souris adulte peuvent être immobilisée au moyen d’une drisse de coupe, avec la queue tendue de l’ouverture et la bride de la coupe qui s’est tenue en place via une plate-forme ou un autre périphérique.
4. Nettoyer la queue avec une petite quantité de nettoyant dilué tissu appliquée avec un coton-tige. Rats adultes ont généralement une accumulation de débris sur la queue qui doit être nettoyée avant d’appliquer le tatouage et échelle. Un gommage savon et l’eau de la queue va supprimer la majorité de la saleté et les débris. Sécher la queue bien avant de continuer.
5. Appliquer huile de tissu sur la peau avec un coton-tige juste avant le tatouage. L’huile de tissu est nécessaire pour minimiser les lésions tissulaires par ramollissement de la peau et l’aiguille de tatouage de graissage. En outre, l’huile dissout toute saleté ne pas supprimée par le processus de nettoyage et empêche l’encre de coloration de la peau nontattooed.
Appliquer le tatouage.
1. Trempez la pointe de l’aiguille dans le pigment avec la machine.
2. Mettre la pointe de l’aiguille sur le site de tatouage avec le pistolet actionné par la pédale.
3. Faire court, caresse même dans une seule direction. Chiffres et lettres doivent être tatoués de manière afin qu’ils sont construits dans les segments avec des angles minimes et des courbes (lorsque cela est possible).
4. Pénétrer assez profondément dans le derme avec une aiguille pour dépôt pigmentaire permanente. Un changement dans le son de l’aiguille activé peut aider à discerner la profondeur.
5. Approcher la peau avec l’aiguille à un angle de 90^o pour les dépôts de pigment adéquat.
Entretien et nettoyage après tatouage
1. Blot (ne pas essuyer) le tatouage terminé pigment excédentaire avec du papier absorbant.
2. La présence de sang sur le tatouage ou la serviette de papier indique que le tatouage a été fait trop profond et donc peu susceptible d’être permanente.
3. Renforcer les zones fines de caractères tatouage avec pigment supplémentaire. Caractères sont renforcés avec le parallèle de pigments déposés à, mais pas au sommet, pigment déjà déposés.
4. Pour ajouter le pigment supplémentaire, tremper la pointe de l’aiguille dans le réservoir de colorant pour tous les deux caractères pour les souris et tous un caractère pour les rats.
5. Les raisons pour la décoloration des tatouages incluent des quantités insuffisantes de pigment, tatouages faits trop peu profondes, tatouages faits trop profondément, un angle inapproprié de l’aiguille sur la peau, aiguilles émoussées ou crochet utilisés ou le tatouage réalisés trop rapidement.
6. Nettoyer soigneusement le matériel de tatouage après chaque utilisation selon les instructions du fabricant.

2. pointe le tatouage des nouveau-nés

Protocoles expérimentaux peuvent nécessiter le génotypage des nouveau-nés, dès le premier jour, ce qui le rend indispensable que ces chiots soient identifiés en permanence. L’utilisation du tatouage orteil permet aux animaux d’être identifiées jusqu’à ce qu’ils sont assez grands pour oreille marquage ou perforation d’oreille.

La figure 2. La technique retenue appropriée pour le tatouage une souris nouveau-né. Le lancet a le colorant vert sur la pointe.

