Le Réseau d’évaluation préclinique des AVC Modèle multilaboratoire de l’AVC thromboembolique avec thrombolyse : TE-MCAo

Le champ d’application de notre recherche est de développer un modèle d’AVC thromboembolique avec thrombolyse contrôlée, destiné à des tests thérapeutiques précliniques rigoureux et multi-laboratoires. Notre protocole prend en compte l’absence d’un modèle simple et reproductible d’AVC thromboembolique qui imite la thrombolyse clinique et soutient les essais précliniques multicentriques. Pour commencer, on émousse un tube PE-50 en coupant l’extrémité à un angle biseauté.

Coupez la pointe même du biseau avec des microciseaux. Après avoir préparé le rat anesthésié pour la chirurgie, réalisez une incision verticale sur l’intérieur de la cuisse, d’environ 1,5 à deux centimètres de long le long du pli naturel de l’intersection inguinale avec la patte. L’incision doit être orthogonale au cours anatomique attendu de l’artère fémorale.

À l’aide d’une dissection contondante, disséquez soigneusement jusqu’aux vaisseaux fémoraux. Ensuite, séparer l’artère fémorale de la veine et du nerf qui courent dans le même faisceau. Squelettiser l’artère fémorale aussi loin que possible à proximité, en retraçant l’artère jusqu’à son origine rétropéritonéale.

Placez lâchement une boucle de soie 5-0 autour de l’artère fémorale, et utilisez les queues pour fournir une tension douce à l’extrémité proximale de l’artère. Ensuite, obstruez distalement l’artère fémorale avec une ligature de soie 5-0, et utilisez les queues de la suture pour fournir une légère tension distale avec des pinces hémostatiques. À environ deux tiers de la distance de la boucle de suture proximale, placez un morceau de suture de soie sous l’artère et faites une petite artériotomie distale à la suture lâche à l’aide de microciseaux.

À l’aide de pinces bien acérées, soulevez l’ouverture supérieure de l’artériotomie et introduisez le cathéter PE-50 biseauté émoussé dans l’ouverture. Avancez le cathéter proximalement autant que possible, de sorte que la boucle lâche, une fois serré, englobe le cathéter. Serrez doucement la suture en veillant à ce qu’elle ne bloque pas le cathéter ni ne repose sur le biseau.

Relâche la pince chaussée en caoutchouc. Le cathéter doit immédiatement se remplir de sang. Remplissez trois tubes centrifugeuses de 1,5 millilitre et stockez-les à quatre degrés Celsius.

Une fois les trompes remplies, retirez le cathéter PE-50 de l’artère fémorale, ligavez l’extrémité proximale et fermez l’incision avec des sutures 5-0 Prolene interrompues. Pour préparer le thrombus, transférez 500 microlitres de sang de donneur fraîchement prélevé ou stocké dans un tube de microcentrifuge de 1,5 millilitre, puis ajoutez un millilitre de chlorure de calcium pour la réversion de l’anticoagulation. Ensuite, aspirez immédiatement le sang du tube de la microcentrifugeuse dans un tube PE-50 de 100 centimètres, en utilisant une succion douce, et incubez le tube enroulé dans un PBS préchauffé à 37 degrés Celsius pendant deux heures dans un four de table.

Après avoir expulsé le thrombus dans une boîte de Petri contenant du PBS, découpez-le en sections d’environ six centimètres à l’aide d’une lame de rasoir. Aspirez chaque thrombus doucement dans un cathéter PE-50 et expulsez-le complètement cinq fois pour le laver. Lavez à nouveau le thrombus en le tirant doucement dans un cathéter PE-10 et en l’expulsant complètement 15 fois.

Ajoutez 200 microlitres de bleu d’Evans à 4 % dans une boîte de Petri contenant 10 millilitres de PBS pour obtenir la dilution numéro 1. Ensuite, pipeter 400 microlitres de dilution numéro 1 dans une boîte de Petri séparée contenant 20 millilitres de PBS pour créer la dilution numéro 2. Placez le caillot dans la solution plus concentrée de la boîte de Petri bleue d’Evans pendant une seconde, puis transférez-le dans la boîte de Petri bleue d’Evans diluée.

Chargez un thrombus lavé dans des microcathéters préfabriqués sans embolie d’air, en utilisant la méthode du « humide à humide ». Une fois le thrombus complètement chargé, extrudez suffisamment de thrombus pour qu’il reste exactement cinq centimètres dans le microcathéter. Coupez l’excédent avec une lame de rasoir.

Marquez le microcathéter à 16 millimètres de la pointe pour délimiter l’étendue du cathéter à avancer intraluminiquement. Les thromboemboles préchargés ont été injectés dans l’artère carotide interne de 135 sujets répartis dans six laboratoires de recherche afin de tester la faisabilité du modèle d’occlusion de l’artère cérébrale moyenne thromboembolique. L’imagerie par résonance magnétique a été réalisée après trois jours chez 102 animaux, indiquant un taux de complétion de 75 %.

La perte d’animaux avant l’imagerie était constante dans les six laboratoires. Le volume moyen de lésions sur tous les sites était de 13 % de l’hémisphère ipsilatéral, avec une certaine variation entre les six laboratoires. Notre protocole imite le thrombus et la thrombolyse humains, réduit l’utilisation animale, standardise la chirurgie et atteint une reproductibilité multicentrique fiable.

Résultat significatif de nos recherches, nous avons créé un modèle TE-MCAo reproductible et évolutif, utilisable dans plusieurs laboratoires avec des résultats cohérents et un contrôle qualité structuré. Ce modèle peut être utilisé de manière constante dans des études d’AVC en laboratoire unique ou multiple, améliorant le dépistage thérapeutique et accélérant la traduction des traitements cérébraux candidats à protection cérébrale.