מאמר שיטה

מודל רב-מעבדתי רשת ההערכה הפרה-קלינית לשבץ מוחי עם תרומבליזה: TE-MCAo

DOI:

10.3791/69522

⸱

19 בדצמבר 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Physiology and Neuroscience, Zilkha Neurogenetic Institute, Keck School of Medicine of USC, 2Department of Neurosurgery, Keck School of Medicine of USC, 3Department of Population Health Science and Policy, Icahn School of Medicine at Mount Sinai, 4Department of Internal Medicine, Division of Hematology, Oncology and Blood & Marrow Transplantation, Carver College of Medicine, University of Iowa, 5Departments of Neurology & Neurosurgery, Carver College of Medicine, Department of Epidemiology, College of Public Health, University of Iowa, 6The Medical College of Georgia at Augusta University, 7Department of Anesthesiology, Duke University, 8University of California, San Diego, 9Department of Neurology, Yale University, 10Neurovascular Research Unit, Massachusetts General Hospital, 11Laboratory of NeuroImaging, USC Mark and Mary Stevens Neuroimaging and Informatics Institute of the Keck School of Medicine of USC, 12Department of Neurology, Keck School of Medicine of USC

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כדי לדמות שבץ תרומבואמבולית, תסחיפים שהוכנו מדם עכברוש הטרולוגי הוזרקו לעורק המוחי האמצעי, ולאחר מכן ניתנו תרומבליזה מערכתית לצורך ריקנליזציה. גרסה זו של המודל מותאמת לשימוש ברשת רב-מעבדותית ותומכת בבדיקת טיפולים מועמדים מרובים.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מודלים עדכניים של שבץ מכרישים תרגומי מעוררים חסימה של עורק המוח האמצעי (MCAo) באמצעות סיבי ניילון, תסחיף מוזרק, תרומבין תוך-לומינלי או אנדותלין-1 פריוסקולרי כדי לדמות שבץ אנושי. מבין שיטות אלו, הזרקת תרומבובולי ואחריה תרומבוליזיס מדמה בצורה הטובה ביותר את אירועי הדלקת הנוירו-אינריטיים הנראים אצל מטופלים אנושיים ועלולה להיות עדיפה על שיטת סיב ניילון אינרטי הנפוצה ביותר. עם זאת, המודלים הסטנדרטיים של תרומבואמבוליקה, המשמשים במעבדות בודדות מובילות, יכולים להיות גוזלי זמן, להניב תוצאות משתנות, ולדרוש מיומנות רבה כדי לשלוט בהם. כדי להתמודד עם מגבלות אלו, פיתחנו מודל MCAo טרומבואמבולי שמכוון לחסימת כלי דם ומשתמש בתרומבוליזה תוך-ורידית להשגת קנליזציה מחדש, במקביל לתרומבוליזציה מערכתית הניתנת בתרחישים קליניים. כדי להפחית את מספר בעלי החיים, פיתחנו שיטה לאחסון דם מבעלי חיים תורמים לצורך הכנת תסחיף מאוחר יותר עבור מספר נבדקים. השימוש שלנו במיקרוקטטרים מוכנים מראש של דוקול מפשט את הכנת הקרישה והזרקה על ידי טעינת טרומבואמבולי מוקדמת למיקרוקטטרים שמוכנסים לעורק הקרוטיד הפנימי. כדי להשיג ריקנליזציה, הזרקנו טנקטפלאז תוך-ורידי במינון של 1.5 מ"ג/ק"ג. כדי לקדם שחזוריות, הכנו ובדקנו בשטח נהלי ניתוח סטנדרטיים, סרטוני הדרכה וסדנאות ניתוח מעשיות. המודל משתמש בגישה כירורגית סטנדרטית שצריכה להיות מוכרת לכל החוקרים המשתמשים במודל סיבי הניילון המקובל. העברת המיקרוקטטר לעורק הקרוטיד הפנימי הדיסטלי, תוך הימנעות מהעורק הפטריגופלטיני, מתבצעת בדומה להחדרת חוט ניילון. הערכות החלמה ואחרי שבץ עשויות להתבצע באמצעות פרוטוקולים התנהגותיים, רדיוגרפיים והיסטולוגיים טיפוסיים. מודל זה מציע גישה מעשית, ניתנת לשחזור ונגישה לחוקרים המחפשים מודל MCAo טרומבואמבולי עם ריקנליזציה מבוקרת.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

שבץ הוא גורם מוביל למוות ונכותברחבי העולם. מטופלים רבים נהנים מתרומבליזה תוך-ורידית, ומטופלים נבחרים נהנים מטרומבקטומיה מכנית. מכיוון שלא כל המטופלים מגיעים לבית החולים בזמן לתרומבוליזיס או טרומבקטומיה, ומכיוון שלא כל המטופלים נהנים מהחלמה מלאה, עדיין יש צורך משמעותי בפיתוח נוסף של תרופות מגנות מוח נוספות או משלימות (צ'רבוקטיביות). המודל הנפוץ ביותר לשבץ איסכמי של מכרסמים הוא חסימת מונוסילמנט של העורק המוחי האמצעי (MCA) ואחריה רפרוזיה מלאה. מודל זה מדמה חסימת כלי דם גדולים (LVO), ומדמה מטופלים עם שבץ גדול שעוברים כריתת דם מכנית מלאה ומוצלחת. עם זאת, מודל זה תופס אחוז קטן מהשבצים הקליניים. לעומת זאת, יותר מטופלים סובלים משבץ טרומבואמבולי משני לטרשת עורקים (קרע רובד טרשת עורקים במקום או תסחיף עורקים כתוצאה ממחלה מערכתית), ומטופלים בתרומבליזה מערכתית בלבד, שמודל הניילון אינו מצליח לשחזראת 2,3. בנוסף, מודל MCAo בחוט ניילון חסר את המפל הדלקתי הקשור לחסימה טרומבוטית 4,5. מודלים של בעלי חיים המשתמשים בתרומבואמבולי ואחריהם מתן תרומבולטי מערכתית ייצגו את הפתופיזיולוגיה והביולוגיה הבסיסית המתרחשת אצל רבים מחולי שבץ 4,6. עם זאת, עד כה, מודלים של שבץ טרומבואמבולי של מכרסמים ידועים כמורכבים וקשים לשכפול. במעבדות מבודדות עם מומחים ייעודיים, ניתן להשיג מודל טרומבואמבולי עם שחזור סביר. מודל כזה אינו מתאים לשימוש נרחב, כפי שנדרש בפרויקטים רב-מעבדתיים.