Retenir les petits preweaned.
1. Coupe le nouveau-né dans la main sur une compresse de gaze. Placer le pied entre le pouce et l’escroc de l’index pour exposer l’orteil choisie, ou des orteils, pour le tatouage.
2. Maintenez le pied près des orteils afin que l’orteil a une surface solide derrière lui, empêchant ainsi loin de flexion.
3. Overtwist pas la jambe lors du positionnement du pied. Les chiots qui sont retenus peuvent bouger, mais aucune vocalisation n’est nécessairement entendue.
Préparer le matériel.
1. Sélectionnez une lancette animale de verge d’or de 4,5 mm.
2. Place une petite tache de tatouage vert coller sur une surface non poreuse ; papier d’aluminium fonctionne bien.
3. Faire tremper que la pointe de la lancette dans la pâte de tatouage.
4. Utilisez seulement une petite quantité de pâte.
Appliquer le tatouage.
1. Piquez la pointe désirée avec la lancette verge d’or selon un code d’identification.
2. Piquer la peau pour introduire la pâte dans la peau, laissant une marque.
3. Le même endroit poke trois fois pour assurer une pénétration appropriée.
4. Éviter de piquer si profondément que les saignements de l’orteil ; Cela peut entraîner un tatouage plus pâle.
Entretien et nettoyage après tatouage
1. Éponger doucement la tache avec un chiffon absorbant pour enlever la pâte excédentaire.
2. N’essayez pas de nettoyer la pâte excédentaire du pied ou corps.
3. Retourner l’animal de sa cage.
4. Lorsque l’infirmière chiots sont tatoués, il est conseillé de tatouage aussi le barrage. Cela peut empêcher de trop d’importance à la pâte sur les chiots, qui pourrait conduire à un toilettage excessif du tatouage.
5. Utilisez une nouvelle lancette pour chaque portée.
6. Les tatouages doivent être vérifiées sur le jour qui suit la procédure. Refaire le tatouage si les points sont faibles ou non visible. Si les points sont visibles le jour après le tatouage, elles devraient rester visibles pendant la durée de vie de l’animal.

3. pointe le tatouage des souris et des rats adultes

Lorsqu’une litière des nouveau-nés est tatouée, il est préférable que la mère aussi être tatoués afin que la pâte sur ses petits n’est pas étrangère à elle.

Retenue de l’animal.
1. Retenir l’animal à l’aide d’un cône en plastique ou une drisse de Plexiglass qui permet d’accéder à des pattes postérieures.
2. S’étendent au pied du dispositif de retenue.
3. Placer le pied entre le pouce et l’escroc de l’index pour exposer l’orteil choisie, ou des orteils, pour le tatouage
4. Maintenez le pied près des orteils afin que l’orteil a une surface solide derrière lui, empêchant l’orteil de plier loin.
5. Overtwist pas la jambe lors du positionnement du pied.

Les adultes qui sont retenus, essayez de retirer le pied.

Préparer le matériel.

Sélectionnez une lancette animale de verge d’or de 5 mm.
Place une petite tache de tatouage vert coller sur une surface non poreuse ; papier d’aluminium fonctionne bien.
Faire tremper que la pointe de la lancette dans la pâte de tatouage.
Utilisez seulement une petite quantité de pâte.

Appliquer le tatouage.

Piquez la pointe désirée avec la lancette verge d’or selon un code d’identification.
Piquer la peau pour introduire la pâte dans la peau, laissant une marque.
Le même endroit poke trois fois pour assurer une pénétration appropriée.
Éviter de piquer si profondément que les saignements de l’orteil ; Cela peut entraîner un tatouage plus pâle.

Entretien et nettoyage après tatouage

Éponger doucement la tache sur un chiffon absorbant pour enlever la pâte excédentaire.
N’essayez pas de nettoyer la pâte excédentaire du pied ou corps.
Retourner l’animal de sa cage.
Utilisez une nouvelle lancette pour chaque animal.
Les tatouages doivent être vérifiées sur le jour qui suit la procédure. Refaire le tatouage si les points sont faibles ou non visible. Si les points sont visibles le jour après le tatouage, elles devraient rester visibles pendant la durée de vie de l’animal.

4. micropuce

L’implantation d’une puce RFID est une méthode couramment utilisée pour l’identification des animaux.

Charger la puce dans l’applicateur, ou sélectionnez une seringue préchargée.
Retenir l’animal à l’aide d’un tube de retenue de Plexiglass qui permet de saisir de la peau sur les épaules.
Tent la peau, créant une poche.
Placer l’aiguille à travers la peau, biseau haut et parallèle à la colonne vertébrale et l’a dirigée vers la queue.
Éjectez la micro-puce sous-cutanée.
Retirer l’aiguille et pincer la peau fermée au point d’injection. Ceci empêche la puce après l’aiguille hors de la peau. Continuer à appliquer une pression d’hémostase pour tout saignement de la peau.
Retirez le dispositif de retenue de l’animal et Scannez la puce pour confirmer le code d’identification.

