Transgénèse vectorielle miniCoopR : une technique de criblage des gènes induisant le mélanome dans un modèle de tumeur de poisson-zèbre

- Chez le poisson-zèbre, le mélanome résulte de la transformation maligne des mélanocytes - les cellules productrices de mélanine. Pour étudier l’apparition du mélanome, utilisez un modèle de poisson-zèbre transgénique sujet au mélanome et déficient en mélanocytes. Ce modèle est dépourvu de mélanocytes en raison d’une mutation de perte de fonction dans son promoteur mitfa spécifique aux mélanocytes.

Commencez par prélever un embryon unicellulaire de ce modèle transgénique sur une plaque de gélose. Co-injecter dans l’embryon un mélange contenant un vecteur miniCoopR basé sur un transposon et des ARNm de l’enzyme transposase. Le vecteur contient une cassette de gènes, comprenant un minigène mitfa porteur d’un promoteur couplé à un gène candidat pris en sandwich entre deux éléments de transposon.

Les ARNm co-injectés codent pour les protéines transposases. Ces protéines agissent sur les éléments transposons et catalysent l’excision de la cassette du vecteur miniCoopR, suivie de son intégration dans l’ADN génomique de l’embryon. Par la suite, le promoteur de la cassette pilote l’expression à la fois du gène mitfa et du gène candidat d’intérêt.

Le gène mitfa soutient le sauvetage et le