La médiévale : Interval Training protocole pour doucement les exercice induit chez Drosophila melanogaster

Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la recherche métabolique, par exemple pour déterminer si des interventions particulières sur le mode de vie, comme l’exercice, peuvent bénéficier à des individus spécifiques. Souvent, les individus qui ne connaissent pas cette méthode ont de la difficulté à identifier les larves au premier stade. La clé est de collecter des larves presque de la même taille que les œufs.

Le principal avantage de cette technique est qu’elle peut être utilisée pour évaluer l’impact de l’exercice dans de nombreuses conditions expérimentales et génotypes. Tout d’abord, assemblez des chambres de pose pour chaque groupe expérimental. Appliquez une cuillerée de pâte de levure sur une plaque de gélose au jus de pomme et fixez la plaque à une bouteille en plastique de six onces.

Les plaques de gélose au jus de pomme sont fabriquées en préparant une solution de gélose à 3 % dans du jus de pomme acheté en magasin. Ensuite, remplissez des plats de 35 x 10 millimètres aux 3/4 du mur. La pâte de levure est fabriquée en mélangeant de la levure sèche active achetée en magasin avec de l’eau à raison d’environ deux millilitres d’eau distillée par gramme de levure.

Gardez la pâte couverte sans serrer pour permettre le dégazage et appliquez environ trois cuillerées de millimètres sur chaque plaque. La bouteille, en polypropylène, doit être préparée avec de petits trous pour la ventilation. Après avoir préparé les composants de la chambre, procédez au chargement des adultes.

Une fois que les adultes du génotype souhaité sont tous dans la bouteille, bouchez la bouteille avec la plaque et fixez l’ensemble avec des élastiques. Pour s’assurer qu’il y a un nombre suffisant de mouches adultes pour les chambres de ponte, il faut probablement commencer à augmenter le nombre de personnes plusieurs générations avant l’expérience prévue. Maintenant, changez les plaques de gélose au jus de pomme deux fois par jour, une fois le matin et une fois le soir.

Laissez ensuite les œufs se développer sur les plaques collectées pendant 12 à 24 heures jusqu’aux larves du premier stade. Pour recueillir ces larves, utilisez un pinceau mince ou un pic fait d’une aiguille fine et flexible et d’un manche. Pour chaque groupe expérimental, transférez 50 larves du premier stade dans un flacon d’aliments frais et laissez-les se développer jusqu’à l’âge adulte.

Pour vous assurer que vous êtes en mesure de collecter suffisamment de larves pour chacune de vos répétitions, assurez-vous qu’il y a des chercheurs disponibles qui sont efficaces pour collecter des larves afin d’obtenir le nombre dont vous avez besoin. Lors de la nymphose, récupérez les pupes en les mouillant d’abord à l’aide d’un petit pinceau humide. Ensuite, retirez délicatement les pupes des côtés des flacons à l’aide d’une spatule.

Chargez les pupes dans des flacons vides. Ensuite, lors de l’éclosion, transférez les adultes dans des flacons alimentaires standard. Un à cinq jours après l’éclosion, séparez les mouches en fonction du sexe et divisez chaque sexe en deux groupes, expérimental et contrôlé.

Maintenez les adultes à 50 mouches par flacon. Donnez aux mouches des flacons frais avec de la levure vivante tous les deux jours. Bien qu’il soit possible de maintenir les adultes sans supplémentation en levure vivante, nous avons constaté que les adultes obtiennent de meilleurs résultats avec le supplément.

La supplémentation en levure vivante est une variable que les chercheurs peuvent modifier en fonction de leurs objectifs de recherche spécifiques. L’appareil d’exercice utilise un système simple de courroie et de poulie alimenté par un moteur à vitesse variable. Avant d’utiliser l’appareil d’exercice, retirez tous les flacons qui y sont attachés et calibrez la vitesse de son moteur à l’aide de l’alimentation électrique de sorte qu’une période de rotation complète soit de 15 secondes.

Pour chronométrer la vitesse de rotation, fixez un petit pinceau au couvercle du moteur et positionnez le pinceau de manière à ce qu’il touche l’un des supports rotatifs. Chronométrez ensuite le nombre de rotations effectuées en comptant les contacts de la brosse et du support par minute. À l’aide d’une machine calibrée, procédez au premier jour d’exercice, généralement un lundi.

Enfoncez les bouchons des flacons dans les flacons. Laissez aux mouches un centimètre d’espace dans les flacons de contrôle et six centimètres d’espace dans les flacons d’exercice. Placez maintenant les flacons dans les pinces et avec 10 minutes pour laisser les mouches s’acclimater.

L’appareil d’exercice peut contenir jusqu’à 48 flacons. La température ambiante doit rester constante tout au long de la procédure de plusieurs jours ou l’appareil d’exercice peut être inséré dans un incubateur, si vous le souhaitez. La conception expérimentale consiste en cinq jours consécutifs d’exercice par semaine.

Chaque journée d’exercice contient une alternance de périodes d’exercice et de repos. Chaque jour, cinq minutes sont ajoutées à l’une des périodes d’exercice, de sorte qu’au cours d’une semaine de travail de cinq jours, les quatre périodes d’exercice augmenteront de cinq minutes. Une fois que les mouches sont acclimatées, commencez la première période d’exercice.

Faites fonctionner la machine pendant 15 minutes. Pendant les cinq minutes de repos entre les périodes, laissez les flacons sur les pinces. Après avoir terminé le quatrième cycle d’exercice, remettez les bouchons des flacons de nourriture dans leurs positions normales et remettez les mouches dans leur incubateur.

Pour établir si l’exercice sur le TreadWheel influençait les traits métaboliques, le stockage des triglycérides chez les mouches blanches Oregon R et jaune a été mesuré et normalisé par rapport à la concentration en protéines des mouches. L’analyse statistique a révélé une interaction significative entre le génotype et l’exercice affectant le stockage des triglycérides. Il y avait également un effet sexuellement dimorphe significatif, les mâles stockant plus de triglycérides que les femelles.

Les mouches exercées femelles avaient des taux de triglycérides significativement plus faibles que leurs homologues non exercées. Cela n’a pas été observé chez les mâles. Ensuite, les mouches ont été élevées avec des régimes variables, soumises au régime d’exercice, puis testées sur un test de géotaxie négatif de type RING.

Les femelles ont grimpé significativement plus haut lorsqu’elles étaient élevées avec un régime riche en graisses que avec n’importe quel autre traitement. Pour les mâles, l’exercice n’améliorait l’escalade que lorsqu’ils étaient élevés avec un régime normal. Un régime riche en graisses n’a eu aucun effet.

Curieusement, il y a eu une diminution des performances d’escalade après l’exercice chez les femelles de la gamme DGRP 153 lorsqu’elles ont été élevées avec un régime normal. Ainsi, l’exercice peut ne pas être une intervention uniformément positive pour tous les génotypes. À la suite de cette procédure, d’autres méthodes telles que des tests de glycémie hémolymphatique ou des analyses de durée de vie peuvent être effectuées pour évaluer l’effet de l’exercice sur le diabète de type II ou la longévité.

Cette technique permet aux chercheurs dans les domaines de la génétique et du métabolisme d’explorer le rôle de l’exercice dans le maintien de la santé métabolique de l’organisme modèle, la drosophile.