Induction d’une lésion cérébrale traumatique dans un modèle de rat à l’aide d’un dispositif de percussion à fluide latéral

Placez un rat anesthésié sur un cadre stéréotaxique.

Faites une incision médiane et rétractez la peau pour exposer le crâne.

Désinfectez le crâne, séchez la surface et grattez-le pour aplatir la zone cible pour le placement de la canule.

Percez un trou et retirez le rabat osseux pour exposer la dure-mère, l’enveloppe extérieure du cerveau.

Nettoyez le crâne avec un écouvillon.

Placez une canule sur le trou et fixez-le avec du ciment dentaire.

Remplissez-le de liquide céphalo-rachidien artificiel pour éviter que la dure-mère ne se dessèche.

Connectez le rat au tube du dispositif de percussion de fluide latéral, qui se compose d’un pendule et d’un réservoir rempli de liquide.

Au fur et à mesure que le rat retrouve le réflexe de retrait, relâchez le pendule d’un angle calibré pour frapper le réservoir, générant une onde de pression qui frappe le cerveau.

La pression endommage les vaisseaux sanguins et provoque la mort des cellules neurales, entraînant des lésions cérébrales traumatiques.

Laisser le rat se rétablir pour évaluer la neurodégénérescence induite par la blessure.

Faites une incision médiane de 1,5 à 2,5 centimètres à travers la peau et les muscles du cuir chevelu à l’aide d’une lame de scalpel numéro 10. Rétractez la peau et le muscle pour exposer le crâne et fournir un champ opératoire dégagé. La cautérisation électrique est utile pour réaliser une hémostase rapide.

Ensuite, rasez la crête latérale de l’os pariétal gauche, à l’aide d’une curette chirurgicale pour produire une surface lisse et plane afin que la base du moyeu Luer Lock femelle-femelle puisse reposer au ras du crâne. Irriguer la surface du crâne et les tissus environnants avec une solution de gentamicine de 2,0 mg par millilitre dans une solution saline stérile, et éponger l’excès de solution avec des écouvillons stériles. Appliquez ensuite du peroxyde d’hydrogène à 3 % sur le crâne pour sécher l’os.

À ce stade, créez un site de craniectomie de 5 millimètres de diamètre à travers l’os pariétal gauche. Ensuite, retirez le lambeau osseux à l’aide de la curette chirurgicale et d’une pince à tissus lisses.

Ensuite, à l’aide d’un stéréomicroscope, retirez délicatement le mince bord de l’os restant à l’aide d’une pince à tissus lisses en prenant soin de ne pas rompre la dure-mère. Ensuite, frottez le crâne avec de l’éthanol à 70 % pour enlever toute poussière d’os et pour sécher le crâne. Appliquez une fine couche de colle cyanoacrylate autour du bord inférieur du moyeu Luer Lock et fixez-la au crâne au-dessus de la craniectomie sans obstruer l’ouverture et sans permettre à la colle d’entrer en contact avec la dure-mère. Scellez ensuite le verrou Luer en place avec une fine couche de colle autour de la base extérieure du moyeu.

Ensuite, préparez une boue de ciment dentaire et appliquez-la sur la surface du crâne autour et sur la base du moyeu Luer Lock pour le fixer en place. Remplissez ensuite le moyeu Luer Lock avec une solution stérile sans conservateur contenant plusieurs électrolytes à l’aide d’une seringue et d’une aiguille. Un bolus convexe de solution saline doit être visible au-dessus du haut du bord. Une fois que le ciment dentaire est complètement durci, arrêtez l’anesthésie au gaz et retirez le rat du cadre stéréotaxique.

Placez le rat sur une plate-forme à côté du dispositif de blessure à percussion fluide en décubitus sternal. Ensuite, fixez une longueur de 12 centimètres de tube de pression à l’extrémité de l’extrémité incurvée de l’appareil, l’extrémité opposée se terminant par un connecteur torsadé Luer Lock mâle de 2 centimètres. Fixez le rat à l’appareil en connectant l’extrémité femelle du moyeu sur le crâne de rat au connecteur mâle.

Vérifiez à plusieurs reprises que l’animal n’a pas le réflexe de retrait. Dès que le rat retrouve son réflexe de retrait, mais qu’il est toujours sous sédation, relâchez le pendule de l’appareil pour provoquer une seule impulsion de pression de 20 millisecondes et induire des blessures. Ensuite, déconnectez immédiatement le rat de l’appareil FPI, placez-le en position couchée sternale et fournissez de l’oxygène supplémentaire via un cône nasal jusqu’à ce que la respiration spontanée reprenne.

Notez que l’apnée est une conséquence anticipée de la blessure. Si nécessaire, fournissez des respirations manuelles périodiques à l’aide d’un masque à valve jusqu’à ce que le rat commence à respirer spontanément par lui-même. Surveillez en permanence et enregistrez l’heure de retour du réflexe de redressement.