Murin endoscopie pour In Vivo Guérison multimodale d'imagerie de la cancérogenèse et de l'évaluation de la plaie intestinale et l'inflammation

Dans cette vidéo, une variété d’applications de l’endoscopie neuronale seront présentées dans la première application. La deuxième application montrera comment utiliser l’endoscope pour évaluer la gravité de la maladie dans un modèle murin de colite. L’utilisation de l’endoscopie pour surveiller la cicatrisation des plaies muqueuses in vivo sera démontrée dans la dernière application.

L’utilisation de l’endoscopie à fluorescence pour détecter les tumeurs intestinales et la technique d’injection intra-muqueuse d’agents seront présentées en fin de compte la cicatrisation des plaies intestinales, l’inflammation et le cancer. L’agénésie peut être évaluée sur la base des résultats de l’analyse endoscopique. Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes telles que l’analyse histologique de la colite expérimentale est qu’avec cette technique, vous pouvez effectuer des examens de suivi intra-individuels et évaluer de manière répétitive les altérations de la muqueuse.

Par conséquent, cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de l’inflammation intestinale expérimentale, telles que l’établissement temporel de la colite. Les implications de cette technique s’étendent au traitement du cancer colorectal en raison de la possibilité de caractériser fonctionnellement les lésions néoplasiques. Bien que cette méthode puisse donner un aperçu du développement du cancer colorectal, elle peut également être appliquée à d’autres systèmes tels que les maladies inflammatoires de l’intestin ou la colite infectieuse.

En général, les personnes qui ne connaissent pas cette méthode auront du mal à cause de la difficulté de manipuler l’endoscope à petite échelle Fluorescence. L’endoscopie étend le potentiel de l’endoscopie à large lumière à l’imagerie moléculaire en ciblant spécifiquement les structures cellulaires par des traces marquées par fluorescence lors d’examens endoscopiques. Pour induire le cancer colorectal chez les animaux de laboratoire, utilisez d’abord une seringue d’un millilitre équipée d’une aiguille de calibre 30 pour injecter interpéritonéale 10 milligrammes par kilogramme sont fraîchement préparés mutagènes comme l’oxyméthane dans chaque souris.

Défiez le groupe de souris expérimentales avec des cycles répétitifs de 3 % de poids par volume, de sulfate de dextran sodique ou DSS du jour zéro à 7, 21 à 28 et 42 à 49 pour induire le cancer colorectal inflammatoire. Agénésie fournissant aux souris de l’eau d’autoclave entre les défis le jour de la coloscopie. Après avoir confirmé la sédation par pincement des orteils, utilisez une canule boutonnée pour instiller deux millilitres de lavement liquide dans le côlon d’un animal de laboratoire.

Si une charge fécale importante est suspectée, en attendant que la souris défèque, connectez un poste de travail endoscopique vétérinaire pour petits animaux à l’unité de caméra pour l’endoscopie en lumière blanche. Configurez les paramètres de la source lumineuse pour exciter les traces à injecter, puis intégrez un filtre passe-bande approprié entre le télescope et la caméra. Maintenant, placez la souris sur la table d’examen et insérez l’endoscope très soigneusement.

Pour éviter la perforation, ouvrez les deux valves de la gaine. Une vanne doit être connectée à la pompe à air. L’autre doit être scellé avec un index pour contrôler l’air.

Ensuite, gonflez lentement et soigneusement le côlon, en avançant l’endoscope uniquement jusqu’au fléchisseur du côlon droit pour éviter la perforation à environ 4,5 centimètres de l’anus. Maintenant, tirez lentement sur l’endoscope et examinez la muqueuse à la recherche d’altérations inflammatoires ou malignes, et pour évaluer toute la circonférence de l’intestin. Ensuite, pour récupérer un échantillon de biopsie, introduisez soigneusement la pince à biopsie dans le canal de travail jusqu’à ce que l’extrémité de la pince soit visible sur le moniteur.