La figure 3. Placement puce chez le rat adulte.

5. temporaire identification pour souris

Colorants non toxiques et marqueurs animales peuvent être utilisés pour une identification temporaire de souris.

Immobiliser la souris tels que la zone située entre les omoplates est accessible pour les marquages sur la fourrure.
Placer un marqueur, spot ou trainée de colorant sur la fourrure dans ce domaine. Cette région est utilisée pour empêcher l’animal de supprimer le marquage lors de toilettage.
Vérifier le marquage périodiquement si l’utiliser comme identificateur unique pendant plus de quelques jours.
La queue peut également être utilisée pour de courtes durées. Cependant, l’animal peut enlever une marque il en toilettage.

6. temporaire identification chez le rat

Empêcher le rat pour que la zone pour l’application de teinture ou de marqueur est facilement accessible. Dans certains cas, lorsque seulement une rayure ou dot est nécessaire, l’animal ne devra pas être maîtrisé, mais peut se déplacer librement dans la cage.
Manuel retenue en saisissant la queue et en le tenant tendu tout en appliquant l’identification se fait couramment.
Immobilisation temporaire à l’aide d’anesthésiques inhalants peut être faite pour les animaux hargneux.
Vérifier le marquage périodiquement si vous utilisez cette méthode comme identificateur unique pendant plus de quelques jours.

La capacité d’identifier les animaux de recherche individuelle est un aspect essentiel de la tenue des documents scientifiques et collecte de données. Faire la distinction entre animaux garantit que l’objet correct est utilisé pour la procédure expérimentale prévue.

Il existe plusieurs méthodes permanentes et temporaires que les scientifiques utilisent pour identifier les animaux de laboratoire individuels. Dans cette vidéo, nous allons discuter des méthodes impliquant le tatouage queue rongeur adulte, les orteils du nouveau-né et les orteils adultes. Ensuite, nous allons touchent à la technique de placement puce courants effectuée chez des rats adultes, suivies de la méthode universelle d’identification temporaire qui utilise des teintures non toxiques.

Avant de plonger dans les protocoles de ces méthodes, passons en revue les considérations, les avantages et inconvénients de chacune de ces techniques. Tatouage de la queue est bénéfique dans de nombreux protocoles de recherche, tels que les expériences portant sur l’imagerie MRI ou ceux où les animaux sont génétiquement prédisposé aux affections, y compris la dermatite ulcérative de la peau. Un autre avantage des tatouages de queue, c’est qu’ils sont facilement visualisées sans devoir restreindre manuellement l’animal.

Certains protocoles expérimentaux nécessitent de génotypage des nouveau-nés, dès le premier jour, ce qui le rend indispensable que ces chiots soient identifiés en permanence. L’utilisation du tatouage d’orteil permet à ces animaux d’identifier jusqu’à ce qu’ils sont assez grands pour oreille marquage ou perforation d’oreille. C’est une bonne idée d’appliquer un tatouage similaire d’orteil sur la mère adulte pour l’empêcher de réaction excessive et excessivement toilettage nouveau tatouage de son chiot. Bien qu’il y a plusieurs avantages à utiliser cette méthode, l’inconvénient est que la procédure exige compétence, de pratique, une main ferme et équipements spécialisés.

La méthode d’identification permanente suivante l’examen est micropuce. Bien que, l’implantation de puces est un processus relativement simple, il y a plusieurs facteurs qui limitent son utilité. Tout d’abord, ces puces ont environ la taille d’un gros grain de riz et nécessitent un 10-12 jauge aiguille pour l’implantation, qui est trop grande pour une souris, limitant ainsi la méthode à des rats adultes. Deuxièmement, les puces sont chers et ne sont donc pas idéales pour identifier un grand nombre d’animaux. Enfin, les puces ne peuvent servir dans les expériences impliquant MRI. Toutefois, s’il y a un groupe d’animaux précieux comme éleveur animaux avec des génétiques uniques qui doivent être identifiés de façon permanente, puces peuvent être utilisés.