כאן אנו מספקים פרוטוקולים מפורטים לחסימת עורק מוחי תיכוני טרומבואמבולי מעודכן וסטנדרטי (TE-MCAo), ואחריו מודל תרומבליזה מערכתית. בפרט, פישטנו את הכנת הקרישה, סטנדרטיזנו את טעינת הקרישה לקטטרים, ואישרנו את יכולת ההרחבה של מודל זה לניסויים רב-מעבדתיים. פיתחנו מודל זה לשימוש ברשת ההערכה הפרה-קלינית לשבץ (SPAN). עם זאת, התכוונו שהמודל יהיה שימושי לכל רשת המבקשת ליישם ניסויים ברשתות פרה-קליניות בנפח גבוה של טיפולים חדשים ומועמדים. באמצעות המודל הסטנדרטי שלנו, הצלחנו לשרות TE-MCAo ל-6 חולדות ביום בכל אתר מחקר במהלך תקופת המחקר.

SPAN ורשתות דומות גדלו בתגובה לכישלונות חוזרים ומתמשכים לתרגם מגן מוחי מבטיחים מהסביבה הטרום-קלינית להצלחה בפרקטיקה קלינית7. בשנת 2019, המכונים הלאומיים להפרעות נוירולוגיות ושבץ (NINDS) יזמו את SPAN8. SPAN שואפת לסנן טיפולים פוטנציאליים בצורה יעילה יותר על ידי מזעור הטיה באמצעות הסתרה מרכזית, אקראיות וניתוח תוצאות מרכזי אוטומטי. SPAN 1 השתמשה במודל חוטי הניילון בשתי הגרסאות הראשונות שלה כי כל המעבדות המשתתפות כבר השתמשו בו, והיה קל לפרוס9. כדי לדגם בצורה נאמנה יותר היבטים רבים של תרומבומבוליזם ותרומבוליזה, SPAN ביקש ליצור את מודל TE-MCAo המתואר כאן. מודל זה יהיה מועיל למנתחים פרה-קליניים שעוברים ממודל חוטי ניילון למודל TE-MCAo. אנו ממליצים שהמעבדות הפרה-קליניות יאשרו את נוכחות שבץ 24/48 שעות לאחר MCAo (או TE-MCAo) באמצעות טכניקת הדמיה, לדוגמה, הדמיית תהודה מגנטית (MRI).

רשת SPAN תוארה במלואה במחקרים קודמים9, וכל נהלי הפעולה הסטנדרטיים (SOPs) של SPAN זמינים באתר האינטרנט של SPAN. בקיצור, הרשת מנוהלת על ידי מרכז תיאום (CC) המטפל בהפצת תרופות, בקרת איכות נתונים, אימות עמידה בפרוטוקול ותקשורת ברשת. כל ה-SOPs מנוסחים על ידי ה-CC ומאושרים על ידי ועדת ההיגוי לאחר בדיקה. ב-SPAN, לכל המכרסמים יש תג אוזניים ברקודד תואם MRI עם ההגעה למעבדות המחקר, וכל הנבדקים רשומים במאגר הנתונים האלקטרוניים למחקר SPAN (REDCap). בעלי החיים מחולקים באקראי על ידי ה-CC באמצעות טבלאות אקראיות מסודרות לפי אתר ומין. ב-SPAN 1 ו-SPAN 2, נבדקו יעילות טיפולים משוערים בשש מעבדות מחקר משתתפות. כל תרופות הבדיקה נארזו בבקבוקונים בעלי מראה זהה, סומנו במרכז התיאום, ונשלחו למעבדות מחקר בתחילת הפרויקט.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל מעבדות SPAN המשתתפות, כולל מרכז התיאום ב-USC, פעלו לפי הנחיות NIH ו-AAALAC לטיפול הומאני ואתי בבעלי חיים. אישור ה-IACUC המקומי התקבל בכל האתרים.

1. הכנת תרומבוס

הערה: כל הדם והקרישות צריכים להיות מטופלים בהתאם לכל ההנחיות המוסדיות המקומיות לסכנות ביולוגיות. כל החומרים שבאים במגע עם דם צריכים להיות מושלכים כפסולת ביולוגית מסוכנת או, במקרה של כלי ניתוח, לנקות ולחטא היטב באמצעות אוטוקלאב. כדי להפחית את השימוש בבעלי חיים תורמי דם בניסוי זה, פיתחנו שיטה לאחסון דם תורם ואז להשתמש בדם ליצירת תרומבומבולי לפי הצורך.

  1. שואב דם תורם טרי מעורק לצינור מיקרוצנטריפוגה בנפח 1.5 מ"ל או למיקרוצינוריות אתילנדיאמין טטרה-אצטית (EDTA) לילדים, וממלאים רק עד 500 מיקרוליטר.
    הערה: אנו מעדיפים קנולציה לעורק הירך לצורך לקיחת דם, מכיוון שלעורק הירך יש קוטר לומינלי גדול המאפשר קטטריזציה, הוא דו-צדדי ומאפשר שתי לקיחות דם נפרדות, ומהווה ניתוח שניתן לשרוד עבור המכרסמים. לפי ניסינו, ניתן לאחסן דם בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס למשך 4 שבועות.
  2. הוסיפו 1 מ"ל של תמיסת CaCl2 (5 מ"ג/מ"ל) ל-500 מיקרוליטר מהדם שנאגר ונוגד קרישה.
  3. מיד לאחר הפיכת נוגדי קרישה עם CaCl2, שאיפת דם מצינור המיקרוצנטריפוגה לצינור PE-50 באורך 100 ס"מ באמצעות יניקה עדינה.
    הערה: עיכוב יגרום לקרישת דם לפני שניתן יהיה להישאב לצינור PE-50.
  4. דגרו את הצינור המפותל במי מלח מחוממים מראש (PBS) בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך שעתיים בתנור שולחני.
    הערה: הנחת צלחת הפטרי על פלטת חימום פתוחה גורמת לתוצאה לא עקבית עקב חלוקת חום לא עקבית.
  5. בסיום הדגירה של שעתיים, יש להעביר מיד את צינור PE-50 המלא בדם לטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס לאחסון. הוא יישאר שימושי בשלבים הבאים בין 20-72 שעות.