Ouvrez et fermez soigneusement les pinces pour éviter les perforations et déplacez-les vers le site de la pathologie. Pour l’application intermuqueuse d’agents pharmacologiques, pré-remplissez complètement un tube d’injection flexible avec l’agent d’intérêt, puis poussez le tube à travers le canal de travail jusqu’à ce que la canule soit visible sur le moniteur. Fixez ensuite une seringue fine et insérez l’aiguille dans la sous-muqueuse À un angle de 15 à 30 degrés face au biseau dans la direction de la muqueuse, administrez doucement jusqu’à 50 microlitres de l’agent thérapeutique.

Après une injection réussie, la muqueuse présentera un lifting caractéristique pour effectuer une endoscopie à fluorescence, administrer l’agent d’intérêt par voie intraveineuse avant l’examen. Vérifiez le moment optimal entre l’injection de votre traceur marqué par fluorescence et la procédure d’imagerie, qui dépend de la pharmacologie du traceur. Ensuite, pour visualiser l’agent injecté par endoscopie fluorescente, configurez les paramètres du système de filtre passe-bande en fonction des longueurs d’onde d’excitation et d’émission du traceur injecté.

Enfin, imagez le tissu après l’application du traceur pour obtenir une lecture du rapport cible/fond après l’induction de la colite. Souris. Présenter une perte de poids à partir du troisième jour avec une perte maximale de poids corporel de 19 % se produisant au septième jour conformément à la perte de poids corporel. L’indice endoscopique neuronal du score de gravité de la colite augmente au septième jour après le début du DSS, indiquant des dommages inflammatoires massifs de la muqueuse colique, qui sont améliorés au 13e jour.

De plus, au septième jour, après le début du DSS, les dommages histologiques sont significativement plus élevés chez les souris traitées au DSS par rapport aux témoins, comme en témoignent la dénudation épithéliale, les ulcérations de la muqueuse et l’augmentation de l’infiltration des neutrophiles, qui sont toutes significativement améliorées au 13e jour. Dans ces images représentatives d’une endoscopie de routine, les plaies de la muqueuse ont été induites mécaniquement par des pinces à biopsie miniatures avec une plaie d’un millimètre de diamètre. La cicatrisation a ensuite été surveillée par un examen endoscopique quotidien et quantifiée par la mesure de la surface résiduelle de la plaie à l’aide d’un logiciel de retouche d’images.

La fermeture de la zone de la plaie individuelle au fil du temps a ensuite été exprimée par le quotient de la surface de la plaie réelle par la zone de plaie initiale. Par exemple, un jour trois après la génération de la plaie, 41 % de la zone de la plaie a été récupérée, alors qu’à sept jours, la plaie était complètement guérie. Comme d’habitude, à la fin d’une expérience, les plaies peuvent être réséquées pour une évaluation histologique, X vivo comme dans ces images représentatives de lits de plaies colorées à l’hématine et à l’ESN aux jours zéro et cinq, environ 80 jours après l’induction de la tumeur par l’oxyméthane et trois cycles de tumeurs multiples du côlon DSS, ainsi que des signes macroscopiques d’inflammation chronique tels que la muqueuse granulée peuvent être observés.

L’endoscopie endoscopique par fluorescence du neurone intestin sans application d’un traceur entraîne une absence de détection d’un signal spécifique, et aucune interaction avec le tissu colique ou l’autofluorescence fécale n’est observée. En revanche, immédiatement après l’application intraveineuse de Fitz Dextran, le fluorochrome peut être observé au niveau de la muqueuse colique et peut être utilisé pour l’évaluation de l’augmentation de la vascularisation dans les régions d’inflammation chronique ou de muqueuse maligne. En conséquence, la quantification de l’intensité de la fluorescence peut être utilisée pour mesurer l’augmentation significative de l’absorption du fluorochrome dans le tissu malin par rapport à la muqueuse colique non affectée.

Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en cinq à 10 minutes si elle est bien exécutée. Lors de cette procédure, il est important de se rappeler de faire avancer l’endoscope rigide avec précaution à travers le côlon marin. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’évaluer la cicatrisation des plaies épithéliales, l’inflammation intestinale et l’agénésie du cancer lors de la coloscopie marine.