הליך כירורגי עבור משלוח של תא גזע עובריים שמקורם בתאי האנדותל כדי hindlimb איסכמי הוא הוכיח, עם מעקב פולשני על ידי הדמיה פליטת אור.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
עובריים, נגזר גזע לתאי אנדותל לטיפול איסכמיה Hindlimb
במאמר זה
סיכום
תקציר
עורקים היקפית (PAD) המחלה נובעת היצרות של העורקים ההיקפיים המספקים דם מחומצן וחומרים מזינים ברגליים ובכפות הרגליים, פתולוגיה זו גורמת לתופעות כגון צליעה לסירוגין (כאב בהליכה), כיבים כואבים איסכמי, או אפילו איבר סכנת נמק. מקובל לחשוב כי האנדותל של כלי הדם, monolayer של בתאי האנדותל המשקיעה את פני השטח luminal של כל כלי הדם הלימפה, משחקת תפקיד דומיננטי הומאוסטזיס של כלי הדם ואת התחדשות כלי הדם. כתוצאה מכך, גזע מבוססי תאים התחדשות של האנדותל עשויה להיות גישה מבטיחה לטיפול PAD.
בסרטון הזה, אנחנו מדגימים את השתלת תא גזע עובריים (ESC), שמקורם בתאי האנדותל לטיפול איסכמיה hindimb חד צדדית כמודל של PAD, ואחריו מעקב פולשני של התא הישרדות ביות ועל ידי הדמיה פליטת אור. החומרים הספציפיים ונהלים למסירה תא הדמיה יתוארו. פרוטוקול זה עוקב אחר פרסום בתיאור אינדוקציה של איסכמיה hindlimb ידי Niiyama ואח' 1.
פרוטוקול
1. דיפרנציאציה של ESCs Murine לתאי אנדותל
- פרוטוקול עבור המבדילים ESCs לתאי אנדותל מתואר במקומות אחרים ולא מוקד בפרוטוקול זה 2,3. בקצרה, התאים מותר להבדיל, ואת התאים חיובית עבור סמנים האנדותל כגון CD31 או cadherin אנדותל כלי הדם (VE-cadherin) הם מטוהרים מכן על ידי מיון הקרינה התא הפעיל (FACS).
2. בנייה של ג'ין כתב פעמיים היתוך ו transduction lentiviral
- פליטת אור....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
ESCs הם מקור התא מבטיח לטיפול איסכמיה רקמות בגלל הפלסטיות של בידול שלהם ויכולתם להצמיח שושלות תאים הכולל את כל שלוש שכבות נבט, כולל בתאי האנדותל. כדי להתגבר על חששות אתיים הקשורים ESCs, הנגרם לתאי גזע pluripotent (iPSCs) עשוי להיות חלופה pluripotent בתאי גזע ממקור זה מתגבר על שיקולים אתיים. מלבד ESCs, בתאי גזע בוגרים, כגון ובתאים אנדותל (EPCs) ותאי גזע hematopoietic (HSCs) יכול לשמש גם, אבל אלה סוגי תאים אולי האפקט הטיפולי מוגבלת בחולים עם PAD. משלוח תוך שרירית של תאים היא פולשנית וקלה לביצוע, וזה מצב.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תודות
המחברים מודים אנדריאה Axtell, סטושי Itoh, MD, ג'ף Velotta, MD, גרנט הויט, רוברט ג רובינס, MD, יו ג'ין, MD, טים דויל, PhD, והדמיה הקטן סטנפורד בעלי חיים Core לקבלת סיוע טכני. המחברים גם להודות AM ביקפורדס, Inc התמיכה של ציוד וטרינרי. מחקר זה נתמך על ידי מענקי מחקר מן המכון הלאומי לבריאות (HL-75774 R01, R01 CA098303, R21 HL085743, 1K12 HL087746), טבק קשורות קליפורניה מחלות תוכנית המחקר של אוניברסיטת קליפורניה (15IT-0257 ו-1514RT 0169) , ומכון קליפורניה עבור הרגנרציה לרפואה (RS1-00183).
NH נתמך על ידי מענק של איגוד הלב האמריקני. איגוד הלב יכול.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות | |
|---|---|---|---|---|
| כלי ניתוח | כלי | Fine Science Tools | ||
| מחט מזריק | כלי | BD Biosciences | עדיף להשתמש במזרק אינסולין 28G | |
| סלקושין פוספאטי מאוזן (PBS) | ריאגנט | Invitrogen | ||
| D-לוסיפרין | ריאגנט | Biosynth International, Inc | הכינו מראש תמיסות סטוק מסוננות של D-luciferin בריכוז של 15 מ"ג/מ"ל ב-PBS | |
| מערכת דימות ביו-לומינסנציה IVIS 200 ותוכנת רכישת נתונים | ציוד |  Xenogen Corporation |
מקורות
- Niiyama, H., Huang, N. F., Rollins, M., Cooke, J. P. Murine model of hindlimb ischemia. JoVE. , (2008).
- Levenberg, S., Golub, J. S., Amit, M., Itsakovitz-Eldor, J., Langer, R. Endothelial cells derived from human embryonic stem cells. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 4391-4396 (2002).
- Yamashita,....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
