Modélisation de xénogreffes dérivées de patients : une technique pour générer des modèles de souris de mélanome

- Dans les modèles de xénogreffe ou de PDX dérivée d’un patient, des cellules tumorales ou des fragments de patients humains sont implantés dans des souris receveuses immunodéficientes. Les modèles PDX simulent les caractéristiques biologiques et moléculaires du microenvironnement tumoral humain. Pour développer un modèle PDX de mélanome, il faut d’abord prélever du tissu tumoral sur un patient atteint de mélanome. Retirez le tissu nécrotique de la tumeur. Hachez la tumeur pour obtenir une boue. Ensuite, préparez une souris receveuse anesthésiée en position couchée. Faites une petite incision chirurgicale sur la peau dorsale. Coupez doucement la membrane fasciale ou la couche de tissu conjonctif lâche juste sous la peau. Cela sépare la peau des couches musculaires sous-jacentes et aide à créer une poche pour l’implantation de la tumeur.

Transférez doucement la suspension tumorale dans la poche. Maintenant, administrez une matrice extracellulaire artificielle dans la poche pour stabiliser et sécuriser les cellules tumorales implantées. Agrafez chirurgicalement la plaie et laissez la souris récupérer. Surveillez la souris receveuse chaque semaine pour observer la croissance de la tumeur xénogreffée. Dans le protocole suivant, nous démontrerons l’implantation sous-cutanée de cellules tumorales de mélanome dérivées d’un patient dans une souris NSG immunodéficiente pour générer des modèles de xénogreffes dérivées de patients atteints de mélanome.

- Pour implanter une excision chirurgicale ou une biopsie chirurgicale, rasez d’abord les poils du bas du dos de souris anesthésiées âgées de six à huit semaines, laissant une zone d’environ 1,5 centimètre à 3 centimètres sans poils. Préparez des morceaux de tumeur et divisez la suspension tumorale dans une boîte de Pétri en monticules individuels pour l’implantation chirurgicale. À l’aide d’une lame de scalpel, faites une incision d’environ 5 millimètres de long au centre du dos de la souris. À l’aide d’une paire de pinces, soulevez la peau du côté de l’incision en face de l’opérateur. Avec des ciseaux dans l’autre main, séparez la peau de la couche musculaire en coupant doucement la membrane fasciale avec de petites coupures de ciseaux, créant ainsi une poche pour le tissu tumoral.

Utilisez une lame de scalpel pour prélever un morceau de tumeur ainsi qu’un monticule individuel de tissu tumoral et placez doucement le tissu dans la poche créée. Ensuite, ajoutez 100 microlitres de matrice extracellulaire artificielle sur le monticule de tissu tumoral dans la poche. À l’aide de deux paires de pinces, tirez l’incision aux deux extrémités de manière à ce que les bords de la plaie se rapprochent. Ensuite, appliquez un ou deux clips pour fermer la plaie. Injecter par voie sous-cutanée 1 à 5 milligrammes par kilogramme d’analgésique. Lorsque la cicatrisation est terminée, après environ 7 jours, retirez les clips de la plaie.