2. טעינת קטטר

  1. חברו את צינור PE-50 המפותל (קוטר פנימי: 0.58 מ"מ) למזרק בנפח 3 או 5 סמ"ק מלא בתמלח ושחררו בעדינות את הקרם לצלחת פטרי המכילה PBS.
    הערה: זה עשוי לדרוש כוח משמעותי. החזק לחץ על אתר החיבור כדי לוודא שהקטטר והמזרק לא יתנתקו בעת ההוצאה. ניתן לחתוך את קטטר PE-50 לקטעים קטנים יותר (10-50 ס"מ) במידת הצורך כדי להקל על האקסטרוזיה.
  2. חתכו קטעי טרומבוס באורך של כ-6 ס"מ עם להב גילוח.
  3. שטוף כל קטע דם דם על ידי משיכה עדינה לקטטר PE-50 והוציא אותו במלואו 5 פעמים.
  4. לאחר מכן, שטפו את הקרקע על ידי משיכתו בעדינות לתוך קטטר PE-10 (קוטר פנימי: 0.279 מ"מ) והוצאו אותו במלואו 15 פעמים.
    הערה: אם יש שבירה תכופה בשלב זה, שקול להשתמש בהגדלה עם מיקרוסקופ ניתוח או גלגלת כירורגית כדי לוודא שהקרישה נשאבת בקו עם פתח הקטטר.
  5. אופציונלי: שימוש בכחול של אוונס כדי לדמיין טרומבים
    1. הכינו 4% Evan's Blue בתמיסת PBS 1x.
    2. הוסף 200 מיקרוליטר מ-4% Evan's Blue לצלחת פטרי מלאה ב-10 מ"ל של 1x PBS. זו תהיה התמיסה המרוכזת יותר = Evan's Blue Dilution #1.
    3. קח 400 מיקרולטר של Evan's Blue Dilution #1 וערבב לצלחת פטרי נפרדת מלאה ב-20 מ"ל של 1x PBS. זוהי תמיסה מדוללת של כחול אוון = דילול כחול של אוון #2.
    4. מניחים את הקריש בתמיסת הפטרי המרוכזת יותר של Evan's Blue (דילול #1) למשך שנייה אחת ואז העבירו לצלחת הפטרי הכחולה של Evan's מדוללת (דילול #2).
  6. טעין תסחיף אחד למיקרוקטטרים מוכנים מראש (קוטר פנימי: 0.2 מ"מ, קוטר חיצוני: 0.360 מ"מ, אורך: 300 מ"מ, מחובר למנעול לואר נקבה) ללא תסחיף אוויר בשיטת רטוב-רטוב.
    הערה: אנו ממליצים להשתמש בהגדלה (למשל, לופים של 2.5x) לשלב זה.
  7. לאחר שהקרם טעון במלואו, יש להוציא מספיק קרם כדי שיישאר בדיוק 5.0 ס"מ במיקרוקטטר. גזום את העודף עם להב גילוח.
    הערה: אורך הטרומבוס הטעון ניתן להתאמה ליישומים שונים בהתאם לגודל הקו הרצוי.
  8. סמן את המיקרוקטטר במרחק 16 מ"מ מהקצה, כדי לסמן את היקף הקטטר שצריך להתקדם תוך-אורית מעבר לפיצול העורק הקרוטידי המשותף.

3. ניתוחי בעלי חיים והרדמה

  1. השרה הרדמה עם 4% איזופלורן בתערובת חמצן:חנקן 30:70 ושמירה על הרדמה עם 1-2% איזופלוראן באותה תערובת גזים.
  2. נתנו משככי כאבים קרפרופן 5 מ"ג/ק"ג תת-עורית ואטרופין 0.05 מ"ג/ק"ג בתוך הפריטונית לשמירה על נוחות בעלי החיים במהלך הניתוח.
    הערה: רבים מהמנתחים מחליפים לאזור החתך 1.0 מ"ל בופיבאקאין (2.5 מ"ג/מ"ל).
  3. שמרו על טמפרטורת גוף של 37 ± 0.5 מעלות צלזיוס לאורך כל הניתוח באמצעות כרית חימום הנשלטת באמצעות גלאי טמפרטורה רקטלי.