La dernière méthode que nous allons discuter est identification temporaire à l’aide de marqueurs non toxiques. Les marqueurs non toxiques sont faites pour la coloration de la fourrure des animaux. Cette méthode est idéale pour les études à court terme qui exigent que les animaux être identifiés pour seulement quelques heures ou jours, même si les colorants peuvent rester visibles pendant plusieurs semaines. Certains chercheurs utilisent ces marqueurs en conjonction avec d’autres méthodes d’identification de repérer facilement les animaux spécifiques dans un groupe.

Maintenant que nous avons discuté de l’arrière-plan, nous allons apprendre les procédures, en commençant par la queue le tatouage.

Ici, nous allons démontrer la procédure sur des souris adultes, mais le même peut être appliqué pour le sevrage et de rats adultes.

Pour minimiser toute crainte ou la détresse chez les animaux, la queue le tatouage doit être effectué dans la pièce de procédure plutôt que dans la zone de logement des animaux. Avant d’appliquer le tatouage, restreindre la souris à l’aide d’une drisse de coupe, avec la queue tendue de l’ouverture. Le rebord de la tasse est maintenu en place via une plateforme de verre spécialisé. Ensuite, nettoyer la queue avec une petite quantité de tissus dilué nettoyant sur un coton-tige. Cette étape est importante pour éliminer toute accumulation d’échelle et de débris qui pourraient interférer avec le tatouage. Ensuite, appliquez huile de tissu à la peau de la queue avec un autre tampon. Cela minimise les lésions tissulaires par ramollissement de la peau et le mode de lubrification pour l’aiguille de tatouage. En outre, l’huile dissout la saleté ne pas supprimée par le processus de nettoyage et empêche l’encre de coloration sur la peau non-tatoué. Maintenant vous êtes prêt à appliquer le tatouage.

Lorsque la machine est éteinte, tremper la pointe de l’aiguille de tatouage, qui est une lancette ou une aiguille hypodermique, dans le pigment. Ensuite, activer l’arme à l’aide de la pédale, placez l’outil de tatouage sur la queue et mettre la pointe de l’aiguille sur le site de tatouage. Approcher la peau avec l’aiguille à un angle de 90° et pénétrer assez profondément dans le derme, tel que le pigment se dépose en permanence. Un changement dans le son de l’aiguille activé peut aider à discerner la profondeur. Faire les courses courtes même dans une seule direction, formant des chiffres et des lettres. Essayez d’utiliser des angles et des courbes minimum lorsque vous appliquez le tatouage.

Pour ajouter le pigment supplémentaire, tremper la pointe de l’aiguille dans le réservoir de colorant pour chaque caractères doublé pour la souris et tout un caractère pour les rats. Épongez le tatouage terminé avec du papier absorbant pour enlever l’excès pigment. La présence de sang sur le tatouage ou la serviette de papier indique que le tatouage a été fait trop profond et donc peu susceptible d’être permanente. Renforcer caractères minces avec pigment supplémentaire en plaçant l’aiguille parallèle, pas sur le dessus, le pigment déjà déposé. Nettoyer soigneusement le matériel de tatouage après chaque utilisation, et une aiguille Neuve ou stérilisée et un approvisionnement frais d’encre doivent être utilisés entre les cages pour prévenir la transmission de la maladie.

Ensuite, nous allons apprendre comment appliquer des tatouages de l’orteil aux nouveau-nés et aux adultes. Ici, nous allons démontrer la procédure chez les souris, mais les mêmes étapes sont appliquent pour les rats.

Les nouveau-nés sont tatouées sur leurs orteils que les vertèbres caudales sont non ossifiés et la longueur de la queue est trop petite. Aussi que la queue se développe, la peau pourrait être tendue et les numéros peuvent devenir déformée, pâle et illisible. Commencez par placer un spot de tatouage vert pâte sur une surface non poreuse comme du papier d’aluminium. Ensuite, la coupe le chiot sevré avant dans votre main à l’aide d’une compresse de gaze. Placer le pied entre le pouce et le creux de votre index pour exposer les orteils choisies pour le tatouage. Maintenez le pied près des orteils afin que l’orteil sélectionné a une surface solide derrière lui pour l’empêcher de flexion loin.

