Photoswitching Intravital ומעקב אחר Dendra2 שכותרתו תאים סרטניים דרך החלון הדמיה החלב היא טכניקה המאפשרת לנו תמונת התנהגות גרורתי של תאים סרטניים microenvironments הגידול נבחר על זמנים של ימים.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
במאמר זה
סיכום
תקציר
בעשור האחרון, מיקרוסקופיה intravital של גידולים בשד אצל עכברים וחולדות ברזולוציה של תא בודד
פרוטוקול
1. הדור של גידולים פלורסנט באמצעות הזרקה של תאים סרטניים לתוך כרית שומן החלב:
- לגדול קו תא להביע Dendra2 חלבון (כסמן cytoplasmic) ל 40 - 80% confluency.
- לשטוף כלים לפחות 3 פעמים עם Ca PBS w / o או 2 + Mg 2 +.
- הוסף 3 מ"ל של טריפסין לכל צלחת 10 ס"מ לדגור על 37 מעלות צלזיוס עד שרוב התאים לנתק ולאחר מכן פגע את המנה כנגד משטח שטוח כדי ללחוץ אותה.
- יש לשטוף את כל התאים את המנה,....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תודות
עבודה זו נתמכה על ידי משרד ההגנה האמריקאי (BC075554 לב"ג ו BC061403 אל DK), ארה"ב National Institutes of Health (U54GM064346 כדי JvR; CA100324 אל JC, ג'ס ואת ג"ו; CA77522 כדי ג'ס, U54CA126511 אל JC ו BG). אנו מודים ד Entenberg לעזרה עם מיקרוסקופיה, מ Rottenkolber לעזרה בייצור של תיבת הדמיה ג'יי פולארד (אלברט איינשטיין קולג 'לרפואה) עבור נוגדן F4/80.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| PBS ללא Ca, Mg | GIBCO, מבית Life Technologies | 14190-144 | |
| טריפסין | GIBCO, מבית Life Technologies | 25300 | |
| HBSS | GIBCO, על ידי Life Technologies | 14025 | |
| מדיום DMEM (תאי MDA-MB-231) | GIBCO, מבית Life Technologies | 11965 | |
| איסופלוראן (Aerrane) | Baxter International Inc. | # NDC 10019-773-40 | |
| עכבר SCID | המכון הלאומי לסרטן | לא רלוונטי | |
| כלי תרבית | BD Biosciences | 353003 | הזמנה מותאמת אישית |
| כיסוי זכוכית עגול 8 מ"מ | סיינטיפיק, אינק. (Scientific, Inc.) | 8CIR-1-FIS |
מקורות
- Farina, K. L., Wyckoff, J. B., Rivera, J., Lee, H., Segall, J. E., Condeelis, J. S., Jones, J. G. Cell motility of tumor cells visualized in living intact primary tumors using green fluorescent protein. Cancer Res. 58, 2528-2532 (1998).
- Naumov, G. N., Wilson, S. M., MacDonald, I., Schmidt, E. E., Morris, V. L., Groom, A. C., Hoffman, R. M., Chambers, A. F.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