4. איסוף דם תורם

  1. איסוף דם תורם באמצעות קטטריזציה עורקית ירכית. התאימו את המין הביולוגי של התורם למקבלים.
  2. אם יש להשתמש בדם באותו יום:
    1. הכינו שלושה צינורות צנטריפוגה בנפח 1.5 מ"ל. סמן כל שפופרת בסימון 500 מיקרוליטר עם עט מעבדה בלתי נשכח.
    2. הכינו שלושה סטים של צינורות PE-50, כל אחד באורך 100 ס"מ, המחוברים למזרק 1.0 מ"ל באמצעות מחט קהה בקוטר 23.
  3. אם יש לאחסן דם לשימוש מאוחר יותר, הכן שישה מיקרופונוריות EDTA לילדים. שחרר את הפקקים לשימוש קל יותר מאוחר יותר.
  4. הכינו צינור PE-50 באורך 10.0 ס"מ, מהודק בקצה אחד עם מהדק גומי ומשופע קהה בקצה השני.
    1. כדי ליצור מהדק עם נעלי גומי, הכנס טין אחד של מהדק המוסטטי סטנדרטי לתוך צינור PE-100 וקישוט כדי להתאים. חזור על זה בצד השני.
    2. כדי להפוך את ה-PE-50 לזווית קהה, חתכו תחילה את הקצה בזווית משופעת. אחר כך גזום את קצה נקודת הזין עם מיקרו-מספריים.
      הערה: חשוב להסיר את הנקודה כדי למנוע ניקוב בדופן האחורית של העורק לאחר ההכנסה, אך אם מוסרים יותר מדי מהקצה, אובדן אפקט הזיוף יקשה מאוד על הכנסת הקטטר לתוך-לומיניום.
  5. בצע חיתוך סטנדרטי לעורק הירך.
  6. הכן את החיה (גילח את אזור הירך הפנימית), מיקום בשכיבה גבית על שולחן הניתוח. סטריליזציה של העור עם 3 שטיפות של 70% אתנול ואחריהן שטיפה אחת עם בטדין או תמיסה חיטוי אחרת.
  7. אבטח את הרגליים האחוריות בצורה פרוסה באמצעות אזיקים רכים.
  8. בצע חתך אנכי בירך הפנימית באורך של כ-1.5-2 ס"מ לאורך הקפל הטבעי של החיתוך המפשעי עם הרגל. חתך זה יהיה אורתוגונלי למסלול האנטומי הצפוי של עורק הירך.
  9. באמצעות ניתוח קהה, נתח בזהירות עד כלי הירך. הפרדו בזהירות את עורק הירך מהווריד והעצב שעוברים באותו צרור.
  10. לסגור את עורק הירך למרחק עם רצועת משי 5-0 ולהשתמש בזנבות התפר כדי לספק מתח קל מרחוק עם המוסטטים.
  11. השלד את העורק הפמורלי ככל שמותר לעורק הפרוקסימלי, תוך עקיבת העורק למקורו הרטרופריטוניאלי. מניחים ברפיון לולאה של משי 5-0 סביב עורק הירך והשתמשו שוב בזנבות כדי לספק מתח עדין בקצה הפרוקסימלי של העורק. אל תהדק את קשר המשי בשלב זה. מתח זה ייצור המוסטזיס לאחר ביצוע הארטריוטומיה.
    הערה: ניתן להזיז את הלולאה קרוב יותר באמצעות מהדק מפרצת.
  12. כ-2/3 מהמרחק מלולאת התפר הפרוקסימלית, מניחים חתיכת תפר משי מתחת לעורק ויצרו ארטריוטומיה קטנה מרוחקת לתפר הרופף באמצעות מספריים מיקרו. התפר הרפוי ייקשר כדי לאבטח את הקטטר התוך-לומינלי לאחר הקניולציה.
  13. באמצעות מלקחיים חדים, הרם את הפתח העליון של העורקים והכנס את הקטטר הקהה והמשופע לפתח. קדימו את הקטטר כמה שיותר קרוב.
    הערה: ייתכן שיש חיכוך בין הקטטר לדופן הפנימית של כלי הדם. שני דברים יכולים לעזור בזה: 1) ציפוי החלק החיצוני של קצה הקטטר בנוזל סרוסי מבפנים הרגל ממש לפני הכנסתו לכלי הדם, ו-2) שימוש במלקצים קהים ומחורצים, להחזיק את החלק החיצוני של הכלי תוך כדי התקדמות הקטטר בו זמנית. זה מונע מהכלי להתקדם יחד עם הקטטר.
  14. לאחר שקצה הקטטר הוקדם כמעט עד לנקודת הלולאה הפרוקסימלית, שחררו את המתח מהזנבות של התפר הזה. יש למנוע דימום על ידי התאמה הדוקה של הקטטר בתוך כלי הדם.
  15. קדם את הקטטר מספיק כך שהלולאה הרופפת, כאשר היא מתהדקת, תקיף את הקטטר. הדק את התפר בעדינות, כדי לוודא שהתפר לא מהודק עד כדי חסימת הקטטר. כמו כן, ודא שהתפר אינו נמצא על המפתח של הקטטר, בהתחשב באופיו המחודד של קטע קטטר זה.
  16. שחרר את הקלמפ הגומי. הקטטר אמור להתמלא מיד בדם.
  17. מלאו את צינורות הצנטריפוגה הפתוחים או את צינורות המיקרו EDTA לילדים, תוך הכנסת לא יותר מ-500 מיקרוליטר בכל אחד מכלי האיסוף.
  18. לאחר מילוי המיקרוצינורות, הסר את קטטר PE-50 מהעורק הירך, קשור את הקצה הפרוקסימלי, וסגר את החתך עם תפר פרולן 5-0 שנקטע.
  19. אם יש להשתמש בדם מאוחר יותר, הניחו את הפקקים על צינורות ה-EDTA הילדים המלאים ואחסנו אותם בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס.
  20. אם יש להכין את הקרישה לשימוש באותו יום, יש להמשיך לשלב 1.2 למעלה.
  21. חזרו מיד על הפעולה עם צינורות הצנטריפוגה שנותרו.
  22. תורמי דם עורקיים עשויים להיות מוחזרים לוויואריום לאחר ההחלמה מהרדמה אם בוצעה קטטריזציה חד-צדדית. העורק הפמורלי הנגדי יכול לעבור קטטר מאוחר יותר, אך לאחר קטטריזציה דו-צדדית של עורק הירך, יש להמתים את התורמים בהתאם לתקנות ה-IACUC.

5. TE-MCAo

הערה: שיטת TE-MCAo משתמשת בחתך סטנדרטי לעורק הקרוטיד המשותף. הבחירה בהרדמה ובגישת הקיצוצים נתונה למשתמש. הפרוטוקול כאן מתחיל בנקודה שבה המנתח כבר בודד את עורק הקרוטיד הרגיל (CCA), עורק הקרוטיד הפנימי (ICA) והעורק הקרוטידי החיצוני (ECA).

  1. חשפו את ה-CCA וחזרו עם רצועת משי 3-0. עשה את אותו הדבר עבור ה-ECA וה-ICA.
  2. באמצעות חבורה או צריבה, יש לחשוף ולסגור את העורק העורפי.
  3. חשפו ונסחו או חסמו את עורק הפטריגופלטין (PPA).
    הערה: עם מספיק ניסיון, ניתן להשמיט שלב זה. אנו ממליצים לבצע את השלב הזה תמיד בעת למידת ההליך.
  4. באמצעות משיכה עדינה, מזיזים את ה-ECA וה-ICA לתצורת "T".
  5. קשור את רצועת ה-CCA רק לאחר שכל השלבים שהושלמו.
  6. בצע ארטריוטומיה ב-ECA (מתודולוגיית Zea Longa CCAפתוחה 10) באמצעות מיקרו-מספריים.
  7. באמצעות שיטת השיפוע-קהה המתוארת בשלב 4.4.2, יש להכין את קצה אחד מהקטטרים המיקרו-טעונים שכבר היו טעונים (קוטר פנימי: 0.2 מ"מ, קוטר חיצוני: 0.360 מ"מ, אורך: 300 מ"מ, מחובר למנעול לואר נקבה).
  8. הכניסו בזהירות את המיקרוקטטר עם תרומבוס טעון מראש לתוך ה-ECA. שחררו את לולאת ההגבלה של ה-ICA והתקדמו את המיקרוקטטר תוך-גולגולתי ל-16 מ"מ בפיצול התרדמה תחת ויזואליזציה ישירה כדי למנוע קנולציה לא מכוונת של ה-PPA החוץ-גולגולתי.
    הערה: אם הקטטר מעדיף להיכנס ל-CCA, לחץ עדין עם קפיץ כותנה מחודד עשוי לסייע בכיוון הקטטר המתקדם לתוך ה-ICA.
  9. אבטח את המיקרוקטטר התוך-לומי ל-ICA ו-CCA באמצעות משי 3-0, תוך זהירות לא להדק יתר על המידה.
  10. הזרקו 20 מיקרוליטר למזרק בנפח 1 מ"ל עם משאבת מזרק ממונעת בקצב של 10 מיקרוליטר/דקה למשך 2 דקות.
    הערה: בדרך כלל, משאבת המזרק לא תתקדם בהתחלה עד שמצטבר לחץ מספק.
  11. הזרקו עוד 20 מיקרוליטר של מלח סטרילי באותן הגדרות משאבה.
    הערה: במהלך מחקר זרימת הדם באמצעות הדמיית לייזר מנוקדת, מצאנו הצלחה של 100% עם שטיפה של 20 מיקרוליטר.
  12. הסר את המיקרוקטטר וקשור לצמיתות את ה-ECA עם תפר פרוקסימלי לאתר הארטריוטומיה. הסר את כל לולאות ההגבלה. יש לעקוב היטב אחר דליפת דם ולסגור אותם עם קשורה נוספת במידת הצורך.
  13. סגרו זמנית את חתך העור עם סיכות או תפר פרולן 5-0 רציף.
  14. הוציאו את החיה מההרדמה והניחו אותה בכלוב התאוששות חם.
  15. אופציונלי: מעבדות עשויות להשתמש בזרימת דופלר לייזר לאישור הצלחת חסימת MCA. חלופה נוספת היא לבצע הדמיית תהודה מגנטית ב-24 או 48 שעות כדי לאשר ולכמת את אוטם המוח.
    הערה: משתמשים רבים מעדיפים להזריק 1.5 מ"ל תמיסת רינגר תמיסת תמיסת תמלח או לנקטיבית בסיום הניתוח.