Maintenant, tremper la pointe d’une lancette de 4,5 mm dans la pâte de tatouage. Ensuite, pousser l’orteil désiré selon le code préétabli. Afin d’assurer la bonne perméabilité, pousser au même endroit trois fois. Pénétrer dans la peau suffisamment pour que la pâte laisse une marque, mais éviter de piquer si profondément que les saignements de l’orteil. Doucement le nouveau tatouage avec la gaze pour enlever tout excès de tatouage pâte de tache et regagner sa cage de l’animal. Utilisez une lancette de nouveau pour la prochaine portée. Un jour après la procédure, vérifiez que le tatouage est visible.

Lorsque l’infirmière chiots sont tatoués, il est conseillé de tatouage aussi le barrage. Ceci peut empêcher elle à partir d’une réaction exagérée et toilettage excessivement les tatouages de son chiot. Pour appliquer un tatouage de l’orteil à un adulte, encore une fois, placez d’abord une petite tache de tatouage vert coller sur une feuille d’aluminium. Puis, retenir l’animal à l’aide d’un cône en plastique ou une drisse de Plexiglass qui permet d’accéder à des pattes postérieures. Allonger le pied depuis le dispositif de retenue et le pied entre le pouce et le creux de votre index pour exposer les orteils choisies pour le tatouage.

Maintenant, tremper la pointe d’une lancette de 5mm dans la pâte de tatouage. Et, comme auparavant, appliquer le tatouage de piquer et de perforer la peau de l’orteil souhaitée au moins trois fois pour assurer une pénétration adéquate. Ensuite, doucement sécher le tatouage pour enlever tout excès pâte et retourner l’animal de sa cage. Comme pour les nouveaux-nés, vérifier le tatouage un jour après l’intervention. Si la marque est visible le jour après le tatouage, il doit rester visible pour la durée de vie de l’animal. S’il est faible ou non visible, puis refaire le tatouage comme décrit plus haut.

La méthode d’identification suivante que nous aborderons consiste à implanter des puces électroniques dans les rongeurs. La puce couramment utilisée pour le marquage des animaux de laboratoire est une puce d’Identification par radiofréquence ou RFID. Habituellement, la puce est préchargée dans les aiguilles, qui peuvent être placés ensuite dans l’applicateur. Pour l’insertion de la puce, utiliser un tube de Plexiglass pour retenir l’animal en vous assurant que vous pouvez toujours saisir la peau sur les épaules. Tout d’abord, tente la peau pour créer une poche. Puis placez l’aiguille à travers la peau, en biseau vers le haut, parallèlement à la colonne vertébrale et dirigée vers la queue. Éjectez la micro-puce sous-cutanée et retirer l’aiguille. Pincer la peau fermée au point d’injection pour empêcher la suite l’aiguille hors de la peau de la puce. Continuer à appliquer une pression d’hémostase pour tout saignement de la peau. Retirez le dispositif de retenue de l’animal et Scannez la puce en utilisant le lecteur fourni par le fabricant pour confirmer le code d’identification.

Enfin, nous allons apprendre comment appliquer les colorants temporaires à des rongeurs pour l’identification. Commençons avec la souris. Tout d’abord, empêcher l’animal tel que la zone située entre les omoplates est accessible. Cette partie du corps est sûre de toilettage. Placer un spot ou strie du colorant sur la fourrure dans ce domaine et l’arrière animal dans sa cage.

Pour les rats, retenir l’animal manuellement en saisissant la queue et en le tenant tendu. Cela garantit que la zone d’application de la teinture est facilement accessible, ce qui pourrait être la tête, épaules ou croupion. Placer un spot ou strie du colorant sur la fourrure. Il est parfois possible d’appliquer le colorant non toxiques sans contention de l’animal. Vérifier les marques sur ces animaux régulièrement, surtout si vous les utilisez comme identificateur unique pendant plus de quelques jours.

