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DOI: 10.3791/64804-v
Erin Crawford*1, Heather L. Mentrup*2,3, Elizabeth A. Novak2,3, Kevin P. Mollen2,3
1Division of Pediatric Gastroenterology, Hepatology and Nutrition,UPMC Children’s Hospital of Pittsburgh, 2Division of Pediatric Surgery,UPMC Children’s Hospital of Pittsburgh, 3Department of Surgery,University of Pittsburgh School of Medicine
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This study presents a protocol for isolating murine colonic crypts to develop 3-dimensional colonoids, which can be differentiated to mimic the intestinal epithelium. This approach enables the investigation of intestinal physiology and barrier function in diseased states, particularly inflammatory bowel disease.
Nous décrivons un protocole détaillant l’isolement des cryptes coliques murines pour le développement de colonoïdes en 3 dimensions. Les colonoïdes établis peuvent ensuite être différenciés en phase terminale pour refléter la composition cellulaire de l’épithélium hôte avant de recevoir un défi inflammatoire ou d’être dirigés vers l’établissement d’une monocouche épithéliale.
Grâce à nos recherches, nous visons à explorer comment les colonoïdes murins pourraient être modifiés à partir d’un système de culture colonoïde conventionnel, pour étudier certains aspects de la physiologie intestinale et leur altération en présence d’un état pathologique enflammé. L’étude de la fonction barrière et de la physiologie intestinale dans des états pathologiques tels que la maladie inflammatoire de l’intestin est limitée lors de l’utilisation d’un système traditionnel de culture de colonoïdes murins qui ne reflète que la physiologie des cellules souches. Notre protocole est avantageux en ce sens qu’il fournit au lecteur de multiples techniques pour étudier comment les médiateurs inflammatoires affectent l’épithélium intestinal, soit en les différenciant en phase terminale, soit en créant un système monocouche 2D.
À l’avenir, notre laboratoire se concentrera sur la compréhension de la façon dont le système de culture de colonoïdes humains peut être modifié pour étudier différents aspects de la physiologie intestinale et des maladies, en particulier les maladies inflammatoires de l’intestin.
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