6. טרומבוליזה מערכתית

הערה: ניתן לרכוש טנקטפלאז (TNK, 1.5 מ"ג/מ"ל) לשימוש כתרומבליזה מערכתית. משתמשים עשויים להעדיף סוכני ליז אחרים. בקבוקי 50 מ"ג בודדים מורכבים מחדש עם 50 מ"ל מים מזוקקים, ואז 2.5 מ"ל מופרדים בדיוק לבקבוקונים של 3.0 מ"ל. האליקווט עשויים להיות מוקפאים בטמפרטורה של מינוס 20°C לשימוש עתידי. היציבות של מפעיל פלזמינוגן רקמה רקומביננטית מחודשת המאוחסן בטמפרטורה של -20°C היא 60 ימים11.

  1. הפשיר אליקו קפוא אחד של TNK לכל נושא. הפשרה בטמפרטורת החדר למשך כ-15 דקות.
  2. באמצעות מזרק של 1 סמ"ק, משוך בדיוק 1.5 מ"ג/ק"ג. לדוגמה, עכבר במשקל 300 גרם יצטרך 0.45 מ"ג.
  3. הרדימו מחדש את החיה והסרו את סגירת העור הזמנית.
  4. חשוף כל ענף של הווריד היורדי החיצוני.
    הערה: וריד הזנב יכול לשמש אם המעבדה נוחה יותר עם המסלול הזה. העדפנו להשתמש בווריד הג'וגולרי כי מנתחי SPAN מרגישים נוח יותר עם מוביליזציה חיצונית של ורידי הג'וגולרי, וזה נעשה באופן שגרתי במודל הפילמנט שלנו.
  5. באמצעות מחט של 30 או 32 G, יש להעביר את ה-TNK על ידי ניקוב ישיר לווריד.
    הערה: בהתחלה, המשתמשים עשויים לרצות לבודד את הווריד בין 3-0 לולאות משי. עם תרגול, זה לא יהיה נחוץ.
  6. סגור את החתך עם פרולן 5-0 מופרע או תפר לא נספג אחר.
  7. החזיר את החיה לכלוב ההתאוששות כפי שהיה בשלב 5.14.

7. שיטות סטטיסטיות

  1. ליצירת סטטיסטיקה תיאורית, השתמשו בממוצע ובסטיית תקן עבור נתונים מספריים מבוזרים נורמליים, והשתמשו בטווח חציוני ובין-רבעוני עבור נתונים שאינם מבוזרים נורמלית. הצג נתונים קטגוריים כהתפלגויות תדירות. לבדיקת השערות, יש ליישם את מבחן ה-t או ANOVA לפי הצורך לנתונים פרמטריים מבוזרים נורמלית; אחרת, אל תבצע בדיקות השערות.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
איור 1: איסוף דם מבעלי חיים תורמים והכנת דם דם. דם נלקח מהחיה התורמת באמצעות קטטריזציה בעורק הירך והועבר לצינור מיקרוצנטריפוגה עם (ניתן לאחסן עד 4 שבועות) או ללא EDTA (שימוש באותו יום). להכנת הקרישה, נוספה תמיסת כלוריד סידן לצינורות הדם המאוחסנים ונשאבה מיד לקטטר PE-50. צינור PE-50 המפותל נדגר במלח (PBS) מחומם מראש בטמפרטורה של 37°C למשך שעתיים בתנור שולחני. לאחר שעתיים, צינור PE-50 מלא בדם הועבר מיד ל-4°C לאחסון. ראו סעיף 1 בפרוטוקול למידע נוסף. אנא לחצו כאן כדי לצפות בגרסה מוגדלת של הדמות הזו.

figure-results-2
איור 2: טעינת תרומבוס לקטטר להזרקה. (א) ביום הניתוח של MCAo, הקרישה הועברה מצינור PE-50 לצלחת פטרי המכילה PBS. (ב) בצלחת הפטרי, הטרומבוס נחתך לאורך של כ-6 ס"מ באמצעות להב גילוח. (ג) ת'רומבוס נשטף עם PBS על ידי משיכתו לצינור PE-50 והוצאתו 5 פעמים ואז לצינור PE-10 15 פעמים. (ד) תרומבוס הועבר לצלחת פטרי המכילה תמיסת אוונס בלו מרוכזת. (ה) תרומבוס הועבר לצלחת פטרי המכילה תמיסת אוונס בלו מדוללת והוטען למיקרוקטטר מוכן מראש. (ו) המיקרוקטטר הוקדם דרך עורק התרדמה הפנימי של העכברוש עד ש-16 מ"מ מקצה הקטטר עבר מהפיצול הקרוטידי של עורק הקרוטיד הרגיל והוזרק באמצעות משאבת מזרק ממונעת. ראו סעיף 2 בפרוטוקול למידע נוסף. אנא לחצו כאן כדי לצפות בגרסה מוגדלת של הדמות הזו. 

במחקר היתכנות פיילוט, גייסנו 135 נבדקים ב-6 מעבדות מחקר. למרות שהנבדקים חולקו באקראי לאחד מ-8 טיפולים, אנו מדווחים כאן על נתונים מצטברים רק כדי להמחיש את היתכנות המודל. מתוך 135 נבדקים רשומים, TNK ניתן במינון ובשעה הנכונים ב-132 (98%). MRI בוצע 3 ימים לאחר TE-MCAo ב-102 (75%) בשל מוות בעלי חיים לפני הסריקה ב-33 (24%). אובדן בעלי החיים לפני יום 3 היה עקבי בכל שש המעבדות (טבלה 1), מה שמעיד כי ניתן לפרוס את המודל במספר אתרים. גודל ה-SD הממוצע ± הנגעים היה 13 ± 16% (אזור הנגע כולל איסכמיה ובצקת כאחוז מההמיספרה האיפסילטרלית) עם שונות מסוימת בין המעבדות (טבלה 2). ניתן לראות תמונות MRI מייצגות ותסחיפים לאחר המוות באיור המשלים 1.

