שתי טכניקות שניתן להשתמש בהם כדי לבסס את המודל הזה: הזרקה של השעיה תא סרטני בקיר cecal או השתלה של פיסת גידול תת עורי על cecum. מודל זה שימושי לחקר התפתחות טבעית של סרטן המעי הגס בדיקות סוכני טיפולית חדשה נגד סרטן המעי הגס.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
במאמר זה
סיכום
תקציר
המודל הגידול המסורתי תת עורי הוא פחות אידיאלי לחקר סרטן המעי הגס. מודלים העכבר orthotopic של סרטן המעי הגס, אשר תכונה תאים סרטניים הגדלים במיקום הטבעי שלהם, לשכפל מחלות אנושיות עם איכות גבוהה. שתי טכניקות שניתן להשתמש בהם כדי לבסס את המודל הזה. טכניקות שניהם דומים דורש הרדמה העכבר laparotomy לחשיפה של cecum. אחת הטכניקות כולל הזרקה של השעיה סרטן המעי הגס התא בקיר cecal. תאים סרטניים גדלים הראשון תרבות, שנקטפו כאשר subconfluent ומוכן כמו השעיה תא בודד. נפח קטן של תאים מוזרק באיטיות, כדי למנוע דליפה. השיטה האחרת כרוכה השתלה של פיסת גידול תת עורי על cecum. עכבר עם גידול הוקמה בעבר המעי הגס תת עורית היא להרדים את הגידול הוסר באמצעות טכניקה סטרילית. היצירה הגידול מחולק לחתיכות קטנות להשתלה עכבר אחר. לפני ההשתלה, הקיר cecal ניזוק קלות כדי להקל על חדירת תאים סרטניים. הזמן לפתח גידולים ראשוניים גרורות בכבד ישתנו בהתאם הטכניקה, שורת תאים, ומינים העכבר בשימוש. זה מודל העכבר orthotopic שימושי לחקר התפתחות טבעית של סרטן המעי הגס בדיקות סוכני טיפולית חדשה נגד סרטן המעי הגס.
פרוטוקול
I. הכנה Cell
- בתאי סרטן המעי הגס גדלים בתרבות שנקטפו כאשר subconfluent.
- ההשעיה תא בודד הוא הכין פוספט שנאגרו מלוחים ושמרה על הקרח.
השנייה. גידול הכנה
- עכבר עם גידול הוקמה בעבר המעי הגס תת עורית היא מורדמים.
- הגידול הוסר תת עורית באמצעות טכניקה סטרילית מחולק 2-3 חתיכות מ"מ
- חתיכות הגידול נשמרים פוספט שנאגרו מלוחים על הקרח.
ג. עכבר הכנה
הערה: במעבדה שלנו אנו משתמשים בשאיפה isoflurane להרדים את העכבר, לחילופין, ניתן להשתמש בזריקות הרדמה כדי להשיג את אותו אפקט
- עומק ההרדמה היא הוערכה באמצעות צביטה הבוהן. לא צריך להיות שום לסגת רפלקס עם קמצוץ הבוהן.
- אנטיביוטיקה יכולה להינתן בשלב זה.
- עכבר הרדים, אשר היה מגולח בעבר, ממוקם כראוי.
- הבטן היא prepped עם פתרון בבטאדין.
- הבטן אתר כירורגי הם עטופים בצורה סטרילית.
IV. Laparotomy
- ניק קטן עשוי בעור
- שרירי הבטן הקיר הוא תפס והרים
- חלל הבטן הוא נכנס להב יחיד של המספריים משמש לדחוף את התוך בטני תוכן משם
- החתך מורחב 2-3 ס"מ
V. חשיפה של cecum
- Cecum עם כיס סיום עיוור שלו מזוהה exteriorized
- Cecum הוא מבודד משאר של העכבר בעזרת מראש לחתוך, גזה סטרילית
- מלוחים חם משמש כדי לשמור על לחות cecum
VI. הזרקה של תאים לתוך החומה Cecal
- G 27 או מחט עדינה משמש להזריק נפח 50 μL של תאים לתוך הקיר cecal
- המחט מוסרת
- הזריקה נבדק כדי להבטיח שאין דליפה
- Cecum הוא חזר אל חלל הבטן
VII. השתלה של גידול על גבי cecum
הערה: בנוסף הזרקת תאים לתוך הקיר cecal, גישה חלופית היא השתלת הגידול אל cecum
- דמות של תפר 8 מושם על cecum באמצעות 6-0 או 7-0 תפר בגודל
- הקיר cecal ניזוק קלות
- לאחר מכן, פיסת הגידול ממוקם
- תפר הוא כבול
- Cecum הוא חזר אל חלל הבטן
VIII. דופן הבטן עכבר סגירת ושחזור
- הקיר עכבר בטן סגור באמצעות שלושה תפרים קטע באמצעות 3-0 או 4-0 תפר בגודל
- לחלופין, אפשר להשתמש תפר פועל פשוט
- לאחר הניתוח משככי כאבים וכן בולוס נוזלים יכולה להינתן בשלב זה
- העכבר הוא מותר להתאושש מן ההרדמה.