Maintenant que nous avons passé en revue les procédures de ces méthodes d’identification différentes, nous allons voir comment les scientifiques utilisent eux dans différentes études aujourd’hui.

L’utilisation de rongeurs dans les expériences de comportement est assez commune.

Ici, les chercheurs ont utilisé la queue le tatouage pour marquer les animaux en permanence et puis eux observée pour plusieurs jours dans un environnement d’accueil-cage construit artificiellement. Les données recueillies a révélé des différences dans les comportements, comme la distance parcourue, entre le contrôle et les animaux de laboratoire, sur une période de 10 jours après la chirurgie.

Dans une autre expérience de comportement, les enquêteurs ont effectué orteil le tatouage chez les nouveau-nés et placent dans une boîte d’enregistrement avec des micros spéciaux aux cris ultrasoniques Records. Le but de cette expérience était d’examiner les différences dans l’appel taux, c’est-à-dire nombre de vocalisations par minute, dans le type sauvage et chez des souris déficientes Shank2 –un modèle de l’autisme-over 12 jours néonatal période et adulte hotte.

Enfin, comme mentionné précédemment, l’utilisation de colorant non toxiques est un moyen efficace pour marquer les animaux pour des expériences de courte durée. Ici, les scientifiques ont été intéressés par une expression transitoire d’une protéine de plasma. Alors ils marqué les animaux avec des marqueurs temporaires, une injection intraveineuse de l’ADN de plasmide et recueilli l’échantillon de sang deux jours plus tard afin de déterminer l’expression de la protéine en utilisant la technique du western blot.

Vous avez regardé juste introduction de JoVE pour tatouage, placement de la puce et méthodes d’identification temporaire pour les rats et les souris de laboratoire. Identification de l’animal est un composant principal de la tenue de dossiers dans la recherche. Par conséquent, lors du choix de la méthode d’identification appropriées, plusieurs facteurs doivent être délibérés. Cela inclut le niveau d’inconfort à l’animal, la facilité de la technique, les besoins expérimentaux et enfin le coût associé à la méthode. Comme toujours, Merci pour regarder !

Applications and Summary

Lors du choix de la méthode d’identification appropriées, de nombreux facteurs doivent être délibérés. Chaque technique a des avantages et des inconvénients qui doivent être considérés par rapport aux besoins expérimentaux. Alors que les coûts doivent être soupesés avec d’autres facteurs, la simplicité de la technique et le niveau d’inconfort pour les animaux devraient être les principales considérations. ^{4, 5}

References

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Schaefer, D.C., Asner, I.N., Seifert, B., Bürki, K., and Cinelli, P. 2010. Analysis of physiological and behavioural parameters in mice after toe clipping as newborns. Laboratory Animals. 44:7-13
Castelhano-Carlos, M.J., Sousa, N., Ohl, F., and Baumans, V. 2010. Identification methods in newborn C57BL/6 mice: a developmental and behavioural evaluation. Laboratory Animals. 44: 88-103.
Danneman, P.J., Suckow, M.A., and Brayton, C.F. 2013. The laboratory mouse. Second edition. New York, NY: CRC Press.
Institute for the Laboratory Animal Research. 2011. Guide for the care and use of laboratory animals, 8th ed. Washington (DC): National Academies Press.

Transcript

The ability to identify individual research animals is an essential aspect of scientific recordkeeping and data collection. Distinguishing between animals ensures that the correct subject is used for the intended experimental procedure.

There are several permanent and temporary methods that scientists use to identify individual lab animals. In this video, we’ll discuss methods involving tattooing adult rodent tail, neonate toes and adult toes. Next, we’ll touch upon the microchip placement technique commonly performed in adult rats, followed by the universal temporary identification method that utilizes non-toxic dyes.

Before delving into protocols for these methods, let’s review the considerations, benefits, and shortcomings of each of these techniques. Tail tattooing is beneficial in many research protocols, such as experiments involving MRI imaging or the ones where animals are genetically predisposed to skin conditions including ulcerative dermatitis. Another advantage of tail tattoos is that they are easily visualized without having to manually restrain the animal.