מעבדה
משתנהAGDKIWMGSDYL
גודל מדגם (N)233011282419
MRI בוצע19249231413

טבלה 1: היתכנות לפי מעבדה. מעבדות הלימוד היו אוניברסיטת אוגוסטה (AG), דיוק (DK), אוניברסיטת איווה (IW), בית החולים הכללי של מסצ'וסטס (MG), אוניברסיטת סן דייגו (SD) ואוניברסיטת ייל (YL). מספר בעלי החיים הרשומים (N) ומספר השרדות לביצוע סריקת MRI בוצעו ביום השלישי לאחר השבץ. נתונים אלו תומכים בהיתכנות המודל.

האתרגודל מדגם (N)נפח הנגע (%) ממוצע ± SDמדד משמרת קו האמצע (%)
Mean ± SD
AG1911 ± 1411 ± 12
DK2418 ± 1719 ± 13
IW908 ± 1313 ± 12
MG2309 ± 1115 ± 17
SD1314 ± 2104 ± 19
YL1218 ± 2214 ± 15

טבלה 2: נפח הנגע שנצפה בסריקות MRI יום 3, לפי אתר. כדי לקבוע את השחזוריות של המודל בשישה אתרי מחקר, הושוו נפח הנגע (איסכמיה פלוס בצקת) והיסט קו האמצע. נפח הנגע מתואר כאחוז השטחי של ההמיספרה האיפסילטרלית. הזזת קו האמצע מבוטאת כאחוז הליניארי של רוחב המרבי של המרחב התוך-גולגולתי. הנתונים מאשרים הטרוגניות בין המעבדות.

איור משלים 1: תמונות מייצגות. (A-E) תמונות שונות של מוח עכברים בצורת רב-הדהוד וריבוי סריקות (MEMS) שצולמו 48 שעות לאחר TE-MCAo. החתכים נמצאים כ-1 מ"מ קדמי לברגמה. (פ-ג'יי) מספר דוגמאות של אמבולי שנתקעו במקור ה-MCA. אנא לחצו כאן להורדת הדמות הזו.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

שיפרנו את מודל המכרסמים הטרומבואמבוליים של שבץ איסכמי לשימוש ברשת בדיקות טרום-קליניות רב-מעבדתיות, SPAN. הפחתנו משמעותית את מספר בעלי החיים בשימוש על ידי פיתוח שיטה לאחסון דם תורם לשימוש עתידי. פישטנו גם את הכנת הטרומבואמבולי ואת הגישה הכירורגית כדי להקל על ביצוע מספר פרוצדורות MCAo ביום אחד. כוונתנו היא שה-TE-MCAo יגיע לאותן רמות נוחות של משתמש ונפחי ניתוח כפי שניתן בגרסת חוטי הניילון הנפוצה של ה-MCAo. כדי להשיג תוצאה זו, קיימנו שתי סדנאות הכשרת מנתחים פרונטליים, וכל המנתחים המעורבים במחקר כבר היו בעלי ניסיון של כמה חודשים, אם לא שנים, עם מודל הפילמנט הסטנדרטי יותר. הוכחנו היתכנות בשש מעבדות מחקר שונות והפגנו עמידה מצוינת בפרוטוקולים.

בבחירת יישום פרוטוקול זה, החוקר צריך לקחת בחשבון את הפריטים הבאים שקובעים את הצלחת הפרוטוקול. ראשית, זהירות קפדנית באיסוף דם תשפיע על היווצרות קרישת דם מוצלחת. יש לאסוף דם עורקי, לא ורידי, כדי למנוע קרישה מוקדמת. שנית, חשוב לאסוף יותר דם ממה שנראה שנדרש. לפעמים דגימה אחת תיכשל בקרישה במהלך הלילה, בעוד שהאחרות כן. שלישית, אנו ממליצים בחום לטעון את הקטטר באמצעות הגדלה אופטית, בין אם לופים כירורגיים עם פנס ראש או עדשה מגדלת עם תאורה. רביעית, ניתוח זהיר וזהיר של ה-CCA, ה-ICA וה-ECA חיוני למניעת קרעים וטרומבוזה תוך-כלי דם. כמו כן, חשוב להמחיש את ה-PPA כדי לוודא שהקטטר נכנס כראוי ל-ICA. חמישית, נדיר לראות תופעות לוואי אצל המכרסמים כתוצאה מהזרקת תרומבוליטיים. במחקרים שלנו לא ראינו תופעות לוואי, כגון אנגיואדמה או דימום היקפי, לאחר הזרקת TNK. זה לא אומר שזה לא אפשרי, אבל איננו מודעים לדיווחים על תופעות לוואי מערכתיות של תרומבוליטיקים במכרסמים. חוקר שבוחר ליישם פרוטוקול זה בפעם הראשונה עשוי להמליץ להתייעץ עם אחד החוקרים שמונו כשותף לכתיבה כאן, שכן מצאנו שהדרכה מותאמת אישית מועילה מאוד.

בבחירת מודל מחלות בעלי חיים לבדיקת טיפולים מועמדים, חשוב לייצג במדויק את אוכלוסיית המטופלים שהתרופה מיועדת לטפל בה. מודלים של שבץ איסכמי מוקדי כוללים מודלים פוטותרומבוטיים של רוז בנגל, חסימת עורק פיאלי קורטיקלי, והזרקת אנדותלין-1 סטריאוטקטית 13,14,15. למודלים אלו יש את היתרון ביצירת נגעים שניתנים לשחזור גבוה באזורים צפויים בקורטקס. יתרון זה הופך אותם למועדפים במחקרים על מנגנונים תאיים, או בקישור מיקום הנגע לתוצאות התנהגותיות. עלות נוספת, מורכבות והיעדר רכיב ריפרפוזיה הופכים אותם לפחות שימושיים בבדיקות סמים.