הערה: עם הרדמה נשאפים זה בדרך כלל לוקח 30 שניות
IX. תוצאות - הגידול הראשוני ו גרורות בכבד
הגידול הראשוני - הראו באתרו (A) עם עדות neovascularization (ב); על צביעת H & E, גידולים פולשניים מקומי (C)
גרורות בכבד - הראו לשעבר vivo (ד)
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
למרות העכבר מודלים תת עורית גידול קל להקים לפקח, ברור כי מודל זה לא יכול לשכפל את האתר האנטומי המקורי של סרטן המעי הגס. בשל השוני microenvironment, תאים סרטן המעי הגס גדל מתחת לעור הוכחו לשנות הפנוטיפ שלהם כמעט תמיד נכשלים התקדמות גרורות 1,2. למעשה, תגובת הגידול לטיפול יכולים להשתנות באופן דרמטי, תלוי אם התאים הסרטניים מושתלים חוץ רחמי (תת עורית) לעומת המיקום orthotopic 3. מודלים העכבר orthotopic של סרטן המעי הגס, אשר תכונה תאים סרטניים הגדלים במיקום הטבעי שלהם, לשכפל מחלות אנושי...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תודות
המחלקה לכירורגיה, אוניברסיטת קליפורניה, סן פרנסיסקו
ריימונד שאהין, MD
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| מדיום ותרכיבים לתרבית תאים | ישתנו בהתאם לקו התאים שבו נעשה שימוש | ||
| Phosphate Buffered Saline | BioWhittaker | 17-512F | נמכר גם על ידי מספר ספקים אחרים |
| מבחנות צנטריפוגה 15 mL, פוליפרופילן | Corning | 430790 | |
| פלטות 6 בארות עם מכסה | BD Biosciences | 353046 | |
| פינצטת Iris, ישרה, קצוות משוננים | World Precision Instruments, Inc. | 15914 | מומלץ להחזיק זוג מכשירים אלו |
| מספרי דיסקציה Iris, ישרים, חדים | World Precision Instruments, Inc. | 14393 | |
| מחזיק מחט (רגיל) | World Precision Instruments, Inc. | 14109 | |
| מחזיק מחט (Castroviejo) | World Precision Instruments, Inc. | 14137 | |
| Cidex Plus | World Precision Instruments, Inc. | 7364 | יש לאוטקלאב את המכשירים מדי פעם, אך ניתן לעקרם גם על ידי השריה ב-Cidex |
| חוט תפירה 6-0 או 7-0 | עבור העקום (cecum); באדיבות המחלקה לכירורגיה, UCSF | ||
| חוט תפירה 3-0 או 4-0 | עבור דופן הבטן; באדיבות המחלקה לכירורגיה, UCSF | ||
| מכונת הרדמה / Isoflurane | J.A. Baulch and Associates | 3206 | נמכר גם על ידי מספר ספקים אחרים |
| משטח חימום, חד-פעמי, 6" x 6" | Prism Technologies | 20419 | |
| סרט הדבקה, כתום, 13 mm x 13 m | Fisher Scientific | 15901F | לקיבוע עכבר מורדם |
| מכונת גילוח Pro-Cord/Cordless Trimmer | Oster Professional Products | 78997-010 | לגילוח פרוות העכבר |
| Betadine | Fisher Scientific | 19-027132 | ניתן לרכוש גם בכל חנות לציוד רפואי |
| גזה 2 x 2, 3 שכבות | Johnson & Johnson | 7635 | ניתן לרכוש גם בכל חנות לציוד רפואי |
| שדה סטרילי, מחסום, 16" x 29" | Johnson & Johnson | 0905 | ניתן לרכוש גם בכל חנות לציוד רפואי |
| מקלונים עם טיפ פח), 6" | Fisher Scientific | 14-960-3Q | ניתן לרכוש גם בכל חנות לציוד רפואי |
| מזרק, 10 cc, עם Luer lock tip | BD Biosciences | 309604 | |
| מזרק, 1 cc, טוברקולין, slip tip | BD Biosciences | 309602 | |
| מחט 27 1/2 G | BD Biosciences | 305109 | |
| מחט 30 G | BD Biosciences | 305106 |
מקורות
- Heijstek, M. W., Kraneburg, O., Rinkes Borel, I. H. Mouse models of colorectal cancer and liver metastases. Dig Surg. 22, 16-25 (2005).
- Kobaek-Larsen, M., Thorup, I., Diederichsen, A., Fenger, C., Hoitinga, M. R. Review of colorectal cancer and its metastases in rodent models: comparative aspects with those in humans. Comp Med. 50, 16-26 (2000).
- Wilmanns, C., Fan, D., O'Brian, C. A., Bucana, C. D., Fidler, I. J. Orthotopic and ectopic organ environments differentially influence the sensitivity of murine colon carcinoma cells to doxorubicin and 5-fluorouracil. Int J Cancer. 52, 98-104 (1992).
- Kashtan, H., Rabau, M., Mullen, J. B., Wong, A. H. C., Roder, J. C., Shiptz, B., Stern, H. S., Gallinger, S. Intra-rectal injection of tumor cells: a novel animal model of rectal cancer. Surg Oncol. 1, 251-256 (1992).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