Certain experimental protocols require genotyping of neonates as early as day one, which makes it essential that these pups be permanently identified. The use of toe tattooing allows such animals to be identified until they are large enough for ear tagging or ear punching. It is a good idea to apply a similar toe tattoo on the adult mother to prevent her from over-reacting and excessively grooming her pup’s new tattoo. Although there are several advantages to using this method, the disadvantage is that the procedure requires skill, practice, a steady hand and specialized equipment.

The next permanent identification method under consideration is microchipping. Although, implanting microchips is a relatively easy process, there are several factors that limit its usefulness. First, these chips are approximately the size of a large grain of rice and require a 10-12 gauge needle for implantation, which is too large for a mouse, thus limiting the method to adult rats. Second, microchips are expensive and are therefore not ideal for identifying large numbers of animals. Lastly, microchips cannot be used in the experiments involving MRI. However, if there is a group of valuable animals like breeder animals with unique genetics that must be permanently identified, microchips can be used.

The last method that we’ll discuss is temporary identification using non-toxic markers. The non-toxic markers are made for coloring the fur of research animals. This method is ideal for short-term studies that require that animals be identified for only a few hours or days, although the dyes can remain visible for several weeks. Some researchers use these markers in conjunction with other identification methods to easily spot specific animals in a group.

Now that we have discussed the background, let’s learn the procedures, starting with tail tattooing. Here, we will demonstrate the procedure on adult mice, but the same can be applied for weanling and adult rats.

To minimize any apprehension or distress to the animals, tail tattooing should be performed in the procedure room rather than in the animal housing area. Before applying the tattoo, restrain the mouse using a cup restrainer, with the tail pulled taut from the opening. The flange of the cup is held in place via a specialized glass platform. Next, clean the tail with a small amount of diluted tissue cleaner on a cotton-tipped swab. This step is important to remove any buildup of scale and debris that might interfere with the tattoo. Next, apply tissue oil to the tail skin with another swab. This minimizes tissue damage by softening the skin and providing lubrication for the tattoo needle. In addition, the oil dissolves dirt not removed by the cleaning process and prevents ink staining on the non-tattooed skin. Now you’re ready to apply the tattoo.

While the machine is off, dip the tip of the tattoo needle, which is either a lancet or hypodermic needle, into the pigment. Next, activate the gun using the foot pedal, place the tattoo tool on the tail, and bring the tip of the needle to the tattoo site. Approach the skin with the needle at a 90° angle and penetrate deeply enough into the dermis such that pigment is permanently deposited. A change in sound of the activated needle can help discern the depth. Make short even strokes in one direction, forming numerals and letters. Try to use minimal curves and angles when applying the tattoo.

To add additional pigment, dip the tip of the needle into the dye reservoir for every one-two characters for mice and every one character for rats. Blot the completed tattoo with a paper towel to remove excess pigment. The presence of blood on the tattoo or the paper towel indicates that the tattoo was made too deep, and is therefore unlikely to be permanent. Reinforce thin characters with additional pigment by placing the needle parallel to, not on the top of, the already deposited pigment. Thoroughly clean the tattoo equipment after each use, and a new or sterilized needle and a fresh supply of ink should be used between cages to prevent disease transmission.

Next, we will learn how to apply toe tattoos to neonates and adults. Here, we will demonstrate the procedure in mice, but the same steps are applicable for rats.

The neonates are tattooed on their toes as the tailbones are not ossified and the length of the tail is too small. Also as the tail grows, the skin would be stretched and the numbers may become distorted, faint, and unreadable. Start by placing a spot of green tattoo paste on a non-porous surface such as aluminum foil.Next, cup the pre-weaned pup in your hand using a gauze pad. Position the foot between your thumb and the crook of your index finger to expose the chosen toes for tattooing. Hold the foot close to the toes so that the selected toe has a solid surface behind it to prevent it from bending away.