ה-MCAo עם מונופילמנט תוך-לומינלי או תסחיף תסחיף הם המודלים המועדפים להסתרת כלי דם גדולים (LVO)10,16,17. מודל המונופילמנט מצופה סיליקון פשוט לביצוע ונמצא בשימוש נרחב. למרות שמיקום וגודל הנגע פחות צפויים, בניסויים רחבי היקף של תרופות, ההטרוגניות הזו נחשבת ליתרון משום שגם שבץ אנושי הוא די הטרוגני18,19. חיסרון של שיטת המונופילמנט הוא שהחסימה היא ביולוגית אינרטית. אצל מטופלים, טרומבים ותרומבוליזה יוצרים מפל דלקתי הקשור לשחרור תרומבין, פלסמינוגן ואלמנטים נוספים של טרומבוס 20,21,22. כדי להתגבר על מגבלה זו, רבים הציעו מודלים של תסחיף תרומבולי בארנבים, חזירים, כלבים ופרימטים לא-אנושיים 23,24,25,26,27. מחקרים אלו מורכבים ודורשים מומחיות מיוחדת באופן כללי. למרות זאת, ניסינו להתאים את מודל התרומבואמבול לשימוש ברשת הבדיקות הרב-מעבדתיות והפרה-קליניות שלנו. זה דרש מאיתנו לפשט את הכנת הטרומבואמבוליות, לייעל את הגישה הכירורגית ולהפחית משמעותית את מספר בעלי החיים הנדרשים. פיתחנו מודל תרומבואמבולית, TE-MCAo, שניתן היה לפרוס בהצלחה בשש מעבדות שונות עם עמידה מצוינת בפרוטוקול (טבלה 1) וגודל נגע עקבי יחסית (טבלה 2). התפוקה הייתה מספקת, בממוצע 6 מקצועות בשבוע.

ישנם מספר שלבי פתרון תקלות שעשויים להיות שימושיים. כישלון דם בקרישה הוא המקור השכיח ביותר לכישלון פרוטוקולי והוא נובע לרוב מזיהום קטטר ההכנה ב-EDTA או הפארין אם הוא מונח על שולחן הניתוח. אנו ממליצים על טכניקת איסוף קפדנית. אנו גם ממליצים להכין את תמיסת כלוריד הסידן המשמשת לכיבוי ה-EDTA טרי כל שבוע או כל שבועיים. לאחר ששחררו את הקרם מהקטטר ההכנה, יכול להיות מאתגר לחתוך את הקרקע לחתיכות הנדרשות בגודל 5 ס"מ. חלק מהטרומבים שבריריים וקל להישבר. אנו ממליצים להכין את הקרישים באמצעות הגדלה אופטית, ובמקרים קיצוניים, לעבור לקריש תורם אחר. שאיפת והחלפת טרומבים דורשת רמת מיומנות בינונית; לכן אנו ממליצים על תקופת אימון די ארוכה. ודא שקצה קטטר השאיפה נקי מתקלות באמצעות הגדלה אופטית. ניתן לתקוע את הטרומבי בקטטר ההשרשה - אנו ממליצים על חילופי תנועה עדינים בין שאיבה להסרה (elution). עבור מנתחים המנוסים במודל הסיבים הטיפוסי של MCAo, זיהוי ה-PPA עשוי להיות שלב חדש. אנו ממליצים בחום לתייג את הטרומבית בכחול של אוון, כדי שניתן יהיה לעקוב אחרי הקטטר ולעקוב אחריו כשהוא עולה דרך ה-ICA. הפיצול של ה-ICA/PPA ניתן לאתר בקלות על ידי ניתוח עמוק וזהיר לאחר ה-ICA, וממוקם באופן אמין עמוק לענף דק של עצב הקרוטיד הפנימי.

לפרוטוקול הזה יש מגבלות מסוימות. יש מרכיב של מיומנות כירורגית הנדרש לביצוע קנולציה של עורק התרדמה של מכרסמים. עם זאת, זה נכון גם לגבי מודל הפילמנט. טיפול בקריקות הדם דורש גם מיומנות כירורגית. כמו בכל מודל טרומבואמבול, שיעור האוטם המוצלח נמוך יותר בהשוואה למודל הפילמנט. אם מטרת החקירה היא מקרים תכופים יותר של אוטם, מודל הפילמנט יהיה מועדף. מצד שני, אם המטרה היא שכפול של קרישת דם ותרומבליזה, אז מודל זה רצוי.

מודל זה מיועד לבדיקת מגני מוח מועמדים באמצעות מודל המשתמש בנאמנות בקריקת דם ותרומבליזה. כיוונים עתידיים עשויים לכלול גם מחקרים על טיפול אדג'ובנטי המתמקד בתופעת אי-ריפלו. רבים הציעו נוגדי קרישה וחומרים אנטי-טסיות למטרה זו.

לסיכום, פרוטוקול TE-MCAo המוצג כאן מותאם לאפשר פריסה במספר מעבדות. פישטנו את הכנת הטרומבים וייעלנו את הגישה הכירורגית. פיתחנו שיטה לאחסון דם תורם, מה שהפחית משמעותית את מספר בעלי החיים הנדרשים.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

PL מדווחת על הכנסות מ-Apex Innovations לייעוץ. ל-CA יש הסכמי ייעוץ עם BioAxane Biosciences ובית החולים Charite בברלין, והיא חברה במועצה מדעית מייעצת של Neurelis. EL הוא חוקר ראשי בניסוי קליני של NINDS שבודק OX1, מוצר מבוסס חומצת שתן של Freeox Biotech. אין לסופרים אחרים גילויים.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו נתמכה במענקים מהמכון הלאומי לבריאות (NIH): U24 NS113452 ו-U24 NS130600 (PL); U01NS113388 (AKC ו-ECL); UE5 RPPR 5UE5NS099008 (ML); U01NS130588 (קליפורניה); U01NS130590, (DH, MK, KD); U01NS130598 (תיכון); 1U01NS130557 (BH); U01NS130585 (LS).

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
מזרק של 1 מ"לBD309628
לופים של 10x
מזרק 1 סמ"קטרומוSS-01T
מחט קהה 23 גרםגריינג'ר5FVK7
מזרק 3.0 סמ"קBD309656
רצועת משי 3-0
מחט 30 גרםBD305128
תפר פרולין 5-0אתיקון8698כדי לסגור את החתך של העור
רצועת משי 5-0אתיקוןA182
מהדק מפרצת
סולפט אטרופיןוטרינר אחדNDC86136-006-10הפחתת הפרשות סימפונות
מלקחיים קהים עם חריצים קהים
בופיבאקאיןזליה פארמהNDC70594-118-01הרדמה מקומית
כלוריד סידןסיגמאC7902
קרפרופןזוטיס בע"מNADA #141-199משכך כאבים
צינורות צנטריפוגהאפנדורף22364111לאיסוף דם
אתנולקופטקUN1170
אוון ס בלוסיגמאE2129
כרית חימוםמנגנון הרווארדK021-435
מהדק המוסטטי
איזופלוראןוטרינר אחדNDC13985-528-60
לולאות האריגה האולטימטיבית Made By Meקבוצות הורייזוןלא רלוונטיאזיקים רכים
מספריים מיקרוF.S.T.15000-00
מיקרוקטטריםחברת דוקולPE-FL-360-200-300קטטרים להזרקה מוכנים מראש
קטטר PE-10BD427401
צינורות PE-100אינטרמדיק7426
צינורות PE-50BD427410
צינורות EDTA לילדיםBD MicrotainerK2E-363706דם תורם בחנות
צלחת פטריאפנדורף30702115
מלח עם בופר עם פוספטפישרB2438
פרוונטיקסPDI Inc.NDC10189-1080-1חומר חיטוי
מקלון אוזנייםVWR89031-288
להב סכין גילוחAccuTec Pro71960
סלייןהוספירה, בע"מ.NDC 0409-4888-02
מספרייםF.S.T.14958-11
מלקחיים חדים
משאבת מזרקניו איירה פאפס בע"מ.BS-300
תנור שולחניבוקל132000
טנקטפלאז (TNK)ג'ננטק, סן פרנסיסקוNDC50242-120-47טרומבליזה
תג אוזןRapID Lab, סן פרנסיסקו, קליפורניה;תגיות RapID

