Method Article

בידוד בתאי גזע רקמות השלד והשרירים Soft

DOI:

10.3791/2011

⸱

July 5th, 2010

 ,  , 
1Stem Cell Research Center, Childrens Hospital of Pittsburgh of UPMC, 2Department of Bioengineering, University of Pittsburgh, 3Department of Orthopedic Surgery, University of Pittsburgh, 4Department of Pathology, University of Pittsburgh, 5Department of Molecular Genetics & Biochemistry, University of Pittsburgh

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בידוד גזע בוגרים תאים ברקמות הרכות השלד מבוסס על מהירות הדבקות של התא בקבוק.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בתאי גזע בוגרים כבר מזמן דנו לגבי היישום שלהם ברפואה רגנרטיבית. בתאי גזע בוגרים יצרו מידה רבה של התרגשות לטיפול רקמות פצועים וחולים בגלל היכולות המרשימות שלהם לעבור רב השושלת התמיינות תאים ויכולת התחדשות עצמית שלהם. והכי חשוב, התכונות הללו הפכו אותם יתרון לשימוש טיפולים עצמיים השתלת תאים. הפרוטוקול הנוכחי יהיה להכניס את הקוראים לטכניקה preplate שונה שבו הרקמות הרכות של מערכת השלד, שריר גיד למשל ואת, הם 1

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ככלל, הנוהל המלא preplate שונה דורש 1-2 ימים של הכנות, 1 שבוע של ביצוע הליך טכני, 2-3 ימים של הזדהות עם התא immunocytochemistry, וכן תוספת של 2-3 שבועות הרחבה בתאי גזע האוכלוסייה. הציוד הנדרש תרבות בתאי גזע הם דומה לזו של מערכות תרבות אחרים תא הכולל ספסל העליונה צנטריפוגות, CO 2 באינקובטור, זרימה למינרית רקמות ברדס תרבות הפוכה מיקרוסקופ פלואורסצנטי מצויד במצלמה דיגיטלית. בתאי גזע בודד גם ניתן לשכפל ו יכול להיות מאוחסן לטווח ארוך חנקן נוזלי עבור 1,2 הלימודים הנוכחית או בעתיד. כל ריאגנטים החומרים המשמשים לצורך הליך זה חייב להיות סטרילי לטפל בסביבה נקייה מחיידקים.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

זה כבר הכיר בכך כמה רקמות בוגרות מכילים בתאי גזע מרובים. במהלך השנים האחרונות של המחקר, בתאי גזע זוהו ברקמות השלד רך, כולל שריר גיד השלד. זה פרוטוקול הנוכחית פרטים הליך המכונה הטכניקה preplate שונה, כי שימש בהצלחה במעבדה שלנו לבודד בתאי גזע בוגרים של גידים שרירי השלד. באמצעות טכניקה שונה preplate שתוארו לעיל התאים ניתן לחלק את האוכלוסיות כמה בהתבסס על מאפייני הדבקה שלהם צלוחיות מצופה קולגן (איור 1). Fibroblasts ו myofibroblasts נמצא בתוך הרקמות מהר לדבוק צלוחיות מצופה קולגן בתוך 2.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
אין ניגודי אינטרסים הכריז.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

החוקרים מעריכים מאוד של גב 'Haiying פאן מר איאן Bellayr לעזרה הטכנית שלהם על בידוד התא הסרטים הנוכחי מר קייל הולדן ומר יונתן לוקאס על עזרתם על עריכת שקופיות. תודה רבה על הרשימה הבאה של אנשים שהיו מעורבים בפיתוח של טכניקות preplate השתנה בשנים האחרונות: בני הזוג. בורהאן Gharaibeh, BaoHong קאו, דיזי ברידג'ט, תומס ר 'פיין, Aiping לו, Hairong פנג, הידקי אושימה, בו זנג, Xiaodong מו, Kimimasa Tobita, רון ינקובסקי, Makato Ikezawa. אנו אסירי תודה על הסיוע הטכני של ג'יימס ה 'Cummins, ריאן Pruchnic, יוסף Feduska, רבקה ג Schugar, Haiying פאן וג'סיקה Tebbets. המחבר גם רוצה להכיר תמיכה כספית עבור עבודה זו מפני ניוון ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
DMEMInvitrogen#11995-073
FBSInvitrogen#10437-028
סרום סוס מומתבחום Invitrogen#26050-088
תמצית עובר אפרוחכימי מדויק#CE650T-10
100U 100U מ"ל פניצילין/סטרפטומיציןInvitrogen#15140-122
Dulbecco's PBSInvitrogen#14190-250
תמיסת מלח חוצצת של האנקInvitrogen#24020-117
קולגנאז מסוג XI 0.2%(wt/vol)Sigma-Aldrich#C7657
Dispase2.4U mlInvitrogen#17105-041
Trypsin-EDTA0.5%(wt/vol) (פי 10; 5 גרם ליטר טריפסין (1:250)Invitrogen#15400-054
קולגן לציפוי בקבוק: קולגן מסוג I שמקורו בעור עגל 0.1 גרם ליטרSigma-Aldrich#C-9791
DMSOSigma#D-2650

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Gharaibeh, B. Isolation of a slowly adhering cell fraction containing stem cells from murine skeletal muscle by the preplate technique. Nat Protoc. 3, 1501-1509 (2008).
  2. Qu-Petersen, Z. Identificatio....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Stem Cell IsolationMusculoskeletal TissueEnzymatic DigestionPreplate TechniqueCollagen Coated FlaskCell DissociationFlow CytometryImmunofluorescenceMicroscopyProliferation Medium

Related Articles