שתי טכניקות שניתן להשתמש בהם כדי לבסס את המודל הזה: הזרקה של השעיה תא סרטני בקיר cecal או השתלה של פיסת גידול תת עורי על cecum. מודל זה שימושי לחקר התפתחות טבעית של סרטן המעי הגס בדיקות סוכני טיפולית חדשה נגד סרטן המעי הגס.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
במאמר זה
סיכום
תקציר
המודל הגידול המסורתי תת עורי הוא פחות אידיאלי לחקר סרטן המעי הגס. מודלים העכבר orthotopic של סרטן המעי הגס, אשר תכונה תאים סרטניים הגדלים במיקום הטבעי שלהם, לשכפל מחלות אנושיות עם איכות גבוהה. שתי טכניקות שניתן להשתמש בהם כדי לבסס את המודל הזה. טכניקות שניהם דומים דורש הרדמה העכבר laparotomy לחשיפה של cecum. אחת הטכניקות כולל הזרקה של השעיה סרטן המעי הגס התא בקיר cecal. תאים סרטניים גדלים הראשון תרבות, שנקטפו כאשר subconfluent ומוכן כמו השעיה תא בודד. נפח קטן של תאים מוזרק באיטיות, כדי למנוע דליפה. השיטה האחרת כרוכה השתלה של פיסת גידול תת עורי על cecum. עכבר עם גידול הוקמה בעבר המעי הגס תת עורית היא להרדים את הגידול הוסר באמצעות טכניקה סטרילית. היצירה הגידול מחולק לחתיכות קטנות להשתלה עכבר אחר. לפני ההשתלה, הקיר cecal ניזוק קלות כדי להקל על חדירת תאים סרטניים. הזמן לפתח גידולים ראשוניים גרורות בכבד ישתנו בהתאם הטכניקה, שורת תאים, ומינים העכבר בשימוש. זה מודל העכבר orthotopic שימושי לחקר התפתחות טבעית של סרטן המעי הגס בדיקות סוכני טיפולית חדשה נגד סרטן המעי הגס.
פרוטוקול
I. הכנה Cell
- בתאי סרטן המעי הגס גדלים בתרבות שנקטפו כאשר subconfluent.
- ההשעיה תא בודד הוא הכין פוספט שנאגרו מלוחים ושמרה על הקרח.
השנייה. גידול הכנה
- עכבר עם גידול הוקמה בעבר המעי הגס תת עורית היא מורדמים.
- הגידול הוסר תת עורית באמצעות טכניקה סטרילית מחולק 2-3 חתיכות מ"מ
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
למרות העכבר מודלים תת עורית גידול קל להקים לפקח, ברור כי מודל זה לא יכול לשכפל את האתר האנטומי המקורי של סרטן המעי הגס. בשל השוני microenvironment, תאים סרטן המעי הגס גדל מתחת לעור הוכחו לשנות הפנוטיפ שלהם כמעט תמיד נכשלים התקדמות גרורות 1,2. למעשה, תגובת הגידול לטיפול יכולים להשתנות באופן דרמטי, תלוי אם התאים הסרטניים מושתלים חוץ רחמי (תת עורית) לעומת המיקום orthotopic 3. מודלים העכבר orthotopic של סרטן המעי הגס, אשר תכונה תאים סרטניים הגדלים במיקום הטבעי שלהם, לשכפל מחלות אנושי.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תודות
המחלקה לכירורגיה, אוניברסיטת קליפורניה, סן פרנסיסקו
ריימונד שאהין, MD
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| מדיום ותרכיבים לתרבית תאים | ישתנו בהתאם לקו התאים שבו נעשה שימוש | ||
| Phosphate Buffered Saline | BioWhittaker | 17-512F | נמכר גם על ידי מספר ספקים אחרים |
| מבחנות צנטריפוגה 15 mL, פוליפרופילן | Corning | 430790 | |
| פלטות 6 בארות עם מכסה | BD Biosciences | 353046 | |
| פינצטת Iris, ישרה, קצוות משוננים | World Precision Instruments, Inc. | 15914 | מומלץ להחזיק זוג מכשירים אלו |
| מספרי דיסקציה Iris, ישרים, חדים | World Precision Instruments, Inc. | 14393 | |
| מחזיק מחט (רגיל) | World Precision Instruments, Inc. | 14109 | |
| מחזיק מחט (Castroviejo) | World Precision Instruments, Inc. | 14137 | |
| Cidex Plus | World Precision Instruments, Inc. | 7364 | יש לאוטקלאב את המכשירים מדי פעם, אך ניתן לעקרם גם על ידי השריה ב-Cidex |
| חוט תפירה 6-0 או 7-0 | עבור העקום (cecum); באדיבות המחלקה לכירורגיה, UCSF | ||
| חוט תפירה 3-0 או 4-0 | עבור דופן הבטן; באדיבות המחלקה לכירורגיה, UCSF | ||
| מכונת הרדמה / Isoflurane | J.A. Baulch and Associates | 3206 | נמכר גם על ידי מספר ספקים אחרים |
| משטח חימום, חד-פעמי, 6" x 6" | Prism Technologies | 20419 | |
| סרט הדבקה, כתום, 13 mm x 13 m | Fisher Scientific | 15901F | לקיבוע עכבר מורדם |
| מכונת גילוח Pro-Cord/Cordless Trimmer | Oster Professional Products | 78997-010 | לגילוח פרוות העכבר |
| Betadine | Fisher Scientific | 19-027132 | ניתן לרכוש גם בכל חנות לציוד רפואי |
| גזה 2 x 2, 3 שכבות | Johnson & Johnson | 7635 | ניתן לרכוש גם בכל חנות לציוד רפואי |
| שדה סטרילי, מחסום, 16" x 29" | Johnson & Johnson | 0905 | ניתן לרכוש גם בכל חנות לציוד רפואי |
| מקלונים עם טיפ פח), 6" | Fisher Scientific | 14-960-3Q | ניתן לרכוש גם בכל חנות לציוד רפואי |
| מזרק, 10 cc, עם Luer lock tip | BD Biosciences | 309604 | |
| מזרק, 1 cc, טוברקולין, slip tip | BD Biosciences | 309602 | |
| מחט 27 1/2 G | BD Biosciences | 305109 | |
| מחט 30 G | BD Biosciences | 305106 |
מקורות
- Heijstek, M. W., Kraneburg, O., Rinkes Borel, I. H. Mouse models of colorectal cancer and liver metastases. Dig Surg. 22, 16-25 (2005).
- Kobaek-Larsen, M., Thorup, I., Diederichsen, A., Fenger, C., Hoitinga, M. R. Review of colorectal cancer and its metastases in r....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