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. GBD 2021 Causes of Death Collaborators. Global burden of 288 causes of death and life expectancy decomposition in 204 countries and territories and 811 subnational locations, 1990-2021: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2021. Lancet. 403 (10440), 2100-2132 (2024).
  2. Saini, V., Guada, L., Yavagal, D. R. Global epidemiology of stroke and access to acute ischemic stroke interventions. Neurology. 97 (20 Suppl 2), S6-S16 (2021).
  3. Adams, H. P. Jr Classification of subtype of acute ischemic stroke. Definitions for use in a multicenter clinical trial. TOAST. Trial of Org 10172 in Acute Stroke Treatment. Stroke. 24 (1), 35-41 (1993).
  4. Braeuninger, S., Kleinschnitz, C. Rodent models of focal cerebral ischemia: procedural pitfalls and translational problems. Exp Transl Stroke Med. 1 (1), 8(2009).
  5. Zhang, Z., Chopp, M., Zhang, R. L., Goussev, A. A mouse model of embolic focal cerebral ischemia. J Cereb Blood Flow Metab. 17 (10), 1081-1088 (1997).
  6. Sokolowski, J. D., et al. Preclinical models of middle cerebral artery occlusion: new imaging approaches to a classic technique. Front Neurol. 14, 1170675(2023).
  7. National Institute of Neurological Disorders and Stroke rt-PA Stroke Study Group. Tissue plasminogen activator for acute ischemic stroke. N Engl J Med. 333 (24), 1581-1587 (1995).
  8. Lyden, P. D., et al. The Stroke Preclinical Assessment Network: rationale, design, feasibility, and stage 1 results. Stroke. 53 (5), 1802-1812 (2022).
  9. Lyden, P. D., et al. A multi-laboratory preclinical trial in rodents to assess treatment candidates for acute ischemic stroke. Sci Transl Med. 15 (714), eadg8656(2023).
  10. Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats. Stroke. 20 (1), 84-91 (1989).
  11. Davis, S. N., Vermeulen, L., Banton, J., Schwartz, B. S., Williams, E. C. Activity and dosage of alteplase dilution for clearing occlusions of venous-access devices. Am J Health Syst Pharm. 57 (11), 1039-1045 (2000).
  12. Bederson, J. B., et al. Rat middle cerebral artery occlusion: evaluation of the model and development of a neurologic examination. Stroke. 17 (3), 472-476 (1986).
  13. Krafft, P. R., et al. Etiology of stroke and choice of models. Int J Stroke. 7 (5), 398-406 (2012).
  14. Watson, B. D., Dietrich, W. D., Busto, R., Wachtel, M. S., Ginsberg, M. D. Induction of reproducible brain infarction by photochemically initiated thrombosis. Ann Neurol. 17 (5), 497-504 (1985).
  15. Ansari, S., et al. Endothelin-1 induced middle cerebral artery occlusion model for ischemic stroke with laser Doppler flowmetry guidance in rat. J Vis Exp. (72), e50014(2013).
  16. Zhang, R. L., Chopp, M., Zhang, Z. G., Jiang, Q., Ewing, J. R. A rat model of focal embolic cerebral ischemia. Brain Res. 766 (1-2), 83-92 (1997).
  17. Koizumi, J. Experimental studies of ischemic brain edema. 1. A new experimental model of cerebral embolism in rats in which recirculation can be introduced in the ischemic area. Jpn J Stroke. 8, 1-8 (1986).
  18. Morais, A., et al. Embracing heterogeneity in the multicenter Stroke Preclinical Assessment Network (SPAN) trial. Stroke. 54 (2), 620-631 (2023).
  19. Voelkl, B., Vogt, L., Sena, E. S., Wurbel, H. Reproducibility of preclinical animal research improves with heterogeneity of study samples. PLoS Biol. 16 (2), e2003693(2018).
  20. Ye, F., Garton, H. J. L., Hua, Y., Keep, R. F., Xi, G. The role of thrombin in brain injury after hemorrhagic and ischemic stroke. Transl Stroke Res. 12 (3), 496-511 (2021).
  21. Lee, S. R., Wang, X., Tsuji, K., Lo, E. H. Extracellular proteolytic pathophysiology in the neurovascular unit after stroke. Neurol Res. 26 (8), 854-861 (2004).
  22. Lo, E. H., Wang, X., Cuzner, M. L. Extracellular proteolysis in brain injury and inflammation: role for plasminogen activators and matrix metalloproteinases. J Neurosci Res. 69 (1), 1-9 (2002).
  23. Kaufman, H. H., Anderson, J. H., Huchton, J. D., Woo, J. A new canine model of proximal internal carotid embolism. Stroke. 10 (4), 415-418 (1979).
  24. Gralla, J., et al. A dedicated animal model for mechanical thrombectomy in acute stroke. AJNR Am J Neuroradiol. 27 (6), 1357-1361 (2006).
  25. Thomas, G. R., et al. Optimized thrombolysis of cerebral clots with tissue-type plasminogen activator in a rabbit model of embolic stroke. J Pharmacol Exp Ther. 264 (1), 67-73 (1993).
  26. Wu, D., et al. A clinically relevant model of focal embolic cerebral ischemia by thrombus and thrombolysis in rhesus monkeys. Nat Protoc. 17 (9), 2054-2084 (2022).
  27. Kuge, Y., et al. Serial changes in cerebral blood flow and flow-metabolism uncoupling in primates with acute thromboembolic stroke. J Cereb Blood Flow Metab. 21 (3), 202-210 (2001).

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

MRI

מאמרים קשורים