Now, dip the tip of a 4.5 mm lancet into the tattoo paste. Then, poke the desired toe as per the pre-determined code. To ensure proper permeation, poke the same spot three times. Penetrate the skin enough so that the paste leaves a mark, but avoid poking so deeply that the toe bleeds. Gently blot the new tattoo with the gauze to remove any excess tattoo paste, and return the animal to its cage. Use a new lancet for the next litter. One day after the procedure, verify that the tattoo is visible.

When nursing pups are tattooed, it is advisable to also tattoo the dam. This may prevent her from overreacting and excessively grooming her pup’s tattoos. To apply a toe tattoo to an adult, again, first place a small spot of green tattoo paste on an aluminum foil. Then, restrain the animal using either a plastic cone or a Plexiglass restrainer that allows access to the hind feet. Extend the foot from the restraint device and position the foot between your thumb and the crook of your index finger to expose the chosen toes for tattooing.

Now, dip the tip of a 5mm lancet in the tattoo paste. And, like before, apply the tattoo by poking and puncturing the skin of the desired toe at least three times to ensure proper penetration. Next, gently blot the tattoo to remove any excess paste, and return the animal to its cage. As with the neonates, verify the tattoo one day after the procedure. If the mark is visible the day after tattooing, it should remain visible for the animal’s lifetime. If it is faint or not visible, then redo the tattoo as described previously.

The next identification method that we’ll discuss involves implanting microchips into rodents. The chip commonly used for labeling lab animals is a Radio-frequency Identification, or RFID, chip. Usually, the chip is preloaded in needles, which can then be placed into the applier.For chip insertion, use a Plexiglass tube to restrain the animal making sure that you can still grasp the skin over the shoulders. First, tent the skin to create a pocket. Then place the needle through the skin, bevel up, parallel to the spine, and directed toward the tail. Eject the microchip subcutaneously and withdraw the needle. Pinch the skin closed at the injection site to prevent the chip from following the needle out of the skin. Continue to apply pressure to provide hemostasis for any skin bleeding. Remove the animal from the restraint device and scan the chip using the reader provided by the manufacture to confirm the identification code.

Lastly, let’s learn how to apply temporary dyes to rodents for identification. Let’s start with mice. First, restrain the animal such that the area between the shoulder blades is accessible. This part of the body is safe from self-grooming. Place a spot or streak of the dye on the fur in this area and place the animal back into its cage.

For rats, restrain the animal manually by grasping the tail and holding it taut. This ensures that the area for dye application is easily accessible, which could be head, shoulders, or rump. Place a spot or streak of the dye on the fur. It is sometimes possible to apply non-toxic dye without restraining the animal. Check the markings on these animals periodically, especially if you are using them as the sole identifier for more than a few days.

Now that we have reviewed the procedures of these different identification methods, let’s see how scientists are using them in different research studies today.

The use of rodents in behavior experiments is pretty common. Here, the researchers used the tail tattooing to mark the animals permanently and then observed them for a several days in an artificially constructed home-cage environment. The data collected revealed differences in behaviors, like distance moved, between the control and the experimental animals, over a 10-day post surgery period.

In another behavior experiment, the investigators performed toe tattooing in neonates and placed them in a recording box with special microphones to record ultrasonic vocalizations. The purpose of this experiment was to look at the differences in call rate, that is number of vocalizations per minute, in wild type and Shank2 deficient mice–a model of autism-over 12-day neonatal period and adult hood.

Lastly, as discussed earlier, the use of non-toxic dye is an efficient way to mark animals for short-term experiments. Here, the scientists were interested in transient expression of a plasma protein. So they marked the animals with temporary markers, injected the plasmid DNA intravenously, and collected the blood sample two days later to determine protein expression using the western blot technique.

You’ve just watched JoVE’s introduction to tattooing, microchip placement, and temporary identification methods for laboratory mice and rats. Animal identification is a primary component of recordkeeping in research. Therefore, when choosing the appropriate identification method, many factors must be deliberated. This includes the level of discomfort to the animal, the ease of the technique, the experimental needs, and finally the cost associated with the method. As always, thanks for watching